El 5,10-Metilentetrahidrofolato (5,10-CH2-THF) es el sustrato utilizado por la enzima metilentetrahidrofolato reductasa (MTHFR)[2][3] para producir 5-metiltetrahidrofolato (5-MTHF, o ácido levomefólico).
El 5,10-CH2-THF también puede ser utilizado como coenzima en la biosíntesis de timidina.
Más específicamente es el dador de C1 en la reacción catalizada por las enzimas timidilato sintasa y timidilato sintasa (FAD).
También funciona como cofactor en la síntesis de serina a partir de glicina por medio de la enzima serina hidroximetil transferasa.