stringtranslate.com

Empalme de proteínas

Mecanismo de empalme de proteínas que involucra inteínas.
Mecanismo de empalme de proteínas en el que intervienen las inteínas. En este esquema, la N-exteína se muestra en rojo, la inteína en negro y la C-exteína en azul. La X representa un átomo de oxígeno o de azufre.

El empalme de proteínas es una reacción intramolecular de una proteína particular en la que un segmento proteico interno (llamado inteína ) se elimina de una proteína precursora con una ligadura de proteínas externas C-terminales y N-terminales (llamadas exteínas ) en ambos lados. La unión de empalme de la proteína precursora es principalmente una cisteína o una serina , que son aminoácidos que contienen una cadena lateral nucleofílica . Las reacciones de empalme de proteínas que se conocen ahora no requieren cofactores exógenos o fuentes de energía como el trifosfato de adenosina (ATP) o el trifosfato de guanosina (GTP). Normalmente, el empalme se asocia solo con el empalme de pre-ARNm . Esta proteína precursora contiene tres segmentos: una N-exteína seguida de la inteína seguida de una C-exteína . Después de que se ha producido el empalme, la proteína resultante contiene la N-exteína unida a la C-exteína; este producto de empalme también se denomina exteína.

Historia

La primera inteína fue descubierta en 1988 a través de la comparación de secuencias entre la ATPasa vacuolar de Neurospora crassa [1] y zanahoria [2] (sin inteína) y el gen homólogo en levadura (con inteína) que fue descrito por primera vez como un supuesto transportador de iones de calcio . [3] En 1990 Hirata et al. [4] demostraron que la secuencia adicional en el gen de levadura se transcribió en ARNm y se eliminó de la proteína huésped solo después de la traducción. Desde entonces, se han encontrado inteínas en los tres dominios de la vida (eucariotas, bacterias y arqueas) y en virus .

El empalme de proteínas fue inesperado y sus mecanismos fueron descubiertos por dos grupos (Anraku [5] y Stevens [6] ) en 1990. Ambos descubrieron un VMA1 de Saccharomyces cerevisiae en un precursor de una enzima H + -ATPasa vacuolar . La secuencia de aminoácidos de los extremos N y C correspondía al 70% de la secuencia de ADN de la de una H + -ATPasa vacuolar de otros organismos, mientras que la secuencia de aminoácidos de la posición central correspondía al 30% de la secuencia total de ADN de la nucleasa HO de levadura .

Muchos genes tienen segmentos codificadores de inteínas no relacionados insertados en diferentes posiciones. Por estas y otras razones, las inteínas (o más apropiadamente, los segmentos de genes que codifican inteínas) a veces se denominan elementos genéticos egoístas , pero puede ser más preciso llamarlos parásitos . De acuerdo con la perspectiva de la evolución centrada en los genes, la mayoría de los genes son "egoístas" solo en la medida en que compiten con otros genes o alelos , pero generalmente cumplen una función para los organismos, mientras que los "elementos genéticos parásitos", al menos inicialmente, no realizan una contribución positiva a la aptitud del organismo. [7] [8]

A diciembre de 2019, la base de datos UniProtKB contiene 188 entradas anotadas manualmente como inteínas, que van desde solo decenas de residuos de aminoácidos hasta miles. [9] La primera inteína se encontró codificada dentro del gen VMA de Saccharomyces cerevisiae . Más tarde se encontraron en hongos ( ascomicetos , basidiomicetos , zigomicetos y quitridios ) y también en diversas proteínas. Se ha descrito que una proteína lejanamente relacionada con las inteínas conocidas que contienen proteínas, pero estrechamente relacionada con las proteínas hedgehog de los metazoos , tiene la secuencia de inteína de Glomeromycota . Muchas de las inteínas recién descritas contienen endonucleasas homing y algunas de ellas son aparentemente activas. [10] La abundancia de inteína en hongos indica transferencia lateral de genes que contienen inteína. Mientras que en eubacterias y arqueas, hay 289 y 182 inteínas conocidas actualmente. No es sorprendente que la mayor parte de la inteína presente en eubacterias y arqueas se encuentre insertada en proteínas metabólicas de ácidos nucleicos, como los hongos. [10]

Las inteínas varían mucho, pero muchas de las mismas proteínas que contienen inteína se encuentran en varias especies. Por ejemplo, la proteína del factor de procesamiento de pre-ARNm 8 ( Prp8 ), fundamental en el espliceosoma , tiene siete sitios de inserción de inteína diferentes en las especies eucariotas. [11] La Prp8 que contiene inteína se encuentra más comúnmente en hongos, pero también se ve en Amoebozoa , Chlorophyta , Capsaspora y Choanoflagellida . Muchas micobacterias contienen inteínas dentro de DnaB (helicasa replicativa bacteriana), RecA (recombinasa de ADN bacteriana) y SufB ( proteína de ensamblaje de clúster FeS ). [12] [13] Existe una variedad notable dentro de la estructura y el número de inteínas DnaB, tanto dentro del género mycobacterium como más allá. Curiosamente, la DnaB que contiene inteína también se encuentra en los cloroplastos de las algas. [14] Las proteínas que contienen inteína que se encuentran en las arqueas incluyen RadA (homólogo de RecA), RFC, PolB, RNR. [15] Muchas de las mismas proteínas que contienen inteína (o sus homólogos) se encuentran en dos o incluso en los tres dominios de la vida. Las inteínas también se observan en los proteomas codificados por bacteriófagos y virus eucariotas. Los virus pueden haber estado involucrados como vectores de distribución de inteína en la amplia variedad de organismos que contienen inteína. [15]

Mecanismo

El proceso para las inteínas de clase 1 comienza con un desplazamiento de NO o NS cuando la cadena lateral del primer residuo (una serina , treonina o cisteína ) de la porción de inteína de la proteína precursora ataca nucleofílicamente el enlace peptídico del residuo inmediatamente aguas arriba (es decir, el residuo final de la N-exteína) para formar un intermedio de éster (o tioéster ) lineal. Se produce una transesterificación cuando la cadena lateral del primer residuo de la C-exteína ataca al (tio)éster recién formado para liberar el extremo N-terminal de la inteína. Esto forma un intermedio ramificado en el que se unen la N-exteína y la C-exteína, aunque no a través de un enlace peptídico. El último residuo de la inteína es siempre una asparagina (Asn), y el átomo de nitrógeno de la amida de esta cadena lateral escinde el enlace peptídico entre la inteína y la C-exteína, lo que da como resultado un segmento de inteína libre con una imida cíclica terminal . Finalmente, el grupo amino libre de la C-exteína ataca ahora al (tio)éster que une las N- y C-exteínas. Un desplazamiento ON o SN produce un enlace peptídico y la proteína funcional ligada . [16]

Las inteínas de clase 2 no tienen una primera cadena lateral nucleofílica, solo una alanina. En cambio, la reacción comienza directamente con un desplazamiento nucleofílico, con el primer residuo de la C-exteína uniéndose al carboxilo peptídico en el residuo final de la N-exteína. El resto procede como de costumbre, comenzando con la Asn transformándose en una imida cíclica. [17]

Las inteínas de clase 3 no tienen una primera cadena lateral nucleofílica, solo una alanina, pero tienen un motivo "WCT" interno no contiguo. El residuo C (cisteína) interno ataca al carboxilo peptídico en el residuo final de la N-exteína (desplazamiento nucleofílico). La transesterificación ocurre cuando el primer residuo de la C-exteína ataca al tioéster recién formado. El resto continúa de la forma habitual. [18]

El mecanismo del efecto de empalme es una analogía natural con la técnica para generar químicamente proteínas de tamaño mediano llamada ligadura química nativa .

Inteína

Una inteína es un segmento de una proteína que es capaz de escindirse y unir las porciones restantes (las exteínas ) con un enlace peptídico durante el empalme de proteínas. [19] Las inteínas también se han llamado intrones proteicos , por analogía con los intrones (de ARN) .

El empalme de inteínas ocurre postraduccionalmente en un proceso autocatalítico. Aquí, la exteína se muestra en rojo y la inteína en azul. Imagen creada con Biorender.com.

