Cofundó junto con William Hanna el estudio de animación Hanna-Barbera (luego absorbido por Warner Bros.[3] Su familia se mudó a Flatbush (Brooklyn) cuando tenía cuatro meses de edad.Como miembro del Ejército de los Estados Unidos, Larry participó en la invasión a Sicilia.[6] Cuando Barbera tenía quince años de edad, su padre abandonó a la familia y su tío materno, Jim, se convirtió en su principal figura paterna.[8] Estudió en Erasmus Hall High School, donde practicó boxeo; fue entrenado por el representante del boxeador Al Singer.[9] Barbera se graduó en 1928 y, siete años más tarde, contrajo matrimonio con Dorothy Earl, quien había sido su novia en la escuela secundaria.[12] Disney respondió a su carta diciendo que lo llamaría cuando estuviera en Nueva York, pero esto no sucedió.[17] Barbera conoció a William Hanna mientras trabajaba en el estudio, y en 1939 iniciaron una asociación que duraría cincuenta años.[18][19] Ambos trabajaron junto con el caricaturista Tex Avery, creador de personajes como el Pato Lucas y Bugs Bunny.[28][29] Sin embargo, Hanna y Barbera fueron pioneros al momento de hacer interactuar actores con personajes animados.Entre los más famosos se encuentran Gene Kelly, quien participó en las películas Levando anclas (1945) e Invitation to the Dance (1956), y Esther Williams en la cinta Dangerous When Wet (1953).[30][31][32] El primer cortometraje de Tom y Jerry en ganar un premio Óscar fue The Yankee Doodle Mouse (1943), el cual estaba basado en una temática bélica.[18][31] Fred Quimby aceptó todos estos premios, sin invitar a Barbera ni Hanna al escenario.Además, fue acreditado como el único productor de los cortometrajes, hecho que había perjudicado con anterioridad a Ising.[31] En 1957, Barbera se unió nuevamente con William Hanna con el objetivo de producir dibujos animados para televisión y cine.[14] El primer trabajo del estudio fue The Ruff & Reddy Show,[25] una serie que mostraba la amistad entre un gato y un perro.Aunque ambas series fueron emitidas durante los años setenta y ochenta, Los Picapiedra permaneció como la más popular.[32][48] Barbera interpretó además a un personaje del dibujo animado Tom and Jerry in: The Mansion Cat (2000).