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Etiqueta de proteína

Las etiquetas de proteínas son secuencias de péptidos injertadas genéticamente en una proteína recombinante . Las etiquetas se adhieren a las proteínas con diversos fines. Se pueden agregar a cualquiera de los extremos de la proteína objetivo, por lo que son específicas del extremo C o N , o son específicas tanto del extremo C como del N. Algunas etiquetas también se insertan en sitios dentro de la proteína de interés; se conocen como etiquetas internas. [1]

Las etiquetas de afinidad se añaden a las proteínas para que puedan purificarse a partir de su fuente biológica cruda mediante una técnica de afinidad. Las etiquetas de afinidad incluyen la proteína de unión a quitina (CBP), la proteína de unión a maltosa (MBP), la etiqueta Strep [2] y la glutatión-S-transferasa (GST). La etiqueta poli(His) es una etiqueta de proteína ampliamente utilizada, que se une a matrices que contienen iones metálicos inmovilizados.

Las etiquetas de solubilización se utilizan, especialmente para proteínas recombinantes expresadas en especies como E. coli , para ayudar al plegamiento adecuado de las proteínas y evitar que se agreguen en cuerpos de inclusión . Estas etiquetas incluyen tiorredoxina (TRX) y poli(NANP). Algunas etiquetas de afinidad tienen una doble función como agente de solubilización, como MBP y GST.

Las etiquetas cromatográficas se utilizan para alterar las propiedades cromatográficas de la proteína y lograr una resolución diferente en una técnica de separación particular. A menudo, consisten en aminoácidos polianiónicos, como la etiqueta FLAG o la etiqueta de poliglutamato. [3]

Las etiquetas de epítopos son secuencias peptídicas cortas que se eligen porque los anticuerpos de alta afinidad se pueden producir de manera confiable en muchas especies diferentes. Por lo general, se derivan de genes virales, lo que explica su alta inmunorreactividad. Las etiquetas de epítopos incluyen ALFA-tag, V5-tag, Myc-tag , HA-tag , Spot-tag , T7-tag y NE-tag . Estas etiquetas son particularmente útiles para experimentos de inmunotransferencia , inmunofluorescencia e inmunoprecipitación , aunque también se utilizan en la purificación de anticuerpos.

Las etiquetas de fluorescencia se utilizan para proporcionar una lectura visual de una proteína. Las etiquetas de fluorescencia más utilizadas son la proteína fluorescente verde (GFP) y sus variantes. [4] Las aplicaciones más avanzadas de la GFP incluyen su uso como un indicador de plegamiento (fluorescente si está plegada, incolora si no lo está).

Las etiquetas de proteínas pueden permitir una modificación enzimática específica (como la biotinilación por la ligasa de biotina) o una modificación química (como el acoplamiento a otras proteínas a través de SpyCatcher o la reacción con FlAsH-EDT2 para la obtención de imágenes de fluorescencia). A menudo, las etiquetas se combinan para conectar las proteínas a varios otros componentes. Sin embargo, con la adición de cada etiqueta viene el riesgo de que la función nativa de la proteína pueda verse comprometida por interacciones con la etiqueta. Por lo tanto, después de la purificación, las etiquetas a veces se eliminan mediante proteólisis específica (por ejemplo, mediante la proteasa TEV , la trombina , el factor Xa o la enteropeptidasa ) o el empalme de inteína .

Lista de etiquetas de proteínas

(Ver Aminoácido proteinogénico#Propiedades químicas para los códigos de aminoácidos de la A a la Z)

Etiquetas de péptidos

Etiquetas peptídicas covalentes

Etiquetas de proteínas

Otros

La etiqueta HiBiT fue desarrollada por científicos de Promega . Es una etiqueta peptídica de 11 aminoácidos y se puede fusionar con el extremo N o C o con ubicaciones internas de las proteínas. [29] Su pequeño tamaño permite una rápida incorporación de esta etiqueta a otras proteínas mediante la tecnología CRISPR/Cas9. [29]

Aplicaciones

Referencias

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