Las pruebas de compatibilidad sanguínea se realizan en un laboratorio médico para identificar posibles incompatibilidades entre sistemas de grupos sanguíneos en transfusiones de sangre . También se utiliza para diagnosticar y prevenir algunas complicaciones del embarazo que pueden ocurrir cuando el bebé tiene un grupo sanguíneo diferente al de la madre. Las pruebas de compatibilidad sanguínea incluyen el grupo sanguíneo , que detecta los antígenos en los glóbulos rojos que determinan el tipo de sangre de una persona; pruebas de anticuerpos inesperados contra antígenos de grupos sanguíneos ( detección e identificación de anticuerpos ); y, en el caso de las transfusiones de sangre, mezclar el plasma del receptor con los glóbulos rojos del donante para detectar incompatibilidades ( crossmatching ). La tipificación sanguínea de rutina implica determinar el tipo ABO y RhD (factor Rh) [nota 1] e implica tanto la identificación de antígenos ABO en los glóbulos rojos (agrupación directa) como la identificación de anticuerpos ABO en el plasma (agrupación inversa). Se pueden analizar otros antígenos de grupos sanguíneos en situaciones clínicas específicas.
Las pruebas de compatibilidad sanguínea utilizan reacciones entre antígenos de grupos sanguíneos y anticuerpos , específicamente la capacidad de los anticuerpos para hacer que los glóbulos rojos se agrupen cuando se unen a antígenos en la superficie celular, un fenómeno llamado aglutinación . Las técnicas que se basan en reacciones antígeno-anticuerpo se denominan métodos serológicos y hay varios de estos métodos disponibles, que van desde pruebas manuales utilizando tubos de ensayo o portaobjetos hasta sistemas totalmente automatizados. Los tipos de sangre también se pueden determinar mediante pruebas genéticas , que se utilizan cuando existen condiciones que interfieren con las pruebas serológicas o cuando se requiere un alto grado de precisión en la identificación de antígenos.
Varias condiciones pueden causar resultados falsos o no concluyentes en las pruebas de compatibilidad sanguínea. Cuando estos problemas afectan la tipificación ABO, se denominan discrepancias ABO . Las discrepancias ABO deben investigarse y resolverse antes de informar el tipo de sangre de la persona. Otras fuentes de error incluyen el fenómeno " D débil ", en el que las personas que dan positivo al antígeno RhD muestran reacciones débiles o negativas cuando se les realiza la prueba de RhD, y la presencia de anticuerpos de inmunoglobulina G en los glóbulos rojos, que pueden interferir con la detección de anticuerpos. , pruebas cruzadas y tipificación de algunos antígenos de grupos sanguíneos.
Las pruebas de compatibilidad sanguínea se realizan de forma rutinaria antes de una transfusión de sangre . El proceso de prueba de compatibilidad total implica tipificación ABO y RhD (factor Rh); detección de anticuerpos contra otros sistemas de grupos sanguíneos ; y pruebas cruzadas , que implican comparar el plasma sanguíneo del receptor con los glóbulos rojos del donante como control final de incompatibilidad. Si se detecta un anticuerpo inesperado contra un grupo sanguíneo, se justifican pruebas adicionales para identificar el anticuerpo [3] : 740 y garantizar que la sangre del donante sea negativa para el antígeno relevante. [1] : 261 Se pueden omitir las pruebas serológicas cruzadas si la prueba de anticuerpos del receptor es negativa, no hay antecedentes de anticuerpos clínicamente significativos y su tipo ABO/Rh se ha confirmado con registros históricos o con una segunda muestra de sangre; y en emergencias, se puede transfundir sangre antes de que estén disponibles los resultados de las pruebas de compatibilidad. [1] : 262–3
Las pruebas de compatibilidad sanguínea a menudo se realizan en mujeres embarazadas y en la sangre del cordón umbilical de los recién nacidos, porque la incompatibilidad pone al bebé en riesgo de desarrollar una enfermedad hemolítica del recién nacido. [4] [5] También se utiliza antes del trasplante de células madre hematopoyéticas , porque la incompatibilidad del grupo sanguíneo puede ser responsable de algunos casos de enfermedad de injerto contra huésped aguda . [6]
