Microdisección por captura láser
La microdisección por captura láser (LCM) es un método para obtener subpoblaciones de células tisulares bajo visualización microscópica directa.
Mediante el movimiento del láser por la óptica o la platina, el foco sigue una trayectoria predefinida por el usuario.
El calor se introduce, por ejemplo, mediante un láser rojo o infrarrojo (IR) sobre una membrana teñida con un colorante absorbente.
Transporte por gravedad utilizando un microscopio vertical (denominado GAM, microdisección asistida por gravedad) o transporte por catapulta de presión láser; la generación más reciente utiliza una tecnología basada en la transferencia hacia delante inducida por láser (LIFT).
Actualmente existen seis tecnologías principales de aislamiento/recolección que utilizan un microscopio y un dispositivo para el aislamiento celular.
La muestra puede ser catapultada desde un portaobjetos o un plato de cultivo especial mediante un pulso láser U.V.
desenfocado que genera una fuerza fotónica para impulsar el material fuera del portaobjetos/plato, una técnica a veces denominada catapultado por presión de microdisección láser (LMPC).
El material diseccionado se envía hacia arriba (hasta varios milímetros) a una tapa de tubo de microcentrifugado u otro colector que contenga un tampón o un material pegajoso especializado en la tapa del tubo al que se adherirá el tejido.
[8] La diferencia con el proceso superior es que aquí el rayo láser se mueve para cortar el tejido mediante un espejo dicroico móvil.
[9] La cuarta tecnología basada en UV (utilizada por Molecular Machines and Industries AG) ofrece una ligera diferencia con respecto a la tercera tecnología al crear esencialmente una especie de sándwich con portaobjetos>muestra>y membrana sobre la muestra mediante el uso de un marco portaobjetos cuya superficie de membrana es cortada por el láser y, en última instancia, recogida desde arriba por una tapa adhesiva especial.
Además, no son autofluorescentes, por lo que pueden utilizarse para aplicaciones con tinciones fluorescentes, DIC o luz polarizada.
Por esta razón, LCM es un método útil para recolectar células seleccionadas para análisis de ADN, ARN y/o proteínas.
