El reparto está formado por Milla Jovovich, Sienna Guillory,[4] Michelle Rodríguez,[5] Johann Urb, Li Bingbing, Shawn Roberts, Kevin Durand, Oded Fehr, Boris Kodjoe, Colin Salmon y Megan Charpentier.
[6] La película se rodó en distintos lugares del mundo como Toronto, Japón, Moscú y el Times Square de Nueva York.
Alice llega a lo que parecen ser las calles de la ciudad de Tokio, donde una voz cibernética anuncia "atención... atención... secuencia Tokio iniciada", tras lo cual los zombis atacan la ciudad.
Los refuerzos resultan ser Leon S. Kennedy, Luther West, Barry Burton, Sergei Vladimir y Tony Rosato, que acaban de entrar a la base y calculan contar con dos horas para salir antes que lleguen los refuerzos de Umbrella, por ello, antes de entrar colocan bombas programadas para dos horas Wesker advierte a Alice que Jill las esta persiguiendo por órdenes de la Reina Roja, la misma inteligencia artificial que controlaba La Colmena; en ese momento la Reina Roja interrumpe el hackeo de Wesker y ambas deben huir, llegando al Escenario Nueva York, donde se encuentran dos grandes y rápidos Verdugos, pero logran eliminarlos después de una corta batalla.
Ada le explica que las simulaciones están habitadas por clones con implantes de emociones y recuerdos para obtener genuinas reacciones a la amenaza del virus.
Leon y su equipo logran huir del edificio pero en el camino un Uber Licker asesina a Sergei, siendo salvados por Alice; tras reunirse, Leon señala que tienen 22 minutos para huir por lo que deciden buscar el ascensor de salida más cercano.
Alice salva a Becky y en su camino de regreso encuentran las instalaciones donde los clones son creados y acondicionados para los experimentos, mientras Alice pone una bomba para destruir el lugar Becky, al verse rodeada de copias de sus padres y conocidos comprende la realidad y pregunta a Alice si es realmente su madre, a lo que esta responde que ahora lo es, tras lo cual escapan del lugar mientras la bomba explota.
Una vez en la superficie mientras se alejan en su vehículo, emerge un submarino pilotado por Jill y Rain, quienres aun llevan a Ada como prisionera.
Rain se inyecta Las Plagas, un compuesto en base al Virus T que le otorga habilidades sobrehumanas e invulnerabilidad, comenzando una pelea contra Leon y Luther mientras Jill y Alice se enfrentan entre sí.
Después de una ardua pelea, Alice logra quitar y destruir el dispositivo que controlaba a Jill.
Alice se encuentra con Wesker en la Casa Blanca, que ha sido convertida en un refugio para los supervivientes y militares del Ejército de los Estados Unidos.
[18] Los que regresan de entregas anteriores son: Milla Jovovich como Alice, Sienna Guillory como Jill Valentine y Boris Kodjoe como Luther West.
[21][22] Oded Fehr que interpretó a Carlos Olivera en la segunda y tercera película también regresa.
[7][17][24] Algunas otras localizaciones fueron el Cinespacio Kipling de Toronto,[7] Times Square en Nueva York, Tokio, y Plaza Roja en Moscú.
La siguiente lista, muestra los 19 temas usados para la quinta entrega de Resident Evil: