La ADN polimerasa Pfu es una enzima que se encuentra en la arqueona hipertermófila Pyrococcus furiosus , donde funciona para copiar el ADN del organismo durante la división celular. En el laboratorio, Pfu se utiliza para amplificar el ADN en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), donde la enzima cumple la función central de copiar una nueva cadena de ADN durante cada paso de extensión.
Es una ADN polimerasa de la familia B. Tiene un dominio exonucleasa 3'-5' similar a la ARNasa H , típico de la polimerasa de la familia B, como la ADN polimerasa II . [1]
La ADN polimerasa Pfu tiene propiedades de termoestabilidad y corrección superiores en comparación con la ADN polimerasa Taq . A diferencia de la ADN polimerasa Taq , la ADN polimerasa Pfu posee actividad de corrección de pruebas exonucleasa de 3' a 5' , lo que significa que a medida que el ADN se ensambla desde el extremo 5' al extremo 3' , la actividad exonucleasa elimina inmediatamente los nucleótidos mal incorporados en el extremo 3' del crecimiento. Cadena de ADN. En consecuencia, los fragmentos de PCR generados por la ADN polimerasa de Pfu tendrán menos errores que los insertos de PCR generados por Taq .
Pfu disponible comercialmente normalmente da como resultado una tasa de error de 1 en 1,3 millones de pares de bases y puede producir un 2,6 % de productos mutados cuando se amplifican fragmentos de 1 kb mediante PCR. Sin embargo, Pfu es más lento y normalmente requiere de 1 a 2 minutos por ciclo para amplificar 1 kb de ADN a 72 °C. El uso de ADN polimerasa Pfu en reacciones de PCR también da como resultado productos de PCR con extremos romos. [2]
Por lo tanto, la ADN polimerasa Pfu es superior a la ADN polimerasa Taq para técnicas que requieren síntesis de ADN de alta fidelidad, pero también se puede usar junto con la polimerasa Taq para obtener la fidelidad de Pfu con la velocidad de la actividad de la polimerasa Taq . [3]
Los científicos dirigidos por Eric Mathur en la empresa de biotecnología Stratagene, con sede en La Jolla, California , descubrieron en 1991 la ADN polimerasa Pfu, que exhibe una fidelidad de replicación significativamente mayor que la ADN polimerasa Taq. [4] Recibieron patentes para la Pfu deficiente en exonucleasa y la completa Pfu en 1996. [5]
También se han utilizado otras polimerasas de cepas de Pyrococcus como "Deep Vent" ( Q51334 ) de la cepa GB-D y la ADN polimerasa Pwo . [3]
