De esta forma ponía impedimentos para que la Corona inglesa recayera sobre una cabeza extranjera.

El mundo católico consideraba a la reina de Escocia como reina de Inglaterra al morir María I, y no así a la protestante Isabel.

En 1560, cuando María Estuardo quedó viuda de su primer marido Francisco II de Francia, Margarita le envió a su hijo para que los jóvenes se conocieran.

En 1565 se realizó el matrimonio el que no fue aprobado por la reina Isabel, debido al reforzamiento que este significaba para su prima y rival de Escocia como pretendiente a su trono.

El proyecto, sin embargo, nunca se llevó a cabo y Jacobo creció en Escocia bajo la regencia de su tío Moray.