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Reacción en cadena de la polimerasa

Una tira de ocho tubos de PCR, cada uno de los cuales contiene 100 μl de mezcla de reacción.
Colocar una tira de ocho tubos de PCR en un termociclador

La reacción en cadena de la polimerasa ( PCR ) es un método ampliamente utilizado para hacer millones o miles de millones de copias de una muestra de ADN específica rápidamente, lo que permite a los científicos amplificar una muestra muy pequeña de ADN (o una parte de ella) lo suficiente como para permitir un estudio detallado. La PCR fue inventada en 1983 por el bioquímico estadounidense Kary Mullis de Cetus Corporation . Mullis y el bioquímico Michael Smith , que habían desarrollado otras formas esenciales de manipular el ADN, recibieron conjuntamente el Premio Nobel de Química en 1993. [1]

La PCR es fundamental para muchos de los procedimientos utilizados en las pruebas e investigaciones genéticas , incluido el análisis de muestras antiguas de ADN y la identificación de agentes infecciosos. Mediante la PCR, las copias de cantidades muy pequeñas de secuencias de ADN se amplifican exponencialmente en una serie de ciclos de cambios de temperatura. La PCR es ahora una técnica común y a menudo indispensable que se utiliza en la investigación de laboratorios médicos para una amplia variedad de aplicaciones, incluida la investigación biomédica y la ciencia forense . [2] [3]

La mayoría de los métodos de PCR se basan en ciclos térmicos . El ciclo térmico expone los reactivos a ciclos repetidos de calentamiento y enfriamiento para permitir diferentes reacciones dependientes de la temperatura, específicamente, fusión del ADN y replicación del ADN impulsada por enzimas . La PCR emplea dos reactivos principales: cebadores (que son fragmentos cortos de ADN monocatenario conocidos como oligonucleótidos que son una secuencia complementaria a la región de ADN objetivo) y una ADN polimerasa . En el primer paso de la PCR, las dos hebras de la doble hélice del ADN se separan físicamente a alta temperatura en un proceso llamado desnaturalización del ácido nucleico . En el segundo paso, se reduce la temperatura y los cebadores se unen a las secuencias complementarias de ADN. Luego, las dos cadenas de ADN se convierten en plantillas para que la ADN polimerasa ensamble enzimáticamente una nueva cadena de ADN a partir de nucleótidos libres , los componentes básicos del ADN. A medida que avanza la PCR, el ADN generado se utiliza como plantilla para la replicación, lo que pone en marcha una reacción en cadena en la que la plantilla de ADN original se amplifica exponencialmente .

Casi todas las aplicaciones de PCR emplean una ADN polimerasa termoestable, como la Taq polimerasa , una enzima originalmente aislada de la bacteria termófila Thermus Aquaticus . Si la polimerasa utilizada fuera sensible al calor, se desnaturalizaría bajo las altas temperaturas del paso de desnaturalización. Antes del uso de la Taq polimerasa, la ADN polimerasa tenía que agregarse manualmente en cada ciclo, lo cual era un proceso tedioso y costoso. [4]

Las aplicaciones de la técnica incluyen clonación de ADN para secuenciación , clonación y manipulación de genes, mutagénesis de genes; construcción de filogenias basadas en el ADN , o análisis funcional de genes ; diagnóstico y seguimiento de trastornos genéticos ; amplificación de ADN antiguo; [5] análisis de huellas genéticas para perfiles de ADN (por ejemplo, en ciencias forenses y pruebas de paternidad ); y detección de patógenos en pruebas de ácido nucleico para el diagnóstico de enfermedades infecciosas .

Principios

Un termociclador antiguo de tres temperaturas para PCR

La PCR amplifica una región específica de una cadena de ADN (el objetivo del ADN). La mayoría de los métodos de PCR amplifican fragmentos de ADN de entre 0,1 y 10 kilopares de bases (kpb) de longitud, aunque algunas técnicas permiten la amplificación de fragmentos de hasta 40 kpb. [6] La cantidad de producto amplificado está determinada por los sustratos disponibles en la reacción, lo que se vuelve limitante a medida que avanza la reacción. [7]

Una configuración básica de PCR requiere varios componentes y reactivos, [8] que incluyen:

La reacción se lleva a cabo comúnmente en un volumen de 10 a 200  μL en pequeños tubos de reacción (volúmenes de 0,2 a 0,5 ml) en un ciclador térmico . El termociclador calienta y enfría los tubos de reacción para alcanzar las temperaturas requeridas en cada paso de la reacción (ver más abajo). Muchos termocicladores modernos utilizan un dispositivo Peltier , que permite calentar y enfriar el bloque que contiene los tubos de PCR simplemente invirtiendo la corriente eléctrica del dispositivo. Los tubos de reacción de paredes delgadas permiten una conductividad térmica favorable para permitir un rápido equilibrio térmico. La mayoría de los termocicladores tienen tapas calentadas para evitar la condensación en la parte superior del tubo de reacción. Los termocicladores más antiguos que carecen de tapa calentada requieren una capa de aceite encima de la mezcla de reacción o una bola de cera dentro del tubo.

Procedimiento

Normalmente, la PCR consta de una serie de 20 a 40 cambios de temperatura repetidos, llamados ciclos térmicos, y cada ciclo suele constar de dos o tres pasos de temperatura discretos (consulte la figura siguiente). El ciclo suele estar precedido por un único paso de temperatura a una temperatura muy alta (>90 °C (194 °F)) y seguido de una retención al final para la extensión del producto final o un almacenamiento breve. Las temperaturas utilizadas y el tiempo que se aplican en cada ciclo dependen de una variedad de parámetros, incluida la enzima utilizada para la síntesis de ADN, la concentración de iones bivalentes y dNTP en la reacción y la temperatura de fusión ( Tm ) del cebadores. [12] Los pasos individuales comunes a la mayoría de los métodos de PCR son los siguientes:

Es fundamental determinar una temperatura adecuada para el paso de recocido porque la eficiencia y la especificidad se ven fuertemente afectadas por la temperatura de recocido. Esta temperatura debe ser lo suficientemente baja para permitir la hibridación del cebador con la hebra, pero lo suficientemente alta para que la hibridación sea específica, es decir, el cebador debe unirse sólo a una parte perfectamente complementaria de la hebra y a ningún otro lugar. Si la temperatura es demasiado baja, la imprimación puede adherirse de manera imperfecta. Si es demasiado alto, es posible que la imprimación no se adhiera en absoluto. Una temperatura de recocido típica es de aproximadamente 3 a 5 °C por debajo de la Tm de los cebadores utilizados. Los enlaces de hidrógeno estables entre bases complementarias se forman sólo cuando la secuencia del cebador coincide mucho con la secuencia del molde. Durante este paso, la polimerasa se une al híbrido cebador-molde y comienza la formación de ADN.
Los procesos de desnaturalización, recocido y elongación constituyen un ciclo único. Se requieren múltiples ciclos para amplificar el ADN objetivo a millones de copias. La fórmula utilizada para calcular el número de copias de ADN formadas después de un número determinado de ciclos es 2 n , donde n es el número de ciclos. Por tanto, una reacción programada para 30 ciclos da como resultado 2 30 , o 1.073.741.824, copias de la región objetivo del ADN bicatenario original.
Dibujo esquemático de un ciclo de PCR completo.
Dibujo esquemático de un ciclo de PCR completo.
Productos de PCR teñidos con bromuro de etidio después de electroforesis en gel . Se utilizaron dos conjuntos de cebadores para amplificar una secuencia diana de tres muestras de tejido diferentes. No hay amplificación presente en la muestra #1; Las bandas de ADN en las muestras 2 y 3 indican una amplificación exitosa de la secuencia objetivo. El gel también muestra un control positivo y una escalera de ADN que contiene fragmentos de ADN de longitud definida para dimensionar las bandas en las PCR experimentales.

Para comprobar si la PCR generó con éxito la región diana de ADN anticipada (también denominada a veces amplicón o amplicón ), se puede emplear electroforesis en gel de agarosa para la separación por tamaños de los productos de la PCR. El tamaño de los productos de PCR se determina comparándolo con una escalera de ADN , un marcador de peso molecular que contiene fragmentos de ADN de tamaños conocidos, que se encuentra en el gel junto con los productos de PCR.

PCR de Tucker

Etapas

amplificación exponencial

Como ocurre con otras reacciones químicas, la velocidad de reacción y la eficiencia de la PCR se ven afectadas por factores limitantes. Por lo tanto, todo el proceso de PCR se puede dividir en tres etapas según el progreso de la reacción:

Mejoramiento

En la práctica, la PCR puede fallar por diversos motivos, como sensibilidad o contaminación. [17] [18] La contaminación con ADN extraño puede dar lugar a productos espurios y se aborda con protocolos y procedimientos de laboratorio que separan las mezclas previas a la PCR de los posibles contaminantes de ADN. [8] Por ejemplo, si se analiza el ADN de la escena de un crimen, una sola molécula de ADN del personal del laboratorio podría amplificarse y desviar la investigación. Por lo tanto, las áreas de configuración de la PCR están separadas del análisis o purificación de otros productos de PCR, se utiliza material de plástico desechable y la superficie de trabajo entre las configuraciones de reacción debe limpiarse a fondo.

La especificidad se puede ajustar mediante condiciones experimentales para que no se generen productos espurios. Las técnicas de diseño de cebadores son importantes para mejorar el rendimiento del producto de PCR y evitar la formación de productos inespecíficos. El uso de componentes tampón alternativos o enzimas polimerasas puede ayudar con la amplificación de regiones de ADN largas o problemáticas. Por ejemplo, se dice que la polimerasa Q5 es aproximadamente 280 veces menos propensa a errores que la polimerasa Taq. [19] [20] Tanto los parámetros de ejecución (por ejemplo, temperatura y duración de los ciclos) como la adición de reactivos, como formamida , pueden aumentar la especificidad y el rendimiento de la PCR. [21] Se pueden realizar simulaciones por computadora de resultados teóricos de PCR ( PCR electrónica ) para ayudar en el diseño de cebadores. [22]

Aplicaciones

Aislamiento selectivo de ADN.

La PCR permite el aislamiento de fragmentos de ADN a partir de ADN genómico mediante la amplificación selectiva de una región específica de ADN. Este uso de la PCR aumenta muchas formas, como la generación de sondas de hibridación para la hibridación Southern o Northern y la clonación de ADN , que requieren mayores cantidades de ADN, que representan una región de ADN específica. La PCR proporciona a estas técnicas grandes cantidades de ADN puro, lo que permite el análisis de muestras de ADN incluso a partir de cantidades muy pequeñas de material de partida.

Otras aplicaciones de la PCR incluyen la secuenciación de ADN para determinar secuencias desconocidas amplificadas por PCR en las que uno de los cebadores de amplificación puede usarse en la secuenciación de Sanger , el aislamiento de una secuencia de ADN para acelerar las tecnologías de ADN recombinante que implican la inserción de una secuencia de ADN en un plásmido , un fago , o cósmido (según el tamaño) o el material genético de otro organismo. Las colonias bacterianas (como E. coli ) se pueden detectar rápidamente mediante PCR para detectar construcciones de vectores de ADN correctas . [23] La PCR también puede utilizarse para la toma de huellas genéticas ; una técnica forense utilizada para identificar a una persona u organismo comparando ADN experimental a través de diferentes métodos basados ​​en PCR.

Electroforesis de fragmentos de ADN amplificados por PCR:
  1. Padre
  2. Niño
  3. Madre

El niño ha heredado algunas, pero no todas, las huellas dactilares de cada uno de sus padres, lo que le otorga una huella dactilar nueva y única.

Algunos métodos de huellas dactilares por PCR tienen un alto poder discriminativo y pueden usarse para identificar relaciones genéticas entre individuos, como entre padres e hijos o entre hermanos, y se usan en pruebas de paternidad (Fig. 4). Esta técnica también se puede utilizar para determinar las relaciones evolutivas entre organismos cuando se utilizan ciertos relojes moleculares (es decir, los genes 16S rRNA y recA de los microorganismos). [24]

Amplificación y cuantificación de ADN.

Debido a que la PCR amplifica las regiones del ADN a las que se dirige, la PCR se puede utilizar para analizar cantidades extremadamente pequeñas de muestra. Esto suele ser fundamental para el análisis forense , cuando sólo se dispone de una pequeña cantidad de ADN como prueba. La PCR también se puede utilizar en el análisis de ADN antiguo que tiene decenas de miles de años. Estas técnicas basadas en PCR se han utilizado con éxito en animales, como un mamut de cuarenta mil años , y también en ADN humano, en aplicaciones que van desde el análisis de momias egipcias hasta la identificación de un zar ruso y el cuerpo de Rey inglés Ricardo III . [25]

Los métodos de PCR cuantitativa o PCR en tiempo real (qPCR, [26] que no debe confundirse con RT-PCR ) permiten estimar la cantidad de una secuencia determinada presente en una muestra, una técnica que a menudo se aplica para determinar cuantitativamente los niveles de expresión genética . La PCR cuantitativa es una herramienta establecida para la cuantificación de ADN que mide la acumulación de producto de ADN después de cada ronda de amplificación por PCR.

qPCR permite la cuantificación y detección de una secuencia de ADN específica en tiempo real ya que mide la concentración mientras se produce el proceso de síntesis. Existen dos métodos para la detección y cuantificación simultáneas. El primer método consiste en utilizar colorantes fluorescentes que se retienen de forma inespecífica entre las dobles hebras. El segundo método implica sondas que codifican secuencias específicas y están marcadas con fluorescencia. La detección de ADN mediante estos métodos sólo se puede realizar después de que se produce la hibridación de las sondas con su ADN complementario (ADNc). Una combinación de técnicas interesante es la PCR en tiempo real y la transcripción inversa. Esta sofisticada técnica, denominada RT-qPCR, permite cuantificar una pequeña cantidad de ARN. Mediante esta técnica combinada, el ARNm se convierte en ADNc, que se cuantifica aún más mediante qPCR. Esta técnica reduce la posibilidad de error en el punto final de la PCR, [27] aumentando las posibilidades de detección de genes asociados con enfermedades genéticas como el cáncer. [5] Los laboratorios utilizan RT-qPCR con el fin de medir con sensibilidad la regulación genética. Los fundamentos matemáticos para la cuantificación confiable de la PCR [28] y RT-qPCR [29] facilitan la implementación de procedimientos de ajuste precisos de datos experimentales en aplicaciones de investigación, médicas, de diagnóstico y de enfermedades infecciosas. [30] [31] [32] [33]

Aplicaciones médicas y de diagnóstico.

Los futuros padres pueden ser examinados para determinar si son portadores genéticos , o sus hijos pueden ser examinados para determinar si realmente están afectados por una enfermedad . [2] Las muestras de ADN para pruebas prenatales se pueden obtener mediante amniocentesis , muestreo de vellosidades coriónicas o incluso mediante el análisis de células fetales raras que circulan en el torrente sanguíneo de la madre. El análisis por PCR también es esencial para el diagnóstico genético previo a la implantación , donde se analizan células individuales de un embrión en desarrollo para detectar mutaciones.

Aplicaciones de enfermedades infecciosas

La PCR permite un diagnóstico rápido y muy específico de enfermedades infecciosas, incluidas las causadas por bacterias o virus. [36] La PCR también permite la identificación de microorganismos no cultivables o de crecimiento lento, como micobacterias , bacterias anaeróbicas o virus a partir de ensayos de cultivos de tejidos y modelos animales . La base de las aplicaciones de diagnóstico por PCR en microbiología es la detección de agentes infecciosos y la discriminación entre cepas no patógenas y patógenas en virtud de genes específicos. [36] [37]

La PCR ha revolucionado la caracterización y detección de organismos patógenos de las siguientes maneras:

Aplicaciones forenses

El desarrollo de protocolos de toma de huellas dactilares genéticas (o ADN ) basados ​​en PCR ha tenido una aplicación generalizada en medicina forense :

Aplicaciones de investigación

La PCR se ha aplicado a muchas áreas de investigación en genética molecular:

Ventajas

La PCR tiene una serie de ventajas. Es bastante sencillo de entender y utilizar y produce resultados rápidamente. La técnica es muy sensible y tiene el potencial de producir de millones a miles de millones de copias de un producto específico para secuenciación, clonación y análisis. qRT-PCR comparte las mismas ventajas que la PCR, con la ventaja adicional de la cuantificación del producto sintetizado. Por lo tanto, tiene sus usos para analizar alteraciones de los niveles de expresión genética en tumores, microbios u otros estados patológicos. [27]

La PCR es una herramienta de investigación muy poderosa y práctica. La PCR está determinando la secuenciación de etiologías desconocidas de muchas enfermedades. La técnica puede ayudar a identificar la secuencia de virus previamente desconocidos relacionados con los ya conocidos y así darnos una mejor comprensión de la enfermedad en sí. Si el procedimiento se puede simplificar aún más y se pueden desarrollar sistemas sensibles de detección no radiométrica, la PCR ocupará un lugar destacado en el laboratorio clínico en los próximos años. [dieciséis]

Limitaciones

Una limitación importante de la PCR es que es necesaria información previa sobre la secuencia diana para generar los cebadores que permitirán su amplificación selectiva. [27] Esto significa que, normalmente, los usuarios de PCR deben conocer las secuencias precisas aguas arriba de la región objetivo en cada una de las dos plantillas monocatenarias para garantizar que la ADN polimerasa se una adecuadamente a los híbridos cebador-plantilla y Posteriormente genera toda la región objetivo durante la síntesis de ADN.

Como todas las enzimas, las ADN polimerasas también son propensas a errores, lo que a su vez provoca mutaciones en los fragmentos de PCR que se generan. [44]

Otra limitación de la PCR es que incluso la cantidad más pequeña de ADN contaminante puede amplificarse, lo que produce resultados engañosos o ambiguos. Para minimizar la posibilidad de contaminación, los investigadores deben reservar salas separadas para la preparación de reactivos, la PCR y el análisis del producto. Los reactivos se deben dispensar en alícuotas de un solo uso . Se deben utilizar habitualmente pipetas con émbolos desechables y puntas de pipeta extralargas. [16] Además, se recomienda garantizar que la configuración del laboratorio siga un flujo de trabajo unidireccional. Ningún material o reactivo utilizado en las salas de análisis y PCR debe llevarse nunca a la sala de preparación de PCR sin una descontaminación exhaustiva. [45]

Las muestras ambientales que contienen ácidos húmicos pueden inhibir la amplificación por PCR y generar resultados inexactos.

Variaciones

Historia

Representación esquemática de un par de cebadores de ejemplo. El uso de cebadores en un ensayo in vitro para permitir la síntesis de ADN fue una innovación importante que permitió el desarrollo de la PCR.

Las enzimas resistentes al calor que son un componente clave en la reacción en cadena de la polimerasa se descubrieron en la década de 1960 como producto de una forma de vida microbiana que vivía en las aguas sobrecalentadas del Mushroom Spring de Yellowstone . [81]

Un artículo de 1971 en el Journal of Molecular Biology de Kjell Kleppe y sus colaboradores en el laboratorio de H. Gobind Khorana describió por primera vez un método de uso de un ensayo enzimático para replicar una plantilla corta de ADN con cebadores in vitro . [82] Sin embargo, esta manifestación temprana del principio básico de la PCR no recibió mucha atención en ese momento y la invención de la reacción en cadena de la polimerasa en 1983 generalmente se atribuye a Kary Mullis . [83] [ página necesaria ]