Los tipos de sangre se definen según la presencia o ausencia de antígenos específicos en la superficie de los glóbulos rojos. Los más importantes en medicina son los antígenos ABO y RhD [7] : 585, pero existen muchos otros sistemas de grupos sanguíneos que pueden ser clínicamente relevantes en algunas situaciones. En 2021, se reconocen oficialmente 43 grupos sanguíneos. [8]
Las personas que carecen de ciertos antígenos de grupos sanguíneos en sus glóbulos rojos pueden formar anticuerpos contra estos antígenos. Por ejemplo, una persona con sangre tipo A producirá anticuerpos contra el antígeno B. Los anticuerpos del grupo sanguíneo ABO se producen de forma natural, lo que significa que se encuentran en personas que no han estado expuestas a sangre incompatible. [7] : 585–92 Los anticuerpos contra la mayoría de los demás antígenos de grupos sanguíneos, incluido el RhD, se desarrollan después de que las personas se exponen a los antígenos mediante transfusión o embarazo. [1] : 62 Algunos de estos anticuerpos pueden unirse a glóbulos rojos incompatibles y provocar su destrucción , lo que provoca reacciones transfusionales y otras complicaciones. [9] : 210-11
Los métodos serológicos para las pruebas de compatibilidad sanguínea utilizan estas reacciones anticuerpo-antígeno . En la tipificación sanguínea, se añaden reactivos que contienen anticuerpos de grupos sanguíneos, llamados antisueros , [7] : 586 a suspensiones de células sanguíneas. Si el antígeno relevante está presente, los anticuerpos en el reactivo harán que los glóbulos rojos se aglutinen (se aglutinen), lo que se puede identificar visualmente. [1] : 65 En la detección de anticuerpos, el plasma del individuo se analiza frente a un conjunto de glóbulos rojos con perfiles de antígenos conocidos; si el plasma aglutina uno de los glóbulos rojos del panel, esto indica que el individuo tiene un anticuerpo contra uno de los antígenos presentes en las células. En las pruebas cruzadas, el plasma de un posible receptor de transfusión se agrega a los glóbulos rojos del donante y se observa su aglutinación (o hemólisis) para detectar anticuerpos que podrían causar reacciones a la transfusión. [3] : 722–5
Los anticuerpos contra el grupo sanguíneo se presentan en dos formas principales: inmunoglobulina M (IgM) e inmunoglobulina G (IgG). Los anticuerpos que son predominantemente IgM, como los anticuerpos ABO, suelen provocar la aglutinación inmediata de los glóbulos rojos a temperatura ambiente. Por lo tanto, el tipo de sangre ABO de una persona se puede determinar simplemente añadiendo los glóbulos rojos al reactivo y centrifugando o mezclando la muestra, [1] : 122 y en las pruebas cruzadas, la incompatibilidad entre los tipos ABO se puede detectar inmediatamente después de la centrifugación. [3] : 725 La tipificación RhD también suele utilizar reactivos IgM [10] : 477, aunque el anti-RhD suele aparecer como IgG en el cuerpo. [1] : 161 Los anticuerpos que son predominantemente IgG, como los dirigidos contra antígenos de los sistemas Duffy y Kidd , [1] : 198–200 generalmente no causan aglutinación inmediata porque el pequeño tamaño del anticuerpo IgG impide la formación de una red estructura. Por lo tanto, la tipificación sanguínea utilizando antisueros IgG y la detección de anticuerpos IgG requieren el uso de la prueba de antiglobulina indirecta para demostrar la unión de IgG a los glóbulos rojos. [1] : 104
En la prueba de antiglobulina indirecta, la mezcla de antisuero o plasma y glóbulos rojos se incuba a 37 °C (99 °F), la temperatura ideal para la reactividad de los anticuerpos IgG. Después de la incubación, los glóbulos rojos se lavan con solución salina para eliminar los anticuerpos no unidos y se añade reactivo antiglobulina humana. Si los anticuerpos IgG se han unido a antígenos en la superficie celular, la globulina antihumana se unirá a esos anticuerpos, provocando que los glóbulos rojos se aglutinen después de la centrifugación. Si la reacción es negativa, se agregan "células de control" (células reactivas recubiertas con IgG) para garantizar que la prueba esté funcionando correctamente. Si el resultado de la prueba es realmente negativo, las células de control deberían reaccionar con la globulina antihumana libre y demostrar aglutinación. [3] : 716–9
