En ese momento, apareció Cosme I de Médici, con sólo 17 años.

Sin embargo, Cosme no se resignaba a ser un vasallo del Emperador y buscaba mayor independencia política.

Por considerar que el derecho a establecer un Gran Ducado estaba reservado al Emperador, España y Austria se negaron a reconocerlo, mientras Francia e Inglaterra aguardaron para validarlo finalmente; con el paso del tiempo, todos los estados europeos acabaron por reconocerlo.

Cuando falleció sin descendientes Juan Gastón de Médici y le sucedió Francisco I del Sacro Imperio Romano Germánico.

En 1531 se publicó de manera póstuma El Príncipe en Roma, obra del florentino Nicolás Maquiavelo.