Listeria monocytogenes es la especie de bacteria patógena que causa la infección listeriosis . Es una bacteria anaeróbica facultativa , capaz de sobrevivir en presencia o ausencia de oxígeno. Puede crecer y reproducirse dentro de las células del huésped y es uno de los patógenos transmitidos por los alimentos más virulentos : del 20 al 30% de las infecciones por listeriosis transmitidas por los alimentos en personas de alto riesgo pueden ser fatales. [1] [2] [3] En la Unión Europea , la listeriosis sigue una tendencia ascendente que comenzó en 2008, causando 2.161 casos confirmados y 210 muertes notificadas en 2014, un 16% más que en 2013. Las tasas de mortalidad por listeriosis también son más altas en la Unión Europea. UE que para otros patógenos transmitidos por los alimentos. [4] [5] Responsable de aproximadamente 1.600 enfermedades y 260 muertes en los Estados Unidos anualmente, la listeriosis ocupa el tercer lugar en el número total de muertes entre patógenos bacterianos transmitidos por los alimentos, con tasas de mortalidad que superan incluso a Salmonella spp. y Clostridium botulinum .
Listeria monocytogenes es una bacteria Gram positiva , del filo Bacillota , que lleva el nombre de Joseph Lister . Su capacidad para crecer a temperaturas tan bajas como 0 °C permite la multiplicación a temperaturas de refrigeración típicas, lo que aumenta en gran medida su capacidad para evadir el control en los alimentos humanos. Motil a través de flagelos a 30 °C y menos, pero generalmente no a 37 °C, [6] L. monocytogenes puede moverse dentro de las células eucariotas mediante la polimerización explosiva de filamentos de actina (conocidos como colas de cometa o cohetes de actina). [3] Una vez que Listeria monocytogenes ingresa al citoplasma del huésped, múltiples cambios en el metabolismo bacteriano y la expresión genética ayudan a completar la metamorfosis de su habitante del suelo a patógeno intracelular. [7]
Los estudios sugieren que hasta el 10% del tracto gastrointestinal humano puede estar colonizado por L. monocytogenes . [1] Sin embargo, las enfermedades clínicas debidas a L. monocytogenes son reconocidas con mayor frecuencia por los veterinarios , especialmente como meningoencefalitis en rumiantes . Ver: listeriosis en animales .
Debido a su frecuente patogenicidad , que causa meningitis en los recién nacidos (adquirida por vía transvaginal), a menudo se recomienda a las madres embarazadas que no coman quesos blandos como Brie , Camembert , feta y queso blanco fresco , que pueden estar contaminados y permitir el crecimiento de L. monocytogenes. . [8] Es la tercera causa más común de meningitis en recién nacidos. Listeria monocytogenes puede infectar el cerebro, las membranas de la médula espinal y/o el torrente sanguíneo del huésped [9] mediante la ingestión de alimentos contaminados, como lácteos no pasteurizados o alimentos crudos. [10]
L. monocytogenes es una bacteria grampositiva , no formadora de esporas , móvil, anaeróbica facultativa y con forma de bastón. Es catalasa positiva y oxidasa negativa, y expresa una beta hemolisina, que provoca la destrucción de los glóbulos rojos. Esta bacteria exhibe una motilidad giratoria característica cuando se observa con microscopía óptica. [11] Aunque L. monocytogenes es activamente móvil mediante flagelos perítricos a temperatura ambiente (20-25 °C), el organismo no sintetiza flagelos a temperatura corporal (37 °C). [12]
El género Listeria pertenece a la clase Bacilli y al orden Bacillales, que también incluye Bacillus y Staphylococcus . Listeria contiene actualmente 27 especies: Listeria Aquatica, Listeria booriae, Listeria cornellensis, Listeria cossartiae, Listeria costaricensis, Listeria farberi, Listeria fleischmannii, Listeria floridensis, Listeria goaensis, Listeria grandensis, Listeria grayi, Listeria immobilis, Listeria innocua, Listeria ivanovii, Listeria marthii , Listeria monocytogenes, Listeria murrayi, Listeria newyorkensis, Listeria portnoyi, Listeria riparia, Listeria rocourtiae, Listeria rustica, Listeria seeligeri, Listeria thailandensis, Listeria valentina, Listeria weihenstephanensis, Listeria welshimeri . L. denitrificans , que anteriormente se pensaba que formaba parte del género Listeria , fue reclasificada en el nuevo género Jonesia . [13] Tanto L. ivanovii como L. monocytogenes son patógenos en ratones, pero sólo L. monocytogenes se asocia consistentemente con enfermedades humanas. [14] Los 13 serotipos de L. monocytogenes pueden causar enfermedades, pero más del 90% de los aislamientos humanos pertenecen a solo tres serotipos: 1/2a, 1/2b y 4b. Las cepas de L. monocytogenes serotipo 4b son responsables del 33 al 35% de los casos humanos esporádicos en todo el mundo y de todos los principales brotes transmitidos por alimentos en Europa y América del Norte desde la década de 1980. [15]
L. monocytogenes fue descrita por primera vez por EGD Murray (Everitt George Dunne Murray) en 1924 basándose en seis casos de muerte súbita en conejos jóvenes, y publicó una descripción con sus colegas en 1926. [16] Murray se refirió al organismo como Bacterium monocytogenes antes de que Harvey Pirie cambiara el nombre del género a Listeria en 1940. [17] Aunque en la década de 1920 se publicaron descripciones clínicas de la infección por L. monocytogenes tanto en animales como en humanos, no se reconoció como una causa importante de infección neonatal , sepsis y meningitis hasta 1952 en Alemania Oriental . [18] La listeriosis en adultos se asoció más tarde con pacientes que vivían con sistemas inmunológicos comprometidos, como personas que tomaban medicamentos inmunosupresores y corticosteroides para enfermedades malignas o trasplantes de órganos, y aquellos con infección por VIH. [19]
Sin embargo, L. monocytogenes no fue identificada como causa de enfermedades transmitidas por alimentos hasta 1981. Un brote de listeriosis en Halifax , Nueva Escocia , que involucró 41 casos y 18 muertes, principalmente en mujeres embarazadas y recién nacidos, estuvo epidemiológicamente relacionado con el consumo de ensalada de col que contenía repollo que había sido contaminado con estiércol de oveja contaminado con L. monocytogenes . [20] Desde entonces, se han informado varios casos de listeriosis transmitida por los alimentos, y ahora se reconoce ampliamente que L. monocytogenes representa un peligro importante en la industria alimentaria. [21]
La infección invasiva por L. monocytogenes causa la enfermedad listeriosis. Cuando la infección no es invasiva, cualquier enfermedad como consecuencia de la infección se denomina gastroenteritis febril. Las manifestaciones de listeriosis incluyen sepsis, [22] meningitis (o meningoencefalitis ), [22] encefalitis , [23] úlcera corneal, [24] neumonía, [25] miocarditis, [26] e infecciones intrauterinas o cervicales en mujeres embarazadas, que puede resultar en un aborto espontáneo (del segundo al tercer trimestre) o muerte fetal . Los recién nacidos supervivientes de listeriosis fetomaterna pueden sufrir granulomatosis infantiseptica ( granulomas piógenos distribuidos por todo el cuerpo) y pueden sufrir retraso físico. Los síntomas similares a los de la gripe , incluida la fiebre persistente, suelen preceder a la aparición de los trastornos antes mencionados. Los síntomas gastrointestinales, como náuseas, vómitos y diarrea , pueden preceder a formas más graves de listeriosis o pueden ser los únicos síntomas expresados. Los síntomas gastrointestinales se asociaron epidemiológicamente con el uso de antiácidos o cimetidina . Se desconoce el tiempo de aparición de las formas graves de listeriosis, pero puede variar desde unos pocos días hasta 3 semanas. Se desconoce el tiempo de aparición de los síntomas gastrointestinales, pero probablemente supera las 12 horas. Un estudio inicial sugirió que L. monocytogenes es única entre las bacterias Gram positivas porque podría poseer lipopolisacárido , [27] que actúa como endotoxina . Más tarde se descubrió que no era una verdadera endotoxina. Las paredes celulares de Listeria contienen constantemente ácidos lipoteicoicos , en los que un resto glicolípido, como un galactosil-glucosil-diglicérido, está unido covalentemente al fosfomonoéster terminal del ácido teicoico. Esta región lipídica ancla la cadena polimérica a la membrana citoplasmática. Estos ácidos lipoteicoicos se parecen a los lipopolisacáridos de las bacterias Gram-negativas tanto en estructura como en función, siendo los únicos polímeros anfipáticos en la superficie celular. [28] [29]
L. monocytogenes tiene residuos de D-galactosa en su superficie que pueden unirse a los receptores de D-galactosa en las paredes de la célula huésped. Estas células huésped son generalmente células M y placas de Peyer de la mucosa intestinal. Una vez adherida a estas células, L. monocytogenes puede traslocar la membrana intestinal hacia el cuerpo. [ cita necesaria ] . Alternativamente, las pérdidas de integridad estructural (como pequeñas laceraciones) en el epitelio gastrointestinal podrían permitir que el microorganismo penetre desde el tracto gastrointestinal hasta el torrente sanguíneo.
La dosis infecciosa de L. monocytogenes varía según la cepa y la susceptibilidad de la víctima. De los casos contagiados a través de leche cruda o supuestamente pasteurizada, se puede suponer con seguridad que, en personas susceptibles, menos de 1.000 organismos en total pueden causar la enfermedad. L. monocytogenes puede invadir el epitelio gastrointestinal. Una vez que la bacteria ingresa a los monocitos , macrófagos o leucocitos polimorfonucleares del huésped , se transmite por la sangre (sepsis) y puede crecer. Su presencia intracelular en células fagocíticas también permite el acceso al cerebro y probablemente la migración transplacentaria al feto en mujeres embarazadas. Este proceso se conoce como el "mecanismo del caballo de Troya". La patogénesis de L. monocytogenes se centra en su capacidad para sobrevivir y multiplicarse en células huésped fagocíticas. Parece que Listeria evolucionó originalmente para invadir las membranas de los intestinos, como una infección intracelular, y desarrolló un mecanismo químico para hacerlo. Se trata de una proteína bacteriana internalina (InlA/InlB), que se une a una proteína de la membrana celular intestinal, la "cadherina", y permite que las bacterias invadan las células a través de un mecanismo de cremallera. Estas moléculas de adhesión también se encuentran en otras dos barreras inusualmente resistentes en los seres humanos: la barrera hematoencefálica y la barrera fetal-placentaria, y esto puede explicar la aparente afinidad que tiene L. monocytogenes por causar meningitis y afectar a los bebés en el útero . Una vez dentro de la célula, L. monocytogenes acidifica rápidamente la luz de la vacuola formada a su alrededor durante la entrada celular para activar la listeriolisina O, una citolisina dependiente del colesterol capaz de alterar la membrana vacuolar. Esto libera al patógeno y le da acceso al citosol de la célula, donde continúa su patogénesis. [30] La motilidad en el espacio intracelular es proporcionada por la proteína inductora del ensamblaje de actina, que permite a las bacterias utilizar la maquinaria de polimerización de actina de la célula huésped para polimerizar el citoesqueleto y dar un "impulso" a la célula bacteriana para que pueda moverse dentro de la célula. . El mismo mecanismo también permite que las bacterias viajen de una célula a otra. [31]
L. monocytogenes puede actuar como saprófito o patógeno , dependiendo de su entorno. Cuando esta bacteria está presente dentro de un organismo huésped, la detección de quórum y otras señales provocan la regulación positiva de varios genes de virulencia . Dependiendo de la ubicación de la bacteria dentro del organismo huésped, diferentes activadores regulan positivamente los genes de virulencia. SigB, un factor sigma alternativo , regula positivamente los genes Vir en los intestinos, mientras que PrfA regula positivamente la expresión genética cuando la bacteria está presente en la sangre. [32] [33] [34] [35] L. monocytogenes también detecta la entrada al huésped examinando las fuentes de nutrientes disponibles. Por ejemplo, la L-glutamina , una fuente abundante de nitrógeno en el huésped, induce la expresión de genes de virulencia en L. monocytogenes . [36] Poco se sabe acerca de cómo esta bacteria cambia entre actuar como saprófito y patógeno; sin embargo, se cree que se necesitan varios ARN no codificantes para inducir este cambio. [ cita necesaria ]
L. monocytogenes tiene tres linajes distintos, con diferentes historias evolutivas y potenciales patógenos. [37] Las cepas del linaje I contienen la mayoría de los aislados clínicos humanos y todos los clones epidémicos humanos, pero están subrepresentadas en los aislados clínicos animales. [37] Las cepas Lineage II están sobrerrepresentadas en casos animales y subrepresentadas en casos clínicos humanos, y son más prevalentes en muestras ambientales y de alimentos . [38] Los aislados del linaje III son muy raros, pero significativamente más comunes en animales que en humanos. [37]
La prueba de Anton se utiliza en la identificación de L. monocytogenes ; la instilación de un cultivo en el saco conjuntival de un conejo o cobaya provoca queratoconjuntivitis grave en 24 horas. [39] [40]
Las especies de Listeria crecen en medios como el agar Mueller-Hinton. La identificación mejora si los cultivos primarios se realizan en agar que contiene sangre de oveja, porque se puede observar la pequeña zona característica de hemólisis alrededor y debajo de las colonias. El aislamiento puede mejorarse si el tejido se mantiene a 4 °C durante algunos días antes de la inoculación en medio bacteriológico. El organismo es un anaerobio facultativo, catalasa positivo y móvil. Listeria produce ácido, pero no gas, al fermentar una variedad de carbohidratos. [41] La motilidad a temperatura ambiente y la producción de hemolisina son hallazgos principales que ayudan a diferenciar Listeria de Corynebacterium . [42]
Los métodos de análisis de alimentos son complejos y requieren mucho tiempo. El método actual de la FDA estadounidense, revisado en septiembre de 1990, requiere 24 y 48 horas de enriquecimiento, seguido de una variedad de otras pruebas. El tiempo total hasta la identificación lleva de cinco a siete días, pero el anuncio de sondas de ADN específicas no marcadas pronto debería permitir una confirmación más sencilla y rápida de los aislamientos sospechosos. [43]
La tecnología del ADN recombinante puede incluso permitir en el futuro análisis positivos de dos a tres días. Actualmente, la FDA está colaborando en la adaptación de su metodología para cuantificar cantidades muy bajas de organismos en los alimentos. [ cita necesaria ]
Cuando ocurre meningitis listérica, la mortalidad general puede alcanzar el 70%, la de sepsis el 50% y la de infecciones perinatales/neonatales más del 80%. En las infecciones durante el embarazo, la madre suele sobrevivir. Existen informes de tratamientos exitosos con penicilina o ampicilina parenteral . [44] Se ha demostrado que el trimetoprima-sulfametoxazol es eficaz en pacientes alérgicos a la penicilina. [44]
Se ha propuesto un bacteriófago, el fago P100 de Listeria , como aditivo alimentario para controlar L. monocytogenes . [45] Varias empresas han desarrollado tratamientos con bacteriófagos. EBI Food Safety e Intralytix tienen productos adecuados para el tratamiento de la bacteria. La Administración de Alimentos y Medicamentos de EE. UU. (FDA) aprobó un cóctel de seis bacteriófagos de Intralytix y un producto de fago de un tipo de EBI Food Safety diseñado para matar L. monocytogenes . Los usos incluirían potencialmente rociarlo sobre frutas y carnes listas para comer, como lonchas de jamón y pavo. [46]
Debido a que L. monocytogenes es una bacteria intracelular, algunos estudios han utilizado esta bacteria como vector para administrar genes in vitro . La eficiencia de transfección actual sigue siendo pobre. Un ejemplo del uso exitoso de L. monocytogenes en tecnologías de transferencia in vitro es la administración de terapias génicas para casos de fibrosis quística. [47]
Listeria monocytogenes se está investigando como inmunoterapia contra el cáncer para varios tipos de cáncer. [48] [49]
Se está desarrollando una vacuna viva atenuada contra el cáncer de Listeria monocytogenes , ADXS11-001 , como posible tratamiento para el carcinoma cervical . [50]
Los investigadores han encontrado Listeria monocytogenes en al menos 37 especies de mamíferos , tanto domesticados como salvajes, así como en al menos 17 especies de aves y posiblemente en algunas especies de peces y mariscos . Los laboratorios pueden aislar Listeria monocytogenes del suelo , ensilaje y otras fuentes ambientales. Listeria monocytogenes es bastante resistente y resiste notablemente bien los efectos nocivos de la congelación, el secado y el calor para una bacteria que no forma esporas. La mayoría de las cepas de Listeria monocytogenes son patógenas hasta cierto punto. [ cita necesaria ]
Listeria monocytogenes se ha asociado con alimentos como leche cruda , leche líquida pasteurizada, [51] quesos (particularmente variedades de maduración suave), huevos duros, [52] helados , vegetales crudos , salchichas fermentadas de carne cruda , carne cruda y aves cocidas , carnes crudas (de todo tipo) y pescado crudo y ahumado . La mayoría de las bacterias pueden sobrevivir cerca de temperaturas bajo cero, pero no pueden absorber nutrientes, crecer ni replicarse; sin embargo, L. monocytogenes tiene la capacidad de crecer a temperaturas tan bajas como 0 °C, lo que permite una multiplicación exponencial en alimentos refrigerados. A una temperatura de refrigeración, como 4 °C, la cantidad de hierro férrico puede afectar el crecimiento de L. monocytogenes . [53]
El sitio principal de infección es el epitelio intestinal, donde las bacterias invaden las células no fagocíticas mediante el mecanismo de "cremallera". La captación es estimulada por la unión de internalinas de listeria (Inl) a E-cadherina , un factor de adhesión de la célula huésped, o Met ( c-Met ), factor de crecimiento de hepatocitos. Esta unión activa ciertas Rho-GTPasas, que posteriormente se unen y estabilizan la proteína del síndrome de Wiskott-Aldrich (WASp). Luego, WASp puede unirse al complejo Arp2/3 y servir como punto de nucleación de actina . La polimerización posterior de actina crea una "copa fagocítica", una estructura basada en actina que los fagocitos normalmente forman alrededor de materiales extraños antes de la endocitosis. El efecto neto de la unión de internalina es explotar el aparato formador de uniones del huésped para internalizar la bacteria. L. monocytogenes también puede invadir células fagocíticas (p. ej., macrófagos ), pero sólo requiere internalinas para la invasión de células no fagocíticas. [ cita necesaria ]
Después de la internalización, la bacteria debe escapar de la vacuola/ fagosoma antes de que pueda ocurrir la fusión con un lisosoma . Tres factores de virulencia principales que permiten que la bacteria escape son la listeriolisina O (LLO codificada por hly ), la fosfolipasa A (codificada por plcA ) y la fosfolipasa B ( plcB ). [54] [55] La secreción de LLO y PlcA altera la membrana vacuolar y permite que la bacteria escape al citoplasma, donde puede proliferar. [ cita necesaria ]
Una vez en el citoplasma, L. monocytogenes explota la actina del huésped por segunda vez. Las proteínas ActA asociadas con el antiguo polo de la célula bacteriana (al ser un bacilo, L. monocytogenes se septa en el medio de la célula, por lo que tiene un polo nuevo y un polo antiguo) son capaces de unirse al complejo Arp2/3 , induciendo así la nucleación de actina en un área específica de la superficie de la célula bacteriana. Luego, la polimerización de actina impulsa a la bacteria unidireccionalmente hacia la membrana de la célula huésped. La protuberancia formada puede luego ser internalizada por una célula vecina, formando una vacuola de doble membrana de la cual la bacteria debe escapar usando LLO y PlcB. Este modo de propagación directa de célula a célula implica un mecanismo celular conocido como paracitofagia . [56]
La capacidad de L. monocytogenes para infectar con éxito depende de su resistencia a las altas concentraciones de bilis que se encuentran en todo el tracto gastrointestinal . [57] Esta resistencia se debe, en parte, a la proteína de reparación por escisión de nucleótidos UvrA , que es necesaria para reparar los daños en el ADN causados por las sales biliares . [58]