En la tipificación ABO y Rh, se añaden reactivos que contienen anticuerpos contra los antígenos A, B y RhD a suspensiones de células sanguíneas. Si el antígeno relevante está presente, los glóbulos rojos mostrarán una aglutinación visible (aglomeración). [1] : 65 Además de identificar los antígenos ABO, lo que se denomina agrupación directa, la tipificación sanguínea ABO de rutina también incluye la identificación de los anticuerpos ABO en el plasma de la persona. Esto se llama agrupación inversa, [1] : 120 y se realiza para confirmar el tipo de sangre ABO. En el agrupamiento inverso, el plasma de la persona se agrega a los glóbulos rojos tipo A 1 y tipo B. El plasma debe aglutinar las células que expresan antígenos de los que carece la persona, pero no logra aglutinar células que expresan los mismos antígenos que el paciente. Por ejemplo, el plasma de alguien con sangre tipo A debería reaccionar con los glóbulos rojos tipo B, pero no con las células A 1 . Si no se obtienen los resultados esperados, se requieren más pruebas. [7] : 595 La aglutinación se califica de 1+ a 4+ según la fuerza de la reacción. En la tipificación ABO, una puntuación de 3+ o 4+ indica una reacción positiva, mientras que una puntuación de 1+ o 2+ no es concluyente y requiere más investigación. [1] : 236
Antes de recibir una transfusión de sangre, se examina a las personas para detectar la presencia de anticuerpos contra antígenos de sistemas de grupos sanguíneos no ABO . [5] Los antígenos de los grupos sanguíneos, además de ABO y RhD, que son importantes en la medicina transfusional incluyen los antígenos RhC/c y E/e y los antígenos de los sistemas Duffy , Kell , Kidd y MNS . [1] : 158–173 Si se identifica un anticuerpo clínicamente significativo, se debe transfundir al receptor sangre negativa para el antígeno correspondiente para evitar una reacción a la transfusión. Esto requiere que las unidades del donante estén tipificadas para el antígeno relevante. [1] : 261 También se puede tipificar el antígeno del receptor para confirmar la identidad del anticuerpo, ya que sólo los individuos que son negativos para un antígeno de grupo sanguíneo deben producir anticuerpos contra él. [7] : 603
En Europa, a las mujeres que requieren transfusiones de sangre a menudo se les tipifica los antígenos Kell y Rh extendido para prevenir la sensibilización a estos antígenos, lo que podría ponerlas en riesgo de desarrollar enfermedad hemolítica del recién nacido durante el embarazo. [11] La Sociedad Estadounidense de Hematología recomienda que a las personas con anemia falciforme se les haga un tipo de sangre para los antígenos RhC/c, RhE/e, Kell, Duffy, Kidd y MNS antes de la transfusión, [12] : 130–1 porque a menudo requieren transfusiones y pueden sensibilizarse a estos antígenos si se les transfunde sangre no compatible. [13] También se recomienda el fenotipado extendido de glóbulos rojos para personas con beta-talasemia . [14] Los sistemas de grupos sanguíneos distintos de ABO y Rh tienen un riesgo relativamente pequeño de complicaciones cuando la sangre se mezcla, por lo que en emergencias como una hemorragia importante , la urgencia de la transfusión puede exceder la necesidad de pruebas de compatibilidad con otros sistemas de grupos sanguíneos (y potencialmente Rh también). [15]
Los anticuerpos contra la mayoría de los antígenos de grupos sanguíneos, además de los del sistema ABO, se desarrollan después de la exposición a sangre incompatible. [1] : 62 Estos anticuerpos "inesperados" contra grupos sanguíneos sólo se encuentran en entre el 0,8% y el 2% de las personas; sin embargo, los receptores de transfusiones de sangre deben ser examinados para detectar estos anticuerpos para prevenir reacciones a la transfusión. La detección de anticuerpos también se realiza como parte de la atención prenatal , porque los anticuerpos contra RhD y otros antígenos de grupos sanguíneos pueden causar enfermedad hemolítica en el recién nacido, y porque las madres Rh negativas que han desarrollado un anticuerpo anti-RhD no son elegibles para recibir Rho(D). ) inmunoglobulina (Rhogam). [1] : 233
En el procedimiento de detección de anticuerpos, el plasma de un individuo se agrega a un panel de dos o tres conjuntos de glóbulos rojos que han sido elegidos para expresar los antígenos de grupo sanguíneo más clínicamente significativos. En la detección de anticuerpos sólo se utilizan células del grupo O, ya que de lo contrario las células reaccionarían con los anticuerpos naturales del grupo sanguíneo ABO. La mezcla de plasma y glóbulos rojos se incuba a 37°C y se analiza mediante la prueba de antiglobulina indirecta. Algunos protocolos de detección e identificación de anticuerpos incorporan una fase de prueba después de la incubación a temperatura ambiente, pero esto a menudo se omite porque la mayoría de los anticuerpos inesperados que reaccionan a temperatura ambiente son clínicamente insignificantes. [3] : 722-4
La aglutinación de las células de detección por el plasma, con o sin adición de globulina antihumana, indica que está presente un anticuerpo inesperado contra el grupo sanguíneo. Si esto ocurre, es necesario realizar más pruebas utilizando más células (generalmente 10 a 11) para identificar el anticuerpo. Al examinar los perfiles de antígenos de los glóbulos rojos con los que reacciona el plasma de la persona, es posible determinar la identidad del anticuerpo. Se incluye un "autocontrol", en el que el plasma del individuo se analiza frente a sus propios glóbulos rojos, para determinar si la aglutinación se debe a un aloanticuerpo (un anticuerpo contra un antígeno extraño), un autoanticuerpo (un anticuerpo contra los propios antígenos), u otra sustancia que interfiera. [3] : 722–4
La imagen de arriba muestra la interpretación de un panel de anticuerpos utilizado en serología para detectar anticuerpos contra los antígenos de los grupos sanguíneos más relevantes. Cada fila representa glóbulos rojos de "referencia" o "control" de donantes que tienen composiciones antigénicas conocidas y son del grupo ABO O. A + significa que el antígeno está presente en los glóbulos rojos de referencia y 0 significa que está ausente; nt significa "no probado". La columna "resultado" a la derecha muestra la reactividad al mezclar glóbulos rojos de referencia con plasma del paciente en 3 fases diferentes: temperatura ambiente, 37°C y AHG (con antiglobulina humana, mediante la prueba de antiglobulina indirecta ). [dieciséis]
En este caso, el panel de anticuerpos muestra que hay anticuerpos anti-Fy a presentes. Esto indica que se debe utilizar sangre de donante cuyo tipo sea negativo para el antígeno Fy a . Aún así, si una prueba cruzada posterior muestra reactividad, se deben realizar pruebas adicionales contra antígenos previamente descontados (en este caso, potencialmente E, K, Kp a y/o Lu a ). [dieciséis]
Cuando hay múltiples anticuerpos presentes, o cuando un anticuerpo está dirigido contra un antígeno de alta frecuencia, es posible que el procedimiento normal del panel de anticuerpos no proporcione una identificación concluyente. En estos casos, se puede utilizar la inhibición de la hemaglutinación , en la que una sustancia neutralizante anula un antígeno específico. [17] Alternativamente, el plasma se puede incubar con células de perfiles de antígenos conocidos para eliminar un anticuerpo específico (un proceso denominado adsorción ); o las células pueden tratarse con enzimas como ficaína o papaína que inhiben la reactividad de algunos anticuerpos de grupos sanguíneos y potencian otros. [3] : 723–9 El efecto de la ficaína y la papaína en los principales sistemas de grupos sanguíneos es el siguiente: [18] [19]
Es posible que las personas que han dado positivo en una prueba de anticuerpos inesperada contra un grupo sanguíneo en el pasado no presenten una reacción positiva en pruebas posteriores; sin embargo, si el anticuerpo es clínicamente significativo, se debe transfundir con sangre negativa al antígeno de todos modos. [20]
La compatibilidad cruzada, que se realiza de forma rutinaria antes de una transfusión de sangre, implica agregar el plasma sanguíneