El dúo "Sul suo capo aggravi un Dio" entre Ana (soprano) y Juana Seymour (mezzosoprano) está considerado uno de los mejores de todo el repertorio operístico.
Los principales papeles femeninos de las óperas Ana Bolena, María Estuardo, y Roberto Devereux son a menudo conocidos como las "Tres Reinas de Donizetti."
Ana Bolena no se representó con frecuencia hasta después de la Segunda Guerra Mundial.
El reparto incluía a Sara Scuderi como Ana, Giulietta Simionato como Juana Seymour y Cesare Siepi como Enrique VIII.
Otras intérpretes que destacaron en el papel de Anna han sido Leyla Gencer, Montserrat Caballé, Renata Scotto, Edita Gruberová, Mariella Devia y Anna Netrebko.
Nadie más lo oye, y ella se dice que las cenizas de su primer amor aún arden, y que ella ahora es infeliz en su vano esplendor.
Rochefort le contesta que el amor nunca se ve satisfecho.
Percy se agita ante la perspectiva de ver a Ana, quien fue su primer amor.
Entra Percy, y dice que ve a Ana infeliz.
Él saca su espada para matarse, y Ana grita.
Justo entonces, Enrique VIII entra y ve las espadas desenvainadas.
Smeton dice que no es cierto y se abre la túnica para ofrecer el pecho al rey si está mintiendo.
Ana contesta que no comprará su vida a cambio de la infamia.
Escena 2: Antecámara que lleva al salón donde el Consejo de los Pares está reunido Hervey dice a los cortesanos que Ana está perdida, porque Smeton ha hablado, revelando su crimen.
Enrique VIII dice que ella no salvará a Ana si se marcha.
Escena 3: Torre de Londres Percy y Rochefort están juntos en una celda.
Ana dice que no invocará la venganza sobre la perversa pareja.
Smeton, Percy y Rochefort dicen que la víctima ya ha sido sacrificada.
Hay una grabación histórica según La discoteca ideal de la ópera, de Roger Alier y otros,[8] la dirigida por Gianandrea Gavazzeni (1957, grabación en vivo), con Maria Callas (Anna Bolena), Nicola Rossi-Lemeni (Enrico), Giulietta Simionato (Giovanna), Gianni Raimondi (Percy), Plinio Clabassi (Rochefort), Gabriella Carturan (Smeton) y Luigi Rumbo (Hervey).