"Baby Blue", un prototipo de máquina de 1986 para hacer PCR

Cuando Mullis desarrolló la PCR en 1983, trabajaba en Emeryville , California, para Cetus Corporation , una de las primeras empresas de biotecnología , donde era responsable de sintetizar cadenas cortas de ADN. Mullis ha escrito que concibió la idea de la PCR mientras recorría la autopista de la costa del Pacífico una noche en su automóvil. [84] Estaba jugando en su mente con una nueva forma de analizar cambios (mutaciones) en el ADN cuando se dio cuenta de que, en cambio, había inventado un método para amplificar cualquier región del ADN a través de ciclos repetidos de duplicación impulsados ​​por la ADN polimerasa. En Scientific American , Mullis resumió el procedimiento: "A partir de una sola molécula del material genético ADN, la PCR puede generar 100 mil millones de moléculas similares en una tarde. La reacción es fácil de ejecutar. No requiere más que un tubo de ensayo, un pocos reactivos simples y una fuente de calor." [85] Las huellas dactilares de ADN se utilizaron por primera vez para pruebas de paternidad en 1988. [86]

Mullis ha acreditado su uso de LSD como parte integral de su desarrollo de la PCR: "¿Habría inventado la PCR si no hubiera tomado LSD? Lo dudo seriamente. Podría sentarme en una molécula de ADN y ver pasar los polímeros. Aprendí eso en parte con drogas psicodélicas." [87]

Mullis y el bioquímico Michael Smith , que habían desarrollado otras formas esenciales de manipular el ADN, [1] recibieron conjuntamente el Premio Nobel de Química en 1993, siete años después de que Mullis y sus colegas de Cetus pusieran en práctica su propuesta por primera vez. [88] El artículo de Mullis de 1985 con RK Saiki y HA Erlich, "Enzymatic Amplification of β-globin Genomic Sequences and Restriction Site Analysis for Diagnosis of Sickle Cell Anemia", la invención de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), recibió una Mención por Química. Premio Breakthrough de la División de Historia de la Química de la Sociedad Química Estadounidense en 2017. [89] [2]

El núcleo del método de PCR es el uso de una ADN polimerasa adecuada capaz de soportar las altas temperaturas de >90 °C (194 °F) necesarias para la separación de las dos cadenas de ADN en la doble hélice de ADN después de cada ciclo de replicación . Las ADN polimerasas utilizadas inicialmente para los experimentos in vitro que precedieron a la PCR no pudieron soportar estas altas temperaturas. [2] Por lo tanto, los primeros procedimientos para la replicación del ADN eran muy ineficientes y requerían mucho tiempo, y requerían grandes cantidades de ADN polimerasa y un manejo continuo durante todo el proceso.

El descubrimiento en 1976 de la polimerasa Taq , una ADN polimerasa purificada de la bacteria termófila Thermus acuáticos , que vive naturalmente en ambientes cálidos (50 a 80 °C (122 a 176 °F)) [14] , como aguas termales, allanó el camino para camino para mejoras espectaculares del método PCR. La ADN polimerasa aislada de T. Aquaticus es estable a altas temperaturas y permanece activa incluso después de la desnaturalización del ADN, [15] obviando así la necesidad de agregar nueva ADN polimerasa después de cada ciclo. [3] Esto permitió un proceso automatizado basado en termociclador para la amplificación del ADN.

Disputas de patentes

La técnica de PCR fue patentada por Kary Mullis y asignada a Cetus Corporation , donde trabajaba Mullis cuando inventó la técnica en 1983. La enzima Taq polimerasa también estaba cubierta por patentes. Ha habido varias demandas de alto perfil relacionadas con esta técnica, incluida una demanda fallida [90] presentada por DuPont . La empresa farmacéutica suiza Hoffmann-La Roche compró los derechos de las patentes en 1992. La última de las patentes comerciales de PCR expiró en 2017. [91]

Aún está en curso una batalla por una patente relacionada con la enzima Taq polimerasa [¿ a partir de? ] en varias jurisdicciones alrededor del mundo entre Roche y Promega . Los argumentos jurídicos se han extendido más allá de la vigencia de las patentes originales de PCR y Taq polimerasa, que expiraron el 28 de marzo de 2005. [92]

Ver también

Referencias

  1. ^ ab "El Premio Nobel de Química 1993". Premio Nobel.org .
  2. ^ abcd Saiki RK, Scharf S, Faloona F, Mullis KB, Horn GT, Erlich HA, Arnheim N (diciembre de 1985). "Amplificación enzimática de secuencias genómicas de beta-globina y análisis del sitio de restricción para el diagnóstico de anemia falciforme". Ciencia . 230 (4732): 1350–54. Código Bib : 1985 Ciencia... 230.1350S. doi : 10.1126/ciencia.2999980. PMID  2999980.
  3. ^ ab Saiki RK, Gelfand DH, Stoffel S, Scharf SJ, Higuchi R, Horn GT y col. (Enero de 1988). "Amplificación enzimática de ADN dirigida por cebador con una ADN polimerasa termoestable". Ciencia . 239 (4839): 487–91. Código bibliográfico : 1988 Ciencia... 239..487S. doi : 10.1126/ciencia.239.4839.487. PMID  2448875.
  4. ^ Enners, Eduardo; Porta, Ángela R. (2012). "Determinación de las temperaturas de recocido para la reacción en cadena de la polimerasa". El profesor de biología estadounidense . 74 (4): 256–60. doi :10.1525/abt.2012.74.4.9. S2CID  86708426.
  5. ^ abcdef Ninfa, Alejandro; Ballou, David; Benore, Marilee (2009). Enfoques fundamentales de laboratorio para bioquímica y biotecnología . Estados Unidos: Wiley. págs. 408–10. ISBN 978-0-470-08766-4.
  6. ^ Cheng S, Fockler C, Barnes WM, Higuchi R (junio de 1994). "Amplificación eficaz de dianas largas a partir de insertos clonados y ADN genómico humano". Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América . 91 (12): 5695–99. Código bibliográfico : 1994PNAS...91.5695C. doi : 10.1073/pnas.91.12.5695 . PMC 44063 . PMID  8202550. 
  7. ^ Carr AC, Moore SD (2012). Lucía A (ed.). "Cuantificación robusta de reacciones en cadena de la polimerasa mediante ajuste global". MÁS UNO . 7 (5): e37640. Código Bib : 2012PLoSO...737640C. doi : 10.1371/journal.pone.0037640 . PMC 3365123 . PMID  22701526. 
  8. ^ ab Joseph Sambrook y David W. Russel (2001). Clonación molecular: manual de laboratorio (tercera ed.). Cold Spring Harbor, Nueva York: Cold Spring Harbor Laboratory Press. ISBN 978-0-879-69576-7.Capítulo 8: Amplificación in vitro del ADN mediante la reacción en cadena de la polimerasa
  9. ^ "Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)". Centro Nacional de Información Biotecnológica, Biblioteca Nacional de Medicina de EE. UU.
  10. ^ "PCR". Centro de Aprendizaje de Ciencias Genéticas, Universidad de Utah .
  11. ^ Pavlov AR, Pavlova NV, Kozyavkin SA, Slesarev AI (mayo de 2004). "Desarrollos recientes en la optimización de ADN polimerasas termoestables para aplicaciones eficientes". Tendencias en Biotecnología . 22 (5): 253–60. doi :10.1016/j.tibtech.2004.02.011. PMID  15109812.
  12. ^ Rychlik W, Spencer WJ, Rhoads RE (noviembre de 1990). "Optimización de la temperatura de recocido para la amplificación de ADN in vitro". Investigación de ácidos nucleicos . 18 (21): 6409–12. doi : 10.1093/nar/18.21.6409. PMC 332522 . PMID  2243783. 
  13. ^ ab Sharkey DJ, Scalice ER, Christy KG, Atwood SM, Daiss JL (mayo de 1994). "Anticuerpos como interruptores termolábiles: activación por alta temperatura de la reacción en cadena de la polimerasa". Bio/Tecnología . 12 (5): 506–09. doi :10.1038/nbt0594-506. PMID  7764710. S2CID  2885453.
  14. ^ ab Chien A, Edgar DB, Trela ​​JM (septiembre de 1976). "Pomerasa del ácido desoxirribonucleico del termófilo extremo Thermus acuáticos". Revista de Bacteriología . 127 (3): 1550–57. doi :10.1128/jb.127.3.1550-1557.1976. PMC 232952 . PMID  8432. 
  15. ^ ab Lawyer FC, Stoffel S, Saiki RK, Chang SY, Landre PA, Abramson RD, Gelfand DH (mayo de 1993). "Expresión de alto nivel, purificación y caracterización enzimática de la ADN polimerasa de Thermus Aquaticus de longitud completa y una forma truncada deficiente en la actividad exonucleasa 5 'a 3'". Métodos y aplicaciones de PCR . 2 (4): 275–87. doi : 10.1101/gr.2.4.275 . PMID  8324500.
  16. ^ abcd Schochetman G, Ou CY, Jones WK (diciembre de 1988). "Reacción en cadena de la polimerasa". La revista de enfermedades infecciosas . 158 (6): 1154–57. doi :10.1093/infdis/158.6.1154. JSTOR  30137034. PMID  2461996.
  17. ^ Borman, Jon; Schuster, David; Li, Wu-bo; Jessee, Joel; Rashtchian, Ayoub (2000). "PCR a partir de plantillas problemáticas" (PDF) . Enfocar . 22 (1): 10. Archivado desde el original (PDF) el 7 de marzo de 2017.
  18. ^ Bogetto, Prachi; Waidne, Lisa; Anderson, acebo (2000). "Consejos útiles para PCR" (PDF) . Enfocar . 22 (1): 12. Archivado desde el original (PDF) el 7 de marzo de 2017.
  19. ^ Biolabs, Nueva Inglaterra. "ADN polimerasa de alta fidelidad Q5® | NEB". www.neb.com . Consultado el 4 de diciembre de 2021 .
  20. ^ Sze, Marc A.; Schloss, Patrick D. (2019). "El impacto de la ADN polimerasa y el número de rondas de amplificación en PCR en datos de secuencia del gen 16S rRNA". mEsfera . 4 (3): e00163–19. doi : 10.1128/mSphere.00163-19. PMC 6531881 . PMID  31118299. 
  21. ^ Sarkar G, Kapelner S, Sommer SS (diciembre de 1990). "La formamida puede mejorar drásticamente la especificidad de la PCR". Investigación de ácidos nucleicos . 18 (24): 7465. doi : 10.1093/nar/18.24.7465. PMC 332902 . PMID  2259646. 
  22. ^ "PCR electrónica". NCBI - Centro Nacional de Información Biotecnológica . Consultado el 13 de marzo de 2012 .
  23. ^ Pavlov AR, Pavlova NV, Kozyavkin SA, Slesarev AI (2006). "ADN polimerasas termoestables para un amplio espectro de aplicaciones: comparación de un TopoTaq híbrido robusto con otras enzimas". En Kieleczawa J (ed.). Secuenciación de ADN II: optimización de la preparación y limpieza . Jones y Bartlett. págs. 241–57. ISBN 978-0-7637-3383-4.
  24. ^ Pombert JF, Sistek V, Boissinot M, Frenette M (octubre de 2009). "Relaciones evolutivas entre estreptococos salivarius según se infieren a partir de filogenias multilocus basadas en secuencias de genes recA, secA y secY que codifican el ARNr 16S". Microbiología BMC . 9 : 232. doi : 10.1186/1471-2180-9-232 . PMC 2777182 . PMID  19878555. 
  25. ^ "Síntesis química, secuenciación y amplificación de ADN (notas de clase sobre MBB/BIO 343)". Universidad del estado de Arizona. Archivado desde el original el 9 de octubre de 1997 . Consultado el 29 de octubre de 2007 .
  26. ^ Bustin SA, Benes V, Garson JA, Hellemans J, Huggett J, Kubista M, et al. (Abril de 2009). "Las directrices MIQE: información mínima para la publicación de experimentos cuantitativos de PCR en tiempo real" (PDF) . Química Clínica . 55 (4): 611–22. doi : 10.1373/clinchem.2008.112797 . PMID  19246619.
  27. ^ abcd Garibyan L, Avashia N (marzo de 2013). "Reacción en cadena de la polimerasa". La Revista de Dermatología de Investigación . 133 (3): 1–4. doi :10.1038/jid.2013.1. PMC 4102308 . PMID  23399825. 
  28. ^ Schnell, S.; Mendoza, C. (octubre de 1997). "Descripción teórica de la reacción en cadena de la polimerasa". Revista de Biología Teórica . 188 (3): 313–18. Código Bib : 1997JThBi.188..313S. doi :10.1006/jtbi.1997.0473. PMID  9344735.
  29. ^ Schnell, S.; Mendoza, C. (21 de febrero de 1997). "Consideraciones enzimológicas para la descripción teórica de la reacción en cadena de la polimerasa competitiva cuantitativa (QC-PCR)". Revista de Biología Teórica . 184 (4): 433–40. Código Bib : 1997JThBi.184..433S. doi :10.1006/jtbi.1996.0283. ISSN  0022-5193. PMID  9082073.
  30. ^ Becker, Sven; Böger, Peter; Oehlmann, Ralfh; Ernst, Anneliese (1 de noviembre de 2000). "Sesgo de la PCR en el análisis ecológico: un estudio de caso para ensayos cuantitativos de Taq nucleasa en análisis de comunidades microbianas". Microbiología Aplicada y Ambiental . 66 (11): 4945–53. Código Bib : 2000ApEnM..66.4945B. doi :10.1128/AEM.66.11.4945-4953.2000. ISSN  1098-5336. PMC 92404 . PMID  11055948. 
  31. ^ Salomón, Anthony W.; Pelado, Rosanna W.; Fomentar, Allen; Mabey, David CW (1 de octubre de 2004). "Diagnóstico y valoración del tracoma". Reseñas de microbiología clínica . 17 (4): 982–1011. doi :10.1128/CMR.17.4.982-1011.2004. ISSN  0893-8512. PMC 523557 . PMID  15489358. 
  32. ^ Ramzy, Reda MR (abril de 2002). "Avances recientes en técnicas de diagnóstico molecular de la filariasis linfática humana y su uso en la investigación epidemiológica". Transacciones de la Real Sociedad de Medicina e Higiene Tropical . 96 : S225-29. doi :10.1016/S0035-9203(02)90080-5. PMID  12055843.
  33. ^ Sachse, Konrad (2003). "Especificidad y rendimiento de los ensayos de diagnóstico por PCR". En Sajonia, Konrad; Frey, Joaquín (eds.). Detección por PCR de patógenos microbianos . Métodos en biología molecular. vol. 216. Totowa, Nueva Jersey: Humana Press. págs. 3–29. doi :10.1385/1-59259-344-5:03. ISBN 978-1-59259-344-6. PMID  12512353.
  34. ^ Quill E (marzo de 2008). "Medicina. La comparación de sangre se vuelve genética". Ciencia . 319 (5869): 1478–79. doi : 10.1126/ciencia.319.5869.1478. PMID  18339916. S2CID  36945291.
  35. ^ Tomar, Rukam (2010). Marcadores Moleculares y Biotecnología Vegetal . Pitman Pura, Nueva Delhi: Agencia Editorial New India. pag. 188.ISBN _ 978-93-80235-25-7.
  36. ^ abc Cai HY, Caswell JL, Prescott JF (marzo de 2014). "Técnicas moleculares sin cultivo para el diagnóstico de enfermedades bacterianas en animales: una perspectiva de laboratorio de diagnóstico". Patología Veterinaria . 51 (2): 341–50. doi : 10.1177/0300985813511132 . PMID  24569613.
  37. ^ Salis AD (2009). "Aplicaciones en Microbiología Clínica". PCR en tiempo real: tecnología y aplicaciones actuales . Prensa académica Caister. ISBN 978-1-904455-39-4.
  38. ^ Kwok S, Mack DH, Mullis KB, Poiesz B, Ehrlich G, Blair D, et al. (mayo de 1987). "Identificación de secuencias del virus de la inmunodeficiencia humana mediante amplificación enzimática in vitro y detección de escisión de oligómeros". Revista de Virología . 61 (5): 1690–94. doi :10.1128/jvi.61.5.1690-1694.1987. PMC 254157 . PMID  2437321. 
  39. ^ "Coronavirus: la prueba del viaje dei". Instituto Superior de Sanidad .
  40. ^ Dedo, Horst; Von Koenig, Carl Heinz Wirsing (1996). Barón, Samuel (ed.). Microbiología médica (4ª ed.). Galveston, TX: Rama Médica de la Universidad de Texas en Galveston. ISBN 978-0-9631172-1-2. PMID  21413270.
  41. ^ Sí, Sylvia H.; Visón, ChrisAnna M. (2012). "Bordetella pertussis y tos ferina (tos ferina)". Enfermedades infecciosas de Netter . págs. 11-14. doi :10.1016/B978-1-4377-0126-5.00003-3. ISBN 978-1-4377-0126-5.
  42. ^ Alonso A, Martín P, Albarrán C, García P, García O, de Simón LF, et al. (Enero de 2004). "Diseños de PCR en tiempo real para estimar el número de copias de ADN nuclear y mitocondrial en estudios forenses y de ADN antiguo". Internacional de Ciencias Forenses . 139 (2–3): 141–49. doi :10.1016/j.forsciint.2003.10.008. PMID  15040907.
  43. ^ Boehnke M, Arnheim N, Li H, Collins FS (julio de 1989). "Mapeo genético de estructura fina de los cromosomas humanos utilizando la reacción en cadena de la polimerasa en un solo espermatozoide: consideraciones de diseño experimental". Revista Estadounidense de Genética Humana . 45 (1): 21–32. PMC 1683385 . PMID  2568090. 
  44. ^ Zhou YH, Zhang XP, Ebright RH (noviembre de 1991). "Mutagénesis aleatoria de moléculas de ADN del tamaño de un gen mediante el uso de PCR con ADN polimerasa Taq". Investigación de ácidos nucleicos . 19 (21): 6052. doi : 10.1093/nar/19.21.6052. PMC 329070 . PMID  1658751. 
  45. ^ Stursberg, Stephanie (2021). "Montar un laboratorio de PCR desde cero". INTEGRA Biociencias .
  46. ^ Bulduk, BK y col. (Marzo de 2020). "Una nueva estrategia de PCR con sistema de mutación refractaria a la amplificación para detectar variantes patógenas de MT-TL1 en repositorios de pacientes". Biomarcadores Mol de prueba genética . 24 (3): 165-170. doi : 10.1089/gtmb.2019.0079. PMID  32167396. S2CID  212693790.
  47. ^ Newton CR, Graham A, Heptinstall LE, Powell SJ, Summers C, Kalsheker N, et al. (Abril de 1989). "Análisis de cualquier mutación puntual en el ADN. El sistema de mutación refractaria a la amplificación (ARMS)". Investigación de ácidos nucleicos . 17 (7): 2503–16. doi :10.1093/nar/17.7.2503. PMC 317639 . PMID  2785681. 
  48. ^ Stemmer WP, Crameri A, Ha KD, Brennan TM, Heyneker HL (octubre de 1995). "Ensamblaje en un solo paso de un gen y un plásmido completo a partir de una gran cantidad de oligodesoxirribonucleótidos". Gen. _ 164 (1): 49–53. doi :10.1016/0378-1119(95)00511-4. PMID  7590320.
  49. ^ Innis MA, Myambo KB, Gelfand DH, Brow MA (diciembre de 1988). "Secuenciación de ADN con ADN polimerasa de Thermus Aquaticus y secuenciación directa de ADN amplificado por reacción en cadena de la polimerasa". Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América . 85 (24): 9436–40. Código bibliográfico : 1988PNAS...85.9436I. doi : 10.1073/pnas.85.24.9436 . PMC 282767 . PMID  3200828. 
  50. ^ Pierce KE, Wangh LJ (2007). "Reacción en cadena de la polimerasa lineal después de la exponencial y tecnologías afines". Diagnóstico unicelular . Métodos en Medicina Molecular. vol. 132, págs. 65–85. doi :10.1007/978-1-59745-298-4_7. ISBN 978-1-58829-578-1. PMID  17876077.
  51. ^ Krishnan M , Ugaz VM, Burns MA (octubre de 2002). "PCR en una celda de convección Rayleigh-Bénard". Ciencia . 298 (5594): 793. doi :10.1126/science.298.5594.793. PMID  12399582.
  52. ^ Priye A, Hassan YA, Ugaz VM (noviembre de 2013). "La advección caótica a microescala permite una replicación convectiva robusta del ADN". Química analítica . 85 (21): 10536–41. doi :10.1021/ac402611s. PMID  24083802.
  53. ^ Schwartz JJ, Lee C, Shendure J (septiembre de 2012). "Síntesis de genes precisa con recuperación dirigida por etiquetas de moléculas de ADN con secuencia verificada". Métodos de la naturaleza . 9 (9): 913–15. doi :10.1038/nmeth.2137. PMC 3433648 . PMID  22886093. 
  54. ^ Vincent M, Xu Y, Kong H (agosto de 2004). "Amplificación de ADN isotérmica dependiente de helicasa". Informes EMBO . 5 (8): 795–800. doi :10.1038/sj.embor.7400200. PMC 1249482 . PMID  15247927. 
  55. ^ Chou Q, Russell M, Birch DE, Raymond J, Bloch W (abril de 1992). "La prevención del cebado incorrecto y la dimerización del cebador antes de la PCR mejora las amplificaciones con un número de copias bajo". Investigación de ácidos nucleicos . 20 (7): 1717–23. doi :10.1093/nar/20.7.1717. PMC 312262 . PMID  1579465. 
  56. ^ Kellogg DE, Rybalkin I, Chen S, Mukhamedova N, Vlasik T, Siebert PD, Chenchik A (junio de 1994). "Anticuerpo TaqStart: PCR de" inicio en caliente "facilitada por un anticuerpo monoclonal neutralizante dirigido contra la ADN polimerasa Taq". BioTécnicas . 16 (6): 1134–37. PMID  8074881.
  57. ^ San Millán RM, Martínez-Ballesteros I, Rementeria A, Garaizar J, Bikandi J (diciembre de 2013). "Ejercicio online para el diseño y simulación de experimentos de PCR y PCR-RFLP". Notas de investigación de BMC . 6 : 513. doi : 10.1186/1756-0500-6-513 . PMC 4029544 . PMID  24314313. 
  58. ^ Zietkiewicz E, Rafalski A, Labuda D (marzo de 1994). "Identificación del genoma mediante amplificación de la reacción en cadena de la polimerasa anclada a repetición de secuencia simple (SSR)". Genómica . 20 (2): 176–83. doi :10.1006/geno.1994.1151. PMID  8020964. S2CID  41802285.
  59. ^ Ochman H, Gerber AS, Hartl DL (noviembre de 1988). "Aplicaciones genéticas de una reacción en cadena de la polimerasa inversa". Genética . 120 (3): 621–23. doi :10.1093/genética/120.3.621. PMC 1203539 . PMID  2852134. 
  60. ^ Mueller PR, Wold B (noviembre de 1989). "Huella in vivo de un potenciador específico de músculo mediante PCR mediada por ligadura". Ciencia . 246 (4931): 780–86. Código bibliográfico : 1989 Ciencia... 246..780M. doi :10.1126/ciencia.2814500. PMID  2814500.
  61. ^ Herman JG , Graff JR, Myöhänen S, Nelkin BD, Baylin SB (septiembre de 1996). "PCR específica de metilación: un nuevo ensayo de PCR para el estado de metilación de islas CpG". Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América . 93 (18): 9821–26. Código bibliográfico : 1996PNAS...93.9821H. doi : 10.1073/pnas.93.18.9821 . PMC 38513 . PMID  8790415. 
  62. ^ Isenbarger TA, Finney M, Ríos-Velázquez C, Handelsman J, Ruvkun G (febrero de 2008). "Miniprimer PCR, una nueva lente para visualizar el mundo microbiano". Microbiología Aplicada y Ambiental . 74 (3): 840–49. Código Bib : 2008ApEnM..74..840I. doi :10.1128/AEM.01933-07. PMC 2227730 . PMID  18083877. 
  63. ^ Shen C, Yang W, Ji Q, Maki H, Dong A, Zhang Z (noviembre de 2009). "Observación por nanoPCR: diferentes niveles de fidelidad de replicación del ADN en reacciones en cadena de la polimerasa mejoradas con nanopartículas". Nanotecnología . 20 (45): 455103. Código bibliográfico : 2009Nanot..20S5103S. doi :10.1088/0957-4484/20/45/455103. PMID  19822925. S2CID  3393115.
  64. ^ Shen, Cenchao (2013). "Una descripción general de la tecnología de reacción en cadena de la polimerasa asistida por nanopartículas". Bio-Nanotecnología . EE.UU.: Wiley-Blackwell Publishing Ltd. págs. 97-106. doi :10.1002/9781118451915.ch5. ISBN 978-1-118-45191-5.
  65. ^ Horton RM, Hunt HD, Ho SN, Pullen JK, Pease LR (abril de 1989). "Ingeniería de genes híbridos sin el uso de enzimas de restricción: empalme de genes por extensión de superposición". Gen. _ 77 (1): 61–68. doi :10.1016/0378-1119(89)90359-4. PMID  2744488.
  66. ^ Moller, Simón (2006). PCR: conceptos básicos . Estados Unidos: Grupo Taylor & Francis. pag. 144.ISBN _ 978-0-415-35547-6.
  67. ^ David F, Turlotte E (noviembre de 1998). "[Un método de amplificación isotérmica de genes]" [Un método de amplificación isotérmica]. Cuentas Rendus de la Academia de Ciencias, Serie III . 321 (11): 909–14. Código Bib : 1998CRASG.321..909D. doi :10.1016/S0764-4469(99)80005-5. PMID  9879470.
  68. ^ Fabrice David (septiembre-octubre de 2002). "Utiliser les propriétés topologiques de l'ADN: une nouvelle arme contre les agentes patógenos" (PDF) . Fusión. Archivado desde el original (PDF) el 28 de noviembre de 2007.(en francés)
  69. ^ Yang, alegría Y.; Brooks, Shelise; Meyer, Jennifer A.; Blakesley, Robert R.; Zelazny, Adrián M.; Segre, Julia A.; Snitkin, Evan S. (2013). "Pan-PCR, un método computacional para diseñar ensayos de tipificación de bacterias basados ​​en datos de secuencia del genoma completo". Revista de Microbiología Clínica . 51 (3): 752–758. doi : 10.1128/jcm.02671-12 . PMC 3592046 . PMID  23254127. 
  70. ^ Dobosy JR, Rose SD, Beltz KR, Rupp SM, Powers KM, Behlke MA, Walder JA (agosto de 2011). "PCR dependiente de RNasa H (rhPCR): especificidad mejorada y detección de polimorfismo de un solo nucleótido utilizando cebadores escindibles bloqueados". BMC Biotecnología . 11 : 80. doi : 10.1186/1472-6750-11-80 . PMC 3224242 . PMID  21831278. 
  71. ^ Shyamala, V.; Ferro-Luzzi Ames, G. (1993). "Reacción en cadena de la polimerasa con cebador específico único (SSP-PCR) y recorrido del genoma". Protocolos de PCR . Métodos en biología molecular. vol. 15. págs. 339–48. doi :10.1385/0-89603-244-2:339. ISBN 978-0-89603-244-6. PMID  21400290.
  72. ^ Bing DH, Boles C, Rehman FN, Audeh M, Belmarsh M, Kelley B, Adams CP (1996). "Amplificación de puentes: un sistema de PCR en fase sólida para la amplificación y detección de diferencias alélicas en genes de copia única". Actas de la conferencia sobre identidad genética, Séptimo Simposio internacional sobre identificación humana . Archivado desde el original el 7 de mayo de 2001.
  73. ^ Khan Z, Poetter K, Park DJ (abril de 2008). "PCR en fase sólida mejorada: mecanismos para aumentar el cebado mediante cebadores de soporte sólido". Bioquímica Analítica . 375 (2): 391–93. doi :10.1016/j.ab.2008.01.021. PMID  18267099.
  74. ^ Raoult D, Aboudharam G, Crubézy E, Larrouy G, Ludes B, Drancourt M (noviembre de 2000). "Identificación molecular mediante" PCR suicida "de Yersinia pestis como agente de la peste negra medieval". Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América . 97 (23): 12800–03. Código Bib : 2000PNAS...9712800R. doi : 10.1073/pnas.220225197 . PMC 18844 . PMID  11058154. 
  75. ^ Liu YG, Whittier RF (febrero de 1995). "PCR entrelazada térmicamente asimétrica: amplificación y secuenciación automatizables de fragmentos del extremo del inserto de clones P1 y YAC para el recorrido cromosómico". Genómica . 25 (3): 674–81. doi :10.1016/0888-7543(95)80010-J. PMID  7759102.
  76. ^ Don RH, Cox PT, Wainwright BJ, Baker K, Mattick JS (julio de 1991). "'PCR de aterrizaje para evitar el cebado espurio durante la amplificación de genes ". Investigación de ácidos nucleicos . 19 (14): 4008. doi : 10.1093/nar/19.14.4008. PMC 328507 . PMID  1861999. 
  77. ^ Myrick KV, Gelbart WM (febrero de 2002). "Universal Fast Walking para la determinación directa y versátil de la secuencia de flanqueo". Gen. _ 284 (1–2): 125–31. doi :10.1016/S0378-1119(02)00384-0. PMID  11891053.
  78. ^ "Texto completo - LaNe RAGE: una nueva herramienta para la determinación de la secuencia flanqueante del ADN genómico". www.ejbiotecnología.info .
  79. ^ Parque DJ (enero de 2005). "Un nuevo exón GAPDH murino terminal 5 'identificado utilizando 5'RACE LaNe". Biotecnología Molecular . 29 (1): 39–46. doi :10.1385/MB:29:1:39. PMID  15668518. S2CID  45702164.
  80. ^ Parque DJ (abril de 2004). "3 'RACE LaNe: un método de PCR completamente anidado simple y rápido para determinar la secuencia de ADNc del terminal 3'". BioTécnicas . 36 (4): 586–88, 590. doi : 10.2144/04364BM04 . PMID  15088375.
  81. ^ "El ingrediente clave en las pruebas de coronavirus proviene de los lagos de Yellowstone". Ciencia . 31 de marzo de 2020. Archivado desde el original el 31 de marzo de 2020 . Consultado el 13 de mayo de 2020 .
  82. ^ Kleppe K, Ohtsuka E, Kleppe R, Molineux I, Khorana HG (marzo de 1971). "Estudios sobre polinucleótidos. XCVI. Reparación de replicaciones de ADN sintético corto catalizado por ADN polimerasas". Revista de biología molecular . 56 (2): 341–61. doi :10.1016/0022-2836(71)90469-4. PMID  4927950.
  83. ^ Rabinow, Paul (1996). Fabricación de PCR: una historia de biotecnología . Chicago: Prensa de la Universidad de Chicago. ISBN 978-0-226-70146-2.
  84. ^ Mullis, Kary (1998). Bailando desnudo en el campo mental . Nueva York: Pantheon Books. ISBN 978-0-679-44255-4.
  85. ^ Mullis KB (abril de 1990). "El origen inusual de la reacción en cadena de la polimerasa". Científico americano . 262 (4): 56–61, 64–65. Código bibliográfico : 1990SciAm.262d..56M. doi : 10.1038/scientificamerican0490-56. PMID  2315679.
  86. ^ Patidar M, Agrawal S, Parveen F, Khare P (2015). "Conocimientos moleculares de la saliva para resolver la disputa de paternidad". Revista de Ciencias Odontológicas Forenses . 7 (1): 76–79. doi : 10.4103/0975-1475.150325 . PMC 4330625 . PMID  25709326. 
  87. ^ Nichols D, Barker E (2016). "Psicodélicos". Revisiones farmacológicas . 68 (2): 264–355. doi :10.1124/pr.115.011478. PMC 4813425 . PMID  26841800. 
  88. ^ "El Premio Nobel de Química 1993". Premio Nobel.org .
  89. ^ "Citas para los ganadores de los premios Chemical Breakthrough Awards 2017". División de Historia de la Química . Consultado el 12 de marzo de 2018 .
  90. ^ "Agregado recientemente".
  91. ^ Adelante, J. Jr.; Wiechers, IR; Cook-Deegan, R. (3 de julio de 2006). "Los efectos de las prácticas comerciales, las licencias y la propiedad intelectual en el desarrollo y difusión de la reacción en cadena de la polimerasa: estudio de caso". Revista de colaboración y descubrimiento biomédico . 1 : 7. doi : 10.1186/1747-5333-1-7 . PMC 1523369 . PMID  16817955. 
  92. ^ "Consejos sobre cómo sobrevivir a las guerras Taq". Noticias de Ingeniería Genética GEN - Canal Bionegocios . 26 (9). 1 de mayo de 2006.

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