La terapia génica utiliza la entrega de ADN a las células, lo que se puede lograr mediante varios métodos, que se resumen a continuación. Las dos clases principales de métodos son los que utilizan virus recombinantes (a veces llamados nanopartículas biológicas o vectores virales) y los que utilizan ADN desnudo o complejos de ADN (métodos no virales).
Todos los virus se unen a sus huéspedes e introducen su material genético en la célula huésped como parte de su ciclo de replicación. Este material genético contiene "instrucciones" básicas sobre cómo producir más copias de estos virus, pirateando la maquinaria de producción normal del cuerpo para satisfacer las necesidades del virus. La célula huésped llevará a cabo estas instrucciones y producirá copias adicionales del virus, lo que provocará que cada vez más células se infecten. Algunos tipos de virus insertan su genoma en el citoplasma del huésped, pero en realidad no ingresan a la célula. Otros penetran la membrana celular disfrazados de moléculas de proteínas y entran en la célula.
Hay dos tipos principales de infección por virus: lítica y lisogénica . Poco después de insertar su ADN, los virus del ciclo lítico rápidamente producen más virus, salen de la célula e infectan más células. Los virus lisogénicos integran su ADN en el ADN de la célula huésped y pueden vivir en el cuerpo durante muchos años antes de responder a un desencadenante. El virus se reproduce como lo hace la célula y no causa daño corporal hasta que se activa. El desencadenante libera el ADN del huésped y lo emplea para crear nuevos virus. [ cita necesaria ]
El material genético de los retrovirus se encuentra en forma de moléculas de ARN , mientras que el material genético de sus huéspedes se encuentra en forma de ADN. Cuando un retrovirus infecta una célula huésped, introducirá su ARN junto con algunas enzimas, a saber, la transcriptasa inversa y la integrasa , en la célula. Esta molécula de ARN del retrovirus debe producir una copia de ADN de su molécula de ARN antes de poder integrarse en el material genético de la célula huésped. El proceso de producir una copia de ADN a partir de una molécula de ARN se denomina transcripción inversa . Se lleva a cabo mediante una de las enzimas que porta el virus, llamada transcriptasa inversa . Una vez que esta copia de ADN se produce y queda libre en el núcleo de la célula huésped, debe incorporarse al genoma de la célula huésped. Es decir, debe insertarse en las grandes moléculas de ADN de la célula (los cromosomas). Este proceso lo realiza otra enzima transportada por el virus llamada integrasa . [ cita necesaria ]
Ahora que se ha insertado el material genético del virus, se puede decir que la célula huésped ha sido modificada para contener nuevos genes. Si esta célula huésped se divide más tarde, todos sus descendientes contendrán los nuevos genes. A veces los genes del retrovirus no expresan su información de forma inmediata. [ cita necesaria ]
Uno de los problemas de la terapia génica que utiliza retrovirus es que la enzima integrasa puede insertar el material genético del virus en cualquier posición arbitraria del genoma del huésped; inserta aleatoriamente el material genético en un cromosoma. Si se inserta material genético en medio de uno de los genes originales de la célula huésped, este gen se alterará ( mutagénesis por inserción ). Si el gen es uno que regula la división celular, puede ocurrir una división celular descontrolada (es decir, cáncer ). Este problema ha comenzado recientemente a abordarse utilizando nucleasas con dedos de zinc [1] o incluyendo ciertas secuencias como la región de control del locus de beta-globina para dirigir el sitio de integración a sitios cromosómicos específicos.
Los ensayos de terapia génica que utilizan vectores retrovirales para tratar la inmunodeficiencia combinada grave ligada al cromosoma X (X-SCID) representan la aplicación más exitosa de la terapia génica hasta la fecha. Más de veinte pacientes han sido tratados en Francia y Gran Bretaña, observándose una elevada tasa de reconstitución del sistema inmunológico. Ensayos similares fueron restringidos o suspendidos en Estados Unidos cuando se informó de leucemia en pacientes tratados en el ensayo francés de terapia génica X-SCID. [2] Hasta la fecha, cuatro niños en el ensayo francés y uno en el ensayo británico han desarrollado leucemia como resultado de la mutagénesis por inserción del vector retroviral. Todos menos uno de estos niños respondieron bien al tratamiento antileucémico convencional. Los ensayos de terapia génica para tratar la SCID debida a una deficiencia de la enzima adenosina desaminasa ( ADA ) (una forma de SCID) [3] continúan con relativo éxito en Estados Unidos, Gran Bretaña, Irlanda, Italia y Japón. [ cita necesaria ]
Los adenovirus son virus que transportan su material genético en forma de ADN bicatenario. Provocan infecciones respiratorias, intestinales y oculares en los seres humanos (especialmente el resfriado común). Cuando estos virus infectan una célula huésped, introducen su molécula de ADN en el huésped. El material genético de los adenovirus no se incorpora (transitoriamente) al material genético de la célula huésped. La molécula de ADN queda libre en el núcleo de la célula huésped y las instrucciones de esta molécula de ADN adicional se transcriben como cualquier otro gen. La única diferencia es que estos genes adicionales no se replican cuando la célula está a punto de sufrir una división celular, por lo que los descendientes de esa célula no tendrán el gen adicional. [ cita necesaria ]
Como resultado, el tratamiento con adenovirus requerirá una nueva administración en una población de células en crecimiento, aunque la ausencia de integración en el genoma de la célula huésped debería prevenir el tipo de cáncer observado en los ensayos SCID. Este sistema de vectores se ha promocionado para el tratamiento del cáncer y, de hecho, el primer producto de terapia génica autorizado para tratar el cáncer, Gendicine , es un adenovirus. Gendicine, una terapia génica adenoviral basada en p53, fue aprobada por los reguladores chinos de alimentos y medicamentos en 2003 para el tratamiento del cáncer de cabeza y cuello. Advexin, un enfoque de terapia genética similar de Introgen, fue rechazado por la Administración de Medicamentos y Alimentos de EE. UU. (FDA) en 2008. [4]
Las preocupaciones sobre la seguridad de los vectores de adenovirus surgieron después de la muerte en 1999 de Jesse Gelsinger mientras participaba en un ensayo de terapia génica. Desde entonces, el trabajo con vectores de adenovirus se ha centrado en versiones genéticamente limitadas del virus. [ cita necesaria ]
El citomegalovirus (CMV) es parte de la subfamilia de β-herpesvirus que incluye los roseolovirus. El CMV coevolucionó con una variedad de huéspedes mamíferos, incluido el CMV humano (HCMV), el CMV murino (MCMV) y el CMV rhesus (RhCMV). Los CMV se caracterizan por tener genomas de ADN grandes y una infección típicamente asintomática en huéspedes sanos.
La primera investigación sobre el citomegalovirus (CMV) como vector de terapia génica se publicó en el año 2000. El tropismo del CMV por las células progenitoras hematopoyéticas y su gran genoma (230 kpb) atrajeron inicialmente a los investigadores. [5] Desde entonces, se han utilizado vectores de vacunas basados en CMV para inducir la respuesta de las células T. [6] Más recientemente, el CMV que contiene telomerasa y folistatina se administró por vía intravenosa e intranasal en estudios con ratones con la intención de prolongar la vida útil. [7]
Los vectores virales descritos anteriormente tienen poblaciones de células huésped naturales que infectan de manera más eficiente. Los retrovirus tienen una gama limitada de células huésped naturales y, aunque los adenovirus y los virus adenoasociados pueden infectar eficazmente una gama relativamente más amplia de células, algunos tipos de células también son resistentes a la infección por estos virus. La unión y la entrada a una célula susceptible está mediada por la envoltura proteica de la superficie de un virus. Los retrovirus y los virus adenoasociados tienen una sola proteína que recubre su membrana, mientras que los adenovirus están recubiertos con una proteína de envoltura y fibras que se extienden desde la superficie del virus. Las proteínas de la envoltura de cada uno de estos virus se unen a moléculas de la superficie celular como el sulfato de heparina , que las localiza en la superficie del huésped potencial, así como al receptor proteico específico que induce cambios estructurales que promueven la entrada en la proteína viral. , o localiza el virus en endosomas donde la acidificación de la luz induce este replegamiento de la cubierta viral . En cualquier caso, la entrada a posibles células huésped requiere una interacción favorable entre una proteína de la superficie del virus y una proteína de la superficie de la célula. [ cita necesaria ]
A los efectos de la terapia génica, se podría desear limitar o ampliar la gama de células susceptibles a la transducción mediante un vector de terapia génica. Con este fin, se han desarrollado muchos vectores en los que las proteínas de la envoltura viral endógena han sido reemplazadas por proteínas de la envoltura de otros virus o por proteínas quiméricas. Dicha quimera consistiría en aquellas partes de la proteína viral necesarias para su incorporación al virión, así como en secuencias destinadas a interactuar con proteínas específicas de la célula huésped. Los virus en los que las proteínas de la envoltura han sido reemplazadas como se describe se denominan virus pseudotipados . Por ejemplo, el vector retroviral más popular para su uso en ensayos de terapia génica ha sido el lentivirus ( virus de la inmunodeficiencia simia) recubierto con las proteínas de la envoltura, la proteína G , del virus de la estomatitis vesicular . Este vector se conoce como lentivirus pseudotipado VSV G e infecta un conjunto casi universal de células. Este tropismo es característico de la proteína G del VSV con la que está recubierto este vector. Se han realizado muchos intentos para limitar el tropismo de los vectores virales a una o unas pocas poblaciones de células huésped. Este avance permitiría la administración sistémica de una cantidad relativamente pequeña de vector. El potencial de modificación de células no objetivo sería limitado y se aliviarían muchas preocupaciones de la comunidad médica. La mayoría de los intentos de limitar el tropismo han utilizado proteínas de envoltura quiméricas que contienen fragmentos de anticuerpos . Estos vectores son muy prometedores para el desarrollo de terapias genéticas tipo "bala mágica". [ cita necesaria ]
Se utiliza un vector competente para la replicación llamado ONYX-015 para replicar células tumorales. Se descubrió que, en ausencia de la proteína viral E1B-55Kd, el adenovirus causaba una apoptosis muy rápida de las células p53(+) infectadas, y esto da como resultado una progenie viral drásticamente reducida y ninguna propagación posterior. La apoptosis fue principalmente el resultado de la capacidad de EIA para inactivar p300. En las células p53(-), la eliminación de E1B 55kd no tiene consecuencias en términos de apoptosis, y la replicación viral es similar a la del virus de tipo salvaje, lo que resulta en una destrucción masiva de células. [ cita necesaria ]
Un vector con replicación defectuosa elimina algunos genes esenciales. Estos genes eliminados todavía son necesarios en el cuerpo, por lo que se reemplazan con un virus auxiliar o una molécula de ADN. [8]
Los vectores con replicación defectuosa siempre contienen una "construcción de transferencia". La construcción de transferencia porta el gen que se va a transducir o "transgén". La construcción de transferencia también porta las secuencias necesarias para el funcionamiento general del genoma viral: secuencia de empaquetado, repeticiones para la replicación y, cuando sea necesario, preparación de la transcripción inversa. Estos se denominan elementos que actúan en cis, porque deben estar en el mismo fragmento de ADN que el genoma viral y el gen de interés. Los elementos que actúan en trans son elementos virales que pueden codificarse en una molécula de ADN diferente. Por ejemplo, las proteínas estructurales virales pueden expresarse a partir de un elemento genético diferente al genoma viral. [8]
El virus del herpes simple es un virus neurotrópico humano. Esto se examina principalmente en busca de transferencia de genes en el sistema nervioso. El virus HSV-1 de tipo salvaje puede infectar neuronas y evadir la respuesta inmune del huésped, pero aún así puede reactivarse y producir un ciclo lítico de replicación viral. Por lo tanto, es típico utilizar cepas mutantes de HSV-1 que tienen una capacidad de replicación deficiente. Aunque el virus latente no es evidente desde el punto de vista transcripcional, posee promotores neuronales específicos que pueden seguir funcionando normalmente. [ se necesita más explicación ] Los anticuerpos contra el HSV-1 son comunes en los seres humanos, sin embargo, las complicaciones debidas a la infección por herpes son algo raras. [9] Se debe tener precaución en casos raros de encefalitis y esto proporciona algunas razones para usar HSV-2 como vector viral, ya que generalmente tiene tropismo por las células neuronales que inervan el área urogenital del cuerpo y luego podría evitar al huésped una patología grave. en el cerebro. [ cita necesaria ]
Los métodos no virales presentan ciertas ventajas sobre los métodos virales, siendo solo dos de ellas la producción simple a gran escala y la baja inmunogenicidad del huésped. Anteriormente, los bajos niveles de transfección y expresión del gen colocaban en desventaja a los métodos no virales; sin embargo, los avances recientes en la tecnología de vectores han producido moléculas y técnicas con eficiencias de transfección similares a las de los virus. [10]
Este es el método más simple de transfección no viral. Los ensayos clínicos realizados con inyección intramuscular de un plásmido de ADN desnudo han tenido cierto éxito; sin embargo, la expresión ha sido muy baja en comparación con otros métodos de transfección. Además de los ensayos con plásmidos, se han realizado ensayos con productos de PCR desnudos , que han tenido un éxito similar o mayor. La captación celular de ADN desnudo es generalmente ineficiente. Los esfuerzos de investigación centrados en mejorar la eficiencia de la absorción de ADN desnudo han dado lugar a varios métodos novedosos, como la electroporación , la sonoporación y el uso de una " pistola genética ", que dispara partículas de oro recubiertas de ADN dentro de la célula utilizando gas a alta presión. [11]
La electroporación es un método que utiliza pulsos cortos de alto voltaje para transportar ADN a través de la membrana celular. Se cree que este shock provoca la formación temporal de poros en la membrana celular, permitiendo el paso de las moléculas de ADN. La electroporación es generalmente eficiente y funciona en una amplia gama de tipos de células. Sin embargo, una alta tasa de muerte celular después de la electroporación ha limitado su uso, incluidas las aplicaciones clínicas.