Convenciones de nombres

La primera parte del nombre de una inteína se basa en el nombre científico del organismo en el que se encuentra y la segunda parte se basa en el nombre del gen o exteína correspondiente. Por ejemplo, la inteína que se encuentra en Thermoplasma acidophilum y está asociada con la subunidad A de la ATPasa vacuolar (VMA) se llama "Tac VMA".

Normalmente, como en este ejemplo, bastan tres letras para especificar el organismo, pero existen variaciones. Por ejemplo, se pueden añadir letras adicionales para indicar una cepa. Si en el gen correspondiente se codifica más de una inteína, se les asigna un sufijo numérico que comienza desde 5 hasta 3 o en orden de identificación (por ejemplo, "Msm dnaB-1").

El segmento del gen que codifica la inteína suele recibir el mismo nombre que la inteína, pero para evitar confusiones el nombre de la inteína propiamente dicha suele escribirse con mayúscula ( p. ej. , Pfu RIR1-1), mientras que el nombre del segmento del gen correspondiente se escribe en cursiva ( p. ej. , Pfu rir1-1 ). Otra convención de desambiguación es colocar una "i" minúscula después del nombre de la proteína de origen, p. ej. , "Msm DnaBi1". [20]

Tipos de inteínas

Las inteínas se pueden clasificar según muchos criterios.

Enteros completos y mini

Las inteínas pueden contener un dominio de gen de endonucleasa homing (HEG) además de los dominios de empalme. Este dominio es responsable de la propagación de la inteína al escindir el ADN en un alelo libre de inteína en el cromosoma homólogo , lo que activa el sistema de reparación de roturas de doble cadena del ADN (DSBR), que luego repara la rotura, copiando así el ADN codificante de la inteína en un sitio previamente libre de inteína. [17] El dominio HEG no es necesario para el empalme de la inteína, por lo que se puede perder, formando una inteína mínima o mini . Varios estudios han demostrado la naturaleza modular de las inteínas agregando o eliminando dominios HEG y determinando la actividad de la nueva construcción. [ cita requerida ]

Inteínas divididas

A veces, la inteína de la proteína precursora proviene de dos genes. En este caso, se dice que la inteína es una inteína dividida . Por ejemplo, en las cianobacterias , DnaE , ​​la subunidad catalítica α de la ADN polimerasa III , está codificada por dos genes separados, dnaE-n y dnaE-c . El producto dnaE-n consiste en una secuencia de N-exteína seguida de una secuencia de inteína de 123 AA, mientras que el producto dnaE-c consiste en una secuencia de inteína de 36 AA seguida de una secuencia de C-exteína. [21]

Aplicaciones en biotecnología

Las inteínas son muy eficientes en el empalme de proteínas, por lo que han encontrado un papel importante en la biotecnología . Hay más de 200 inteínas identificadas hasta la fecha; los tamaños varían de 100 a 800 AA . Las inteínas han sido diseñadas para aplicaciones particulares, como la semisíntesis de proteínas [22] y el etiquetado selectivo de segmentos de proteínas, lo que es útil para estudios de RMN de proteínas grandes. [23]

La inhibición farmacéutica de la escisión de inteína puede ser una herramienta útil para el desarrollo de fármacos ; la proteína que contiene la inteína no llevará a cabo su función normal si ésta no se escinde, ya que su estructura se verá alterada.

Se ha sugerido que las inteínas podrían resultar útiles para lograr la expresión alotópica de ciertas proteínas altamente hidrofóbicas normalmente codificadas por el genoma mitocondrial , por ejemplo en terapia génica . [24] La hidrofobicidad de estas proteínas es un obstáculo para su importación a las mitocondrias. Por lo tanto, la inserción de una inteína no hidrofóbica puede permitir que se realice esta importación. La escisión de la inteína después de la importación restauraría la proteína a su tipo salvaje .

