SDS-PAGE
Cualquier incremento o disminución en %C aumenta el tamaño de poro (función parabólica).
Esto parece deberse a la estructura no homogénea de los filamentos del gel.
Tras un cierto tiempo (habitualmente unas horas, aunque esto depende del voltaje aplicado al gel: se debe tener que voltajes mayores producen una migración más rápida, pero tienden a producir una resolución algo más deficiente), las proteínas habrán migrado de forma diferencial sobre la base de su tamaño.
Es común correr marcadores moleculares de tamaño molecular conocido en una calle aparte del gel para calibrarlo y determinar el peso de proteínas desconocidas comparando la distancia recorrida con la del marcador.
La proporción entre ambas sustancias puede variar de acuerdo al propósito para el que se diseña.
Esta comigración también puede hacer que la proteína migre en una posición diferente o no sea capaz de penetrar en el gel.
Esto es por lo que es importante teñir el gel completo, incluida la sección de apilamiento (o carga).
El azul de Coomassie también puede unirse con menor afinidad a las glicoproteínas y proteínas fibrosas, lo que interfiere con la cuantificación.
El color producido por las primeras tinciones variaba entre un amarillo claro y un naranja rojizo.
El mecanismo químico exacto por lo que esto sucede aún es ampliamente desconocido.
[9] Kerenyi y Gallyas introdujeron esta tinción como un procedimiento sensible para detectar cantidades traza de proteínas en geles.
[10] La técnica se extendió al estudio de otras macromoléculas biológicas tras su separación por varios soportes.
Muchas variables pueden influir en la intensidad del color y todas las proteínas tienen características distintas de tinción.
Durante la electroforesis en un sistema de gel discontinuo, se forma un gradiente iónico en los estadios tempranos de la electroforesis que hacen que todas las proteínas se enfoquen en una sola banda estrecha.
Friedrich Kohlrausch encontró que la ley de Ohm también se aplica a los electrolitos en disolución.
Se da continuamente una compresión y descompresión en el gradiente del gel en distinta posición para cada proteína.