Más recientemente, en experimentos de terapia génica se ha utilizado un método más nuevo de electroporación, denominado transfección por avalancha de electrones. Mediante el uso de una descarga de plasma de alto voltaje, el ADN se entregó de manera eficiente después de pulsos muy cortos (microsegundos). En comparación con la electroporación, la técnica resultó en una eficiencia mucho mayor y menos daño celular.
El uso del bombardeo de partículas, o pistola genética , es otro método físico de transfección de ADN. En esta técnica, el ADN se recubre con partículas de oro y se carga en un dispositivo que genera una fuerza para lograr la penetración del ADN en las células, dejando el oro en un disco de "detención".
La sonoporación utiliza frecuencias ultrasónicas para introducir ADN en las células. Se cree que el proceso de cavitación acústica altera la membrana celular y permite que el ADN entre en las células.
En un método denominado magnetofección , el ADN se compleja con partículas magnéticas y se coloca un imán debajo de la placa de cultivo de tejidos para poner los complejos de ADN en contacto con una monocapa celular.
La administración hidrodinámica implica la inyección rápida de un gran volumen de una solución en la vasculatura (como en la vena cava inferior , el conducto biliar o la vena de la cola ). La solución contiene moléculas que se insertarán en las células, como plásmidos de ADN o ARNip , y la transferencia de estas moléculas a las células se ve favorecida por la elevada presión hidrostática causada por el gran volumen de solución inyectada. [12] [13] [14]
El uso de oligonucleótidos sintéticos en terapia génica tiene como objetivo desactivar los genes implicados en el proceso de la enfermedad. Hay varios métodos mediante los cuales esto se logra. Una estrategia utiliza antisentido específico del gen objetivo para interrumpir la transcripción del gen defectuoso. Otro utiliza pequeñas moléculas de ARN llamadas ARNip para indicarle a la célula que escinda secuencias únicas específicas en la transcripción del ARNm del gen defectuoso, interrumpiendo la traducción del ARNm defectuoso y, por lo tanto, la expresión del gen. Otra estrategia utiliza oligodesoxinucleótidos de doble cadena como señuelo para los factores de transcripción necesarios para activar la transcripción del gen diana. Los factores de transcripción se unen a los señuelos en lugar del promotor del gen defectuoso, lo que reduce la transcripción del gen objetivo y reduce la expresión. Además, se han utilizado oligonucleótidos de ADN monocatenario para dirigir un cambio de base única dentro de un gen mutante. El oligonucleótido está diseñado para hibridarse de forma complementaria con el gen diana con la excepción de una base central, la base diana, que sirve como base molde para la reparación. Esta técnica se conoce como reparación de genes mediada por oligonucleótidos, reparación de genes dirigida o alteración de nucleótidos dirigida.
Para mejorar la entrega del nuevo ADN a la célula, el ADN debe protegerse de daños y cargarse positivamente. Inicialmente, se utilizaron lípidos aniónicos y neutros para la construcción de lipoplexos para vectores sintéticos. Sin embargo, a pesar de que tienen poca toxicidad asociada, son compatibles con los fluidos corporales y existe la posibilidad de adaptarlos para que sean específicos de cada tejido; Su producción es complicada y lleva mucho tiempo, por lo que se prestó atención a las versiones catiónicas.