Las etiquetas de afinidad se han utilizado ampliamente para purificar proteínas recombinantes, ya que permiten la acumulación de proteína recombinante con pocas impurezas. Sin embargo, la etiqueta de afinidad debe ser eliminada por proteasas en el paso final de purificación. El paso de proteólisis adicional plantea los problemas de especificidad de la proteasa en la eliminación de las etiquetas de afinidad de la proteína recombinante y la eliminación del producto de digestión. Este problema se puede evitar fusionando una etiqueta de afinidad con inteínas autoescindibles en un entorno controlado. La primera generación de vectores de expresión de este tipo utilizó inteína VMA de Saccharomyces cerevisiae modificada (Sce VMA). Chong et al. [25] utilizaron un dominio de unión a quitina (CBD) de Bacillus circulans como etiqueta de afinidad y fusionaron esta etiqueta con una inteína VMA de Sce modificada. La inteína modificada sufre una reacción de autoescisión en su enlace peptídico N-terminal con 1,4-ditiotreitol (DTT), β-mercaptoetanol (β-ME) o cistina a bajas temperaturas en un amplio rango de pH. Después de expresar la proteína recombinante, el homogeneizado celular pasa a través de la columna que contiene quitina . Esto permite que el CBD de la proteína quimérica se una a la columna. Además, cuando se reduce la temperatura y las moléculas descritas anteriormente pasan a través de la columna, la proteína quimérica sufre un autoempalme y solo se eluye la proteína objetivo. Esta novedosa técnica elimina la necesidad de un paso de proteólisis y el VMA de Sce modificado permanece en la columna unido a la quitina a través del CBD. [25]

Recientemente, las inteínas se han utilizado para purificar proteínas basadas en péptidos autoagregantes. Los polipéptidos similares a la elastina (ELP) son una herramienta útil en biotecnología. Fusionados con la proteína diana, tienden a formar agregados dentro de las células. [26] Esto elimina el paso cromatográfico necesario en la purificación de proteínas. Las etiquetas ELP se han utilizado en la proteína de fusión de inteína, de modo que los agregados se pueden aislar sin cromatografía (por centrifugación) y luego la inteína y la etiqueta se pueden escindir de manera controlada para liberar la proteína diana en solución. Este aislamiento de proteínas se puede realizar utilizando un flujo de medio continuo, lo que produce grandes cantidades de proteína, lo que hace que este proceso sea más eficiente económicamente que los métodos convencionales. [26] Otro grupo de investigadores utilizó etiquetas autoagregantes más pequeñas para aislar la proteína diana. Los pequeños péptidos anfipáticos 18A y ELK16 (figura 5) se utilizaron para formar la proteína agregante autoescindible. [27]

Aplicaciones en el desarrollo de antimicrobianos

En los últimos veinte años, ha habido un creciente interés en aprovechar las inteínas para aplicaciones antimicrobianas . [12] El empalme de inteínas se encuentra exclusivamente en organismos unicelulares, con una abundancia particularmente alta en microorganismos patógenos. [28] Además, las inteínas se encuentran comúnmente dentro de las proteínas de mantenimiento y/o proteínas involucradas en la supervivencia del organismo dentro de un huésped humano. La eliminación de inteína postraduccional es necesaria para que la proteína se pliegue y funcione correctamente. Por ejemplo, Gaëlle Huet et al. demostraron que en Mycobacterium tuberculosis , SufB no empalmado previene la formación del complejo SufBCD, un componente de la maquinaria SUF. [29] Como tal, la inhibición del empalme de inteínas puede servir como una poderosa plataforma para el desarrollo de antimicrobianos.

La investigación actual sobre inhibidores del empalme de inteína se ha centrado en el desarrollo de antimicobacterianos ( M. tb. tiene tres proteínas que contienen inteína), así como agentes activos contra los hongos patógenos Cryptococcus y Aspergillus. [13] El cisplatino y compuestos similares que contienen platino inhiben el empalme de la inteína RecA de M. tb. mediante la coordinación con residuos catalíticos. [30] Los cationes divalentes, como los iones de cobre (II) y zinc (II), funcionan de manera similar para inhibir reversiblemente el empalme. [12] Sin embargo, ninguno de estos métodos es actualmente adecuado para un antibiótico eficaz y seguro. La inteína Prp8 fúngica también es inhibida por cationes divalentes y cisplatino al interferir con el residuo catalítico Cys1. [12] En 2021, Li et al. demostraron que los inhibidores de moléculas pequeñas del empalme de inteína Prp8 eran selectivos y efectivos para retardar el crecimiento de C. neoformans y C. gattii , lo que proporciona evidencia interesante del potencial antimicrobiano de los inhibidores del empalme de inteína. [31]

Véase también

Referencias

  1. ^ Bowman, EJ; Tenney, K; Bowman, BJ (octubre de 1988). "Aislamiento de genes que codifican la ATPasa vacuolar de Neurospora. El análisis de vma-1 que codifica la subunidad de 67 kDa revela homología con otras ATPasas". J Biol Chem . 263 (28): 13994–4001. doi : 10.1016/S0021-9258(18)68175-X . PMID  2971651.
  2. ^ Zimniak, L; Dittrich, P; Gogarten, JP; Kibak, H; Taiz, L (julio de 1988). "La secuencia de ADNc de la subunidad de 69 kDa de la H+-ATPasa vacuolar de la zanahoria. Homología con la cadena beta de las F0F1-ATPasas". J Biol Chem . 263 (19): 9102–12. doi : 10.1016/S0021-9258(19)76514-4 . PMID  2897965.
  3. ^ Shih, CK; Wagner, R; Feinstein, S; Kanik-Ennulat, C; Neff, N (agosto de 1988). "Un gen dominante de resistencia a la trifluoperazina de Saccharomyces cerevisiae tiene homología con la ATP sintasa F0F1 y confiere crecimiento sensible al calcio". Mol Cell Biol . 8 (8): 3094–103. doi :10.1128/mcb.8.8.3094. PMC 363536 . PMID  2905423. 
  4. ^ Hirata, R; Ohsumk, Y; Nakano, A; Kawasaki, H; Suzuki, K; Anraku, Y (abril de 1990). "Estructura molecular de un gen, VMA1, que codifica la subunidad catalítica de la adenosina trifosfatasa translocante de H(+) de las membranas vacuolares de Saccharomyces cerevisiae". J Biol Chem . 265 (12): 6726–33. doi : 10.1016/S0021-9258(19)39210-5 . PMID  2139027.
  5. ^ Hirata R, Ohsumk Y, Nakano A, Kawasaki H, Suzuki K, Anraku Y (abril de 1990). "Estructura molecular de un gen, VMA1, que codifica la subunidad catalítica de la adenosina trifosfatasa translocante de H(+) de las membranas vacuolares de Saccharomyces cerevisiae". J. Biol. Chem . 265 (12): 6726–33. doi : 10.1016/S0021-9258(19)39210-5 . PMID  2139027.
  6. ^ Kane PM, Yamashiro CT, Wolczyk DF, Neff N, Goebl M, Stevens TH (noviembre de 1990). "El empalme de proteínas convierte el producto del gen TFP1 de la levadura en la subunidad de 69 kD de la H(+)-adenosina trifosfatasa vacuolar". Science . 250 (4981): 651–7. Bibcode :1990Sci...250..651K. doi :10.1126/science.2146742. PMID  2146742.
  7. ^ Swithers, Kristen S.; Soucy, Shannon M.; Gogarten, J. Peter (2012). "El papel de la evolución reticulada en la creación de innovación y complejidad". Revista internacional de biología evolutiva . 2012 : 1–10. doi : 10.1155/2012/418964 . ISSN  2090-8032. PMC 3403396 . PMID  22844638. 
  8. ^ Dawkins, Richard (1976). El gen egoísta . Oxford University Press.
  9. ^ "UniProt: la base de conocimiento universal sobre proteínas". Investigación en ácidos nucleicos . 45 (D1): D158–D169. 2016-11-29. doi :10.1093/nar/gkw1099. ISSN  0305-1048. PMC 5210571 . PMID  27899622. 
  10. ^ ab Perler, FB (2002). "InBase: la base de datos de inteínas". Investigación de ácidos nucleicos . 30 (1): 383–384. doi :10.1093/nar/30.1.383. ISSN  1362-4962. PMC 99080 . PMID  11752343. 
  11. ^ Green, Cathleen M.; Li, Zhong; Smith, Aaron D.; Novikova, Olga; Bacot-Davis, Valjean R.; Gao, Fengshan; Hu, Saiyang; Banavali, Nilesh K.; Thiele, Dennis J.; Li, Hongmin; Belfort, Marlene (10 de octubre de 2019). "Inteína Prp8 espliceosómica en la encrucijada del empalme de proteínas y ARN". PLOS Biology . 17 (10): e3000104. doi : 10.1371/journal.pbio.3000104 . ISSN  1545-7885. PMC 6805012 . PMID  31600193. 
  12. ^ abcd Tharappel, Anil Mathew; Li, Zhong; Li, Hongmin (2022). "Inteínas como dianas farmacológicas y herramientas terapéuticas". Frontiers in Molecular Biosciences . 9 : 821146. doi : 10.3389/fmolb.2022.821146 . ISSN  2296-889X. PMC 8861304 . PMID  35211511. 
  13. ^ ab Wall, Diana A.; Tarrant, Seanan P.; Wang, Chunyu; Mills, Kenneth V.; Lennon, Christopher W. (2021). "Inhibidores de inteína como nuevos antimicrobianos: empalme de proteínas en patógenos humanos, métodos de detección y consideraciones fuera del objetivo". Frontiers in Molecular Biosciences . 8 : 752824. doi : 10.3389/fmolb.2021.752824 . ISSN  2296-889X. PMC 8529194 . PMID  34692773. 
  14. ^ Green, Cathleen M.; Novikova, Olga; Belfort, Marlene (24 de enero de 2018). "El paisaje dinámico de las inteínas en eucariotas". ADN móvil . 9 (1): 4. doi : 10.1186/s13100-018-0111-x . ISSN  1759-8753. PMC 5784728 . PMID  29416568. 
  15. ^ ab Novikova, Olga; Topilina, Natalya; Belfort, Marlene (mayo de 2014). "Distribución enigmática, evolución y función de las inteínas". Revista de química biológica . 289 (21): 14490–14497. doi : 10.1074/jbc.r114.548255 . ISSN  0021-9258. PMC 4031506 . PMID  24695741. 
  16. ^ Noren CJ, Wang J, Perler FB (2000). "Disección de la química del empalme de proteínas y sus aplicaciones". Angew Chem Int Ed Engl . 39 (3): 450–66. doi :10.1002/(sici)1521-3773(20000204)39:3<450::aid-anie450>3.3.co;2-6. PMID  10671234.
  17. ^ abcde Nanda, A; Nasker, SS; Mehra, A; Panda, S; Nayak, S (16 de diciembre de 2020). "Inteínas en la ciencia: evolución a la aplicación". Microorganismos . 8 (12): 2004. doi : 10.3390/microorganisms8122004 . PMC 7765530 . PMID  33339089. 
  18. ^ abc Tori, K; Perler, FB (abril de 2011). "Ampliando la definición de inteínas de clase 3 y su origen fágico propuesto". Journal of Bacteriology . 193 (8): 2035–41. doi : 10.1128/JB.01407-10 . PMC 3133030 . PMID  21317331. 
  19. ^ Anraku, Y; Mizutani, R; Satow, Y (2005). "Empalme de proteínas: su descubrimiento y conocimiento estructural de nuevos mecanismos químicos". IUBMB Life . 57 (8): 563–74. doi : 10.1080/15216540500215499 . PMID  16118114.
  20. ^ Kelley, Danielle S.; Lennon, Christopher W.; Li, Zhong; Miller, Michael R.; Banavali, Nilesh K.; Li, Hongmin; Belfort, Marlene (19 de octubre de 2018). "Inteína helicasa DnaB micobacteriana como sensor de estrés oxidativo". Nature Communications . 9 (1): 4363. Bibcode :2018NatCo...9.4363K. doi : 10.1038/s41467-018-06554-x . PMC 6195587 . PMID  30341292. 
  21. ^ Wu, H.; Hu, Z.; Liu, XQ (1998). "Transempalme de proteínas por una inteína dividida codificada en un gen DnaE dividido de Synechocystis sp. PCC6803". Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América . 95 (16): 9226–9231. Bibcode :1998PNAS...95.9226W. doi : 10.1073/pnas.95.16.9226 . PMC 21320 . PMID  9689062. 
  22. ^ Schwarzer D, Cole PA (2005). "Semisíntesis de proteínas y ligación de proteínas expresadas: persiguiendo la cola de una proteína". Curr Opin Chem Biol . 9 (6): 561–9. doi :10.1016/j.cbpa.2005.09.018. PMID  16226484.
  23. ^ Muralidharan V, Muir TW (2006). "Ligación de proteínas: una tecnología que permite el análisis biofísico de proteínas". Nat. Methods . 3 (6): 429–38. doi :10.1038/nmeth886. PMID  16721376. S2CID  12550693.
  24. ^ de Grey, Aubrey DNJ (2000). "Terapia génica mitocondrial: un campo para el uso biomédico de las inteínas". Tendencias en biotecnología . 18 (9): 394–399. doi :10.1016/S0167-7799(00)01476-1. ISSN  0167-7799. PMID  10942964.
  25. ^ ab Chong, Shaorong; Mersha, Fana B; Comb, Donald G; Scott, Melissa E; Landry, David; Vence, Luis M; Perler, Francine B; Benner, Jack; Kucera, Rebecca B; Hirvonen, Christine A; Pelletier, John J; Paulus, Henry; Xu, Ming-Qun (1997). "Purificación de una sola columna de proteínas recombinantes libres utilizando una etiqueta de afinidad autoescindible derivada de un elemento de empalme de proteínas". Gene . 192 (2): 271–281. doi :10.1016/S0378-1119(97)00105-4. ISSN  0378-1119. PMID  9224900.
  26. ^ ab Fong, Baley A; Wood, David W (2010). "Expresión y purificación de proteínas diana marcadas con ELP-inteína en la fermentación de E. coli de alta densidad celular". Factorías de células microbianas . 9 (1): 77. doi : 10.1186/1475-2859-9-77 . ISSN  1475-2859. PMC 2978133 . PMID  20959011. 
  27. ^ Xing, Lei; Wu, Wei; Zhou, Bihong; Lin, Zhanglin (2011). "Expresión y purificación de proteínas optimizadas mediante etiquetas autoagregantes escindibles". Microbial Cell Factories . 10 (1): 42. doi : 10.1186/1475-2859-10-42 . ISSN  1475-2859. PMC 3124420 . PMID  21631955. 
  28. ^ Shah, Neel H.; Muir, Tom W. (24 de diciembre de 2013). "Inteínas: un regalo de la naturaleza para los químicos de proteínas". Chemical Science . 5 (2): 446–461. doi :10.1039/C3SC52951G. ISSN  2041-6539. PMC 3949740 . PMID  24634716. 
  29. ^ Huet, Gaëlle; Castaing, Jean-Philippe; Fournier, Didier; Daffé, Mamadou; Saves, Isabelle (mayo de 2006). "El empalme de proteínas de SufB es crucial para la funcionalidad de la maquinaria SUF de Mycobacterium tuberculosis". Journal of Bacteriology . 188 (9): 3412–3414. doi :10.1128/JB.188.9.3412-3414.2006. ISSN  0021-9193. PMC 1447444 . PMID  16621837. 
  30. ^ Chan, Hon; Pearson, C. Seth; Green, Cathleen M.; Li, Zhong; Zhang, Jing; Belfort, Georges; Shekhtman, Alex; Li, Hongmin; Belfort, Marlene (octubre de 2016). "Explorando la inhibición de inteína por compuestos de platino como estrategia antimicrobiana". Journal of Biological Chemistry . 291 (43): 22661–22670. doi : 10.1074/jbc.m116.747824 . ISSN  0021-9258. PMC 5077202 . PMID  27609519. 
  31. ^ Li, Zhong; Tharappel, Anil Mathew; Xu, Jimin; Lang, Yuekun; Green, Cathleen M.; Zhang, Jing; Lin, Qishan; Chaturvedi, Sudha; Zhou, Jia; Belfort, Marlene; Li, Hongmin (12 de enero de 2021). "Inhibidores de moléculas pequeñas para la inteína Prp8 como agentes antifúngicos". Actas de la Academia Nacional de Ciencias . 118 (2): e2008815118. Bibcode :2021PNAS..11808815L. doi : 10.1073/pnas.2008815118 . ISSN  0027-8424. PMC 7812778 . PMID  33397721. 

Lectura adicional

Enlaces externos