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Placa de agar

Contaminación en una placa de agar

Una placa de agar es una placa de Petri que contiene un medio de cultivo solidificado con agar , que se utiliza para cultivar microorganismos . A veces se añaden compuestos selectivos para influir en el crecimiento, como antibióticos . [1]

96 pinzas utilizadas para realizar ensayos puntuales con células de levadura, hongos o bacterias.

Los microorganismos individuales colocados en la placa crecerán hasta formar colonias individuales , cada una de las cuales es un clon genéticamente idéntico al organismo ancestro individual (excepto por la baja e inevitable tasa de mutación ). Por lo tanto, la placa se puede utilizar para estimar la concentración de organismos en un cultivo líquido o una dilución adecuada de ese cultivo utilizando un contador de colonias , o para generar cultivos genéticamente puros a partir de un cultivo mixto de organismos genéticamente diferentes.

Existen varios métodos para sembrar células. Una técnica se conoce como " estiramiento ". En esta técnica, una gota del cultivo en el extremo de un asa de alambre estéril y delgado , a veces llamada inoculador, se esparce por la superficie del agar dejando atrás los organismos, un número mayor al principio del estiramiento y un número menor al final. En algún momento durante un "estiramiento" exitoso, el número de organismos depositados será tal que crecerán colonias individuales distintas en esa área que pueden retirarse para un cultivo posterior, utilizando otro asa estéril.

Otra forma de sembrar organismos en placas de agar, además de la siembra por estrías, es el análisis puntual . Este tipo de análisis se utiliza a menudo para comprobar la viabilidad de las células y se realiza con pinzas (a menudo también llamadas pinzas para sembrar). Una tercera técnica es utilizar perlas de vidrio estériles para sembrar células. En esta técnica, las células se cultivan en un cultivo líquido, en el que se pipetea un pequeño volumen en la placa de agar y luego se esparce con las perlas. La siembra por réplica es otra técnica utilizada para sembrar células en placas de agar. Estas cuatro técnicas son las más comunes, pero también son posibles otras. Es fundamental trabajar de forma estéril para evitar la contaminación de las placas de agar. [1] Por lo tanto, la siembra se suele realizar en una cabina de flujo laminar o en la mesa de trabajo junto a un mechero Bunsen . [2]

Historia

En 1881, Fanny Hesse , que trabajaba como técnica para su marido Walther Hesse en el laboratorio de Robert Koch , sugirió el agar como un agente de fraguado eficaz, ya que había sido común en la elaboración de mermeladas durante algún tiempo. [3]

Tipos

Una placa de agar observada en un contador de colonias electrónico
Ejemplo de un algoritmo de evaluación de una posible infección bacteriana en casos sin objetivos específicos solicitados (no bacterias, micobacterias, etc.), con las situaciones y los agentes más comunes observados en un entorno hospitalario comunitario de Nueva Inglaterra. Se utilizan diferentes placas de agar para diferentes fuentes de muestras, como se ve en el cuadrante superior izquierdo.

Al igual que otros medios de crecimiento , las formulaciones de agar utilizadas en placas pueden clasificarse como "definidas" o "indefinidas"; un medio definido se sintetiza a partir de sustancias químicas individuales requeridas por el organismo, por lo que se conoce la composición molecular exacta, mientras que un medio indefinido se elabora a partir de productos naturales como el extracto de levadura , donde se desconoce la composición precisa. [4]

Las placas de agar pueden formularse como permisivas, con la intención de permitir el crecimiento de cualquier organismo presente, o restrictivas o selectivas, con la intención de permitir solo el crecimiento de un subconjunto particular de esos organismos. [5] Esto puede tomar la forma de un requisito nutricional, por ejemplo, proporcionando un compuesto particular como la lactosa como la única fuente de carbono y, por lo tanto, seleccionando solo organismos que puedan metabolizar ese compuesto, o incluyendo un antibiótico particular u otra sustancia para seleccionar solo organismos que sean resistentes a esa sustancia. Esto se correlaciona hasta cierto punto con medios definidos e indefinidos; los medios indefinidos, hechos de productos naturales y que contienen una combinación desconocida de muchas moléculas orgánicas, suelen ser más permisivos en términos de satisfacer las necesidades de una variedad más amplia de organismos. En contraste, los medios definidos pueden adaptarse con precisión para seleccionar organismos con propiedades específicas.

Las placas de agar también pueden ser placas indicadoras, en las que los organismos no se seleccionan en función del crecimiento, sino que se distinguen por un cambio de color en algunas colonias, normalmente causado por la acción de una enzima sobre algún compuesto añadido al medio. [6]

Las placas se incuban durante 12 horas hasta varios días, dependiendo de la prueba que se realice.

Los tipos de placas de agar más utilizados incluyen:

Los glóbulos rojos en una placa de agar se utilizan para diagnosticar la infección . A la izquierda, se muestra una infección positiva por Staphylococcus ; a la derecha, un cultivo positivo por Streptococcus .

Agar sangre

Hemólisis de Streptococcus spp. (izquierda) α-hemólisis ( S. mitis ); (centro) β-hemólisis ( S. pyogenes ); (derecha) γ-hemólisis (= no hemolítica, S. salivarius )

Placa de agar sangre

Las placas de agar sangre (BAP) contienen sangre de mamíferos (generalmente de oveja o caballo), típicamente en una concentración del 5 al 10%. Las BAP se enriquecen y se utilizan medios diferenciales para aislar organismos exigentes y detectar la actividad hemolítica . La actividad β-hemolítica mostrará lisis y digestión completa del contenido de glóbulos rojos que rodea una colonia. Los ejemplos incluyen Streptococcus haemolyticus . La α-hemólisis solo causará lisis parcial de los glóbulos rojos (la membrana celular se deja intacta) y aparecerá verde o marrón debido a la conversión de hemoglobina en metahemoglobina. Un ejemplo de esto sería Streptococcus viridans . La γ-hemólisis (o no hemolítica) es el término que se refiere a la falta de actividad hemolítica. [7] Las BAP también contienen extracto de carne o extracto de levadura , triptona , cloruro de sodio y agar. [8]

Agar chocolate

El agar chocolate es un tipo de placa de agar sangre en la que las células sanguíneas se han lisado calentándolas a 80 °C. Se utiliza para el cultivo de bacterias respiratorias exigentes, como Haemophilus influenzae . El agar chocolate recibe su nombre por su color y no contiene chocolate en la placa.

Agar Thayer-Martin

El agar Thayer-Martin es un agar chocolate diseñado para aislar Neisseria gonorrhoeae y Neisseria meningitidis .

Agar tiosulfato-citrato-sales biliares-sacarosa

El agar tiosulfato-citrato-sales biliares-sacarosa mejora el crecimiento de Vibrio spp. , incluido Vibrio cholerae . [9]

Medios bacterianos generales

Cuatro tipos de placas de agar que demuestran un crecimiento diferencial según el metabolismo bacteriano

Medios de cultivo para hongos

Medios de comunicación de musgo

Medio de cultivo de levadura

La levadura Candida albicans crece como células de levadura y células filamentosas en agar YPD

Mega Plato

Véase también

Diferentes tipos específicos de agar:

Referencias

  1. ^ ab Madigan M, Martinko J, eds. (2005). Brock Biología de los microorganismos (11.ª ed.). Prentice Hall. ISBN 0-13-144329-1.
  2. ^ Sanders, Erin R. (11 de mayo de 2012). "Aseptic Laboratory Techniques: Plating Methods". Journal of Visualized Experiments (63): e3064. doi :10.3791/3064. PMC 4846335. PMID 22617405.  Archivado desde el original el 14 de noviembre de 2017. Consultado el 3 de mayo de 2018 . 
  3. ^ "Historia de la placa de agar". Noticias de laboratorio . Archivado desde el original el 11 de febrero de 2010. Consultado el 22 de febrero de 2010 .
  4. ^ Baron S; et al., eds. (1996). Microbiología médica de Baron (4.ª ed.). Rama médica de la Universidad de Texas . ISBN 0-9631172-1-1(vía NCBI Bookshelf).
  5. ^ Ryan KJ; Ray CG, eds. (2004). Microbiología médica Sherris (4.ª ed.). McGraw Hill. ISBN 0-8385-8529-9.
  6. ^ "Placas indicadoras" . Consultado el 12 de julio de 2018 .
  7. ^ "Placas de agar sangre y protocolos de hemólisis". Archivado desde el original el 2012-02-02 . Consultado el 2014-10-28 .
  8. ^ "Agar sangre: composición, preparación, usos e imágenes", Microbiology Info.com
  9. ^ ab Fisher, Bruce; Harvey, Richard P.; Champe, Pamela C. (2007). Reseñas ilustradas de Lippincott: microbiología (Serie Reseñas ilustradas de Lippincott) . Hagerstwon, MD: Lippincott Williams & Wilkins. ISBN 978-0-7817-8215-9.
  10. ^ Miller, JH (1972). Experimentos en genética molecular. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, Nueva York.
  11. ^ Jung, Benjamin; Hoilat, Gilles J. (2022), "MacConkey Medium", StatPearls , Treasure Island (FL): StatPearls Publishing, PMID  32491326 , consultado el 12 de diciembre de 2022
  12. ^ Reski, Ralf ; Abel, Wolfgang O. (1985). "Inducción de la gemación en cloronemas y caulonemas del musgo Physcomitrella patens, utilizando isopenteniladenina" . Planta . 165 (3): 354–358. Bibcode :1985Plant.165..354R. doi :10.1007/bf00392232. PMID  24241140. S2CID  11363119.
  13. ^ "Un enfoque cinematográfico de la resistencia a los fármacos". Harvard Gazette . 2016-09-08 . Consultado el 2021-04-08 .

Enlaces externos