Los lípidos catiónicos , debido a su carga positiva, se utilizaron por primera vez para condensar moléculas de ADN cargadas negativamente para facilitar la encapsulación del ADN en liposomas. Posteriormente se descubrió que el uso de lípidos catiónicos mejoraba significativamente la estabilidad de los lipoplex. Además, como resultado de su carga, los liposomas catiónicos interactúan con la membrana celular; se creía ampliamente que la endocitosis era la ruta principal por la cual las células captaban lipoplexos. Los endosomas se forman como resultado de la endocitosis; sin embargo, si los genes no pueden liberarse al citoplasma rompiendo la membrana del endosoma, se enviarán a los lisosomas donde todo el ADN se destruirá antes de que puedan lograr sus funciones. También se descubrió que aunque los propios lípidos catiónicos podrían condensar y encapsular el ADN en liposomas, la eficiencia de la transfección es muy baja debido a la falta de capacidad en términos de "escape endosómico". Sin embargo, cuando se agregaron lípidos auxiliares (generalmente lípidos electroneutrales, como DOPE) para formar lipoplexos, se observó una eficiencia de transfección mucho mayor. Posteriormente se descubrió que ciertos lípidos tienen la capacidad de desestabilizar las membranas endosómicas para facilitar el escape del ADN del endosoma, por lo que esos lípidos se denominan lípidos fusogénicos. Aunque los liposomas catiónicos se han utilizado ampliamente como una alternativa para los vectores de administración de genes, también se observó una toxicidad dependiente de la dosis de los lípidos catiónicos que podría limitar sus usos terapéuticos. [15]
El uso más común de los lipoplex ha sido en la transferencia de genes a células cancerosas, donde los genes suministrados han activado genes de control supresores de tumores en la célula y disminuyen la actividad de los oncogenes. Estudios recientes han demostrado que los lipoplex son útiles para transfectar células epiteliales respiratorias .
Los polimerosomas son versiones sintéticas de los liposomas ( vesículas con una bicapa lipídica ), fabricados a partir de copolímeros de bloques anfifílicos . Pueden encapsular contenidos hidrofílicos o hidrofóbicos y pueden usarse para entregar cargas como ADN, proteínas o medicamentos a las células. Las ventajas de los polimerosomas sobre los liposomas incluyen mayor estabilidad, resistencia mecánica, tiempo de circulación sanguínea y capacidad de almacenamiento. [16] [17] [18]
Los complejos de polímeros con ADN se denominan poliplex. [15] [19] La mayoría de los poliplex consisten en polímeros catiónicos y su fabricación se basa en el autoensamblaje mediante interacciones iónicas. Una diferencia importante entre los métodos de acción de los poliplex y los lipoplex es que los poliplex no pueden liberar directamente su carga de ADN en el citoplasma. Como resultado, se requirió la cotransfección con agentes líticos de endosomas, como adenovirus inactivados, para facilitar el escape de las nanopartículas de la vesícula endocítica formada durante la absorción de partículas. Sin embargo, una mejor comprensión de los mecanismos por los cuales el ADN puede escapar de la vía endolisosomal, es decir, el efecto esponja de protones, [20] ha desencadenado nuevas estrategias de síntesis de polímeros, como la incorporación de residuos protonables en la columna vertebral del polímero y ha revitalizado la investigación sobre sistemas basados en policationes. [21]
Debido a su baja toxicidad, alta capacidad de carga y facilidad de fabricación, los nanoportadores policatiónicos resultan muy prometedores en comparación con sus rivales, como los vectores virales que muestran una alta inmunogenicidad y potencial carcinógeno, y los vectores basados en lípidos que causan toxicidad dependiente de la dosis. La polietilenimina [22] y el quitosano se encuentran entre los vehículos poliméricos que se han estudiado ampliamente para el desarrollo de terapias de administración de genes. Otros portadores policatiónicos, como los poli(beta-aminoésteres) [23] y el polifosforamidato [24], se están agregando a la biblioteca de posibles portadores de genes. Además de la variedad de polímeros y copolímeros, la facilidad para controlar el tamaño, la forma y la química de la superficie de estos nanoportadores poliméricos les da una ventaja en la capacidad de focalización y el aprovechamiento de una permeabilidad mejorada y un efecto de retención. [25]
Un dendrímero es una macromolécula muy ramificada y de forma esférica. La superficie de la partícula puede funcionalizarse de muchas maneras y muchas de las propiedades de la construcción resultante están determinadas por su superficie.
En particular, es posible construir un dendrímero catiónico, es decir uno con una carga superficial positiva. Cuando está en presencia de material genético como ADN o ARN, la complementariedad de carga conduce a una asociación temporal del ácido nucleico con el dendrímero catiónico. Al llegar a su destino, el complejo dendrímero-ácido nucleico ingresa a la célula mediante endocitosis.
En los últimos años, el punto de referencia para los agentes de transfección han sido los lípidos catiónicos. Se ha informado que las limitaciones de estos reactivos competitivos incluyen: la falta de capacidad para transfectar algunos tipos de células, la falta de capacidades sólidas de focalización activa, incompatibilidad con modelos animales y toxicidad. Los dendrímeros ofrecen una construcción covalente robusta y un control extremo sobre la estructura de las moléculas y, por tanto, sobre el tamaño. En conjunto, estos ofrecen ventajas convincentes en comparación con los enfoques existentes.
La producción de dendrímeros ha sido históricamente un proceso lento y costoso que consta de numerosas reacciones lentas, un obstáculo que limitó gravemente su desarrollo comercial. La empresa Dendritic Nanotechnologies, con sede en Michigan, descubrió un método para producir dendrímeros utilizando química impulsada cinéticamente, un proceso que no sólo redujo el costo en una magnitud de tres, sino que también redujo el tiempo de reacción de más de un mes a varios días. Estos nuevos dendrímeros "Priostar" se pueden construir específicamente para transportar una carga útil de ADN o ARN que transfecta células con alta eficiencia con poca o ninguna toxicidad. [ cita necesaria ]
Se ha demostrado que las nanopartículas inorgánicas, como el oro , la sílice , el óxido de hierro (por ejemplo, magnetofección ) y los fosfatos de calcio, son capaces de administrar genes. [26] Algunos de los beneficios de los vectores inorgánicos son su estabilidad en almacenamiento, bajo costo de fabricación y, a menudo, tiempo, baja inmunogenicidad y resistencia al ataque microbiano. Se ha demostrado que los materiales nanométricos de menos de 100 nm atrapan eficazmente el ADN o el ARN y permiten su escape del endosoma sin degradación. También se ha demostrado que los inorgánicos exhiben una transfección in vitro mejorada para líneas celulares adheridas debido a su mayor densidad y ubicación preferencial en la base de la placa de cultivo. Los puntos cuánticos también se han utilizado con éxito y permiten acoplar la terapia génica con un marcador de fluorescencia estable. También se están desarrollando nanopartículas orgánicas diseñadas que podrían usarse para la administración conjunta de genes y agentes terapéuticos. [27]
Los péptidos de penetración celular (CPP), también conocidos como dominios de transducción de péptidos (PTD), son péptidos cortos (< 40 aminoácidos) que atraviesan eficientemente las membranas celulares mientras se unen de forma covalente o no covalente a varias moléculas, facilitando así la transferencia de estas moléculas. entrada a las células. La entrada celular se produce principalmente por endocitosis , pero también existen otros mecanismos de entrada. Ejemplos de moléculas de carga de CPP incluyen ácidos nucleicos , liposomas y fármacos de bajo peso molecular. [28] [29]
La carga de CPP se puede dirigir a orgánulos celulares específicos incorporando secuencias de localización en secuencias de CPP. Por ejemplo, las secuencias de localización nuclear se utilizan comúnmente para guiar la carga de CPP hacia el núcleo. [30] Como guía sobre las mitocondrias, se puede utilizar una secuencia de direccionamiento mitocondrial ; este método se utiliza en protofección (una técnica que permite insertar ADN mitocondrial extraño en las mitocondrias de las células). [31] [32]
Debido a que todos los métodos de transferencia de genes tienen desventajas, se han desarrollado algunos métodos híbridos que combinan dos o más técnicas. Los virosomas son un ejemplo; combinan liposomas con un virus de influenza o VIH inactivado . Se ha demostrado que esto tiene una transferencia de genes más eficiente en las células epiteliales respiratorias que los métodos virales o liposomales solos. Otros métodos implican mezclar otros vectores virales con lípidos catiónicos o hibridar virus. [ cita necesaria ]
{{cite journal}}: Mantenimiento CS1: varios nombres: lista de autores ( enlace ){{cite journal}}: Mantenimiento CS1: varios nombres: lista de autores ( enlace )La definición del diccionario de poliplex en Wikcionario