Diplomado en Filosofía y Artes Plásticas, trabajó de cerrajero hasta que fue al servicio militar, donde escribió sus primeros sketches.
Dujardin comenzó su carrera como actor realizando presentaciones en varios bares y cabarets de París.
La primera vez que llamó públicamente la atención, fue cuando apareció en el show de talento francés Graines de star, en 1996, como integrante del grupo Nous C Nous, que fue formado por él mismo y los miembros del Carré Blanc teatro.
En 2006, se aventuró con el teatro por primera vez, interpretando junto a Alexandra Lamy la obra de William Gibson "Deux sur la balançoire".
En 2009, apareció en la película Un homme et son chien, junto a Jean-Paul Belmondo, con el que ha sido comparado varias veces.
En 2010, protagonizó junto a Albert Dupontel, "Le Bruit des glaçons", una comedia de humor negro escrita y dirigida por Bertrand Blier.
Su actuación obtuvo la aclamación de la crítica y recibió numerosas nominaciones, incluyendo el premio de la Broadcast Film Critics Association por Mejor Actor y el Screen Actors Guild al Mejor Actor.