Comenzó su carrera como jefe horticultor en Hatfield House de Robert Cecil, conde de Salisbury, quien inicia a Tradescant en exploraciones al enviarlo a los Países Bajos para adquirir árboles frutales entre 1610 y 1611.
Posteriormente diseñó jardines en el área de St Augustine's Abbey para Lord Edward Wotton entre 1615 y 1623.
En todas sus expediciones, recolectó semillas y bulbos de los lugares que visitaba y formó una colección de curiosidades de historia natural y etnográficas ubicada en una casa de grandes proporciones: "The Ark", en Lambeth, Londres.
The Ark fue un prototípico "gabinete de maravillas".
La novela de Philippa Gregory, Earthly Joys está inspirada en su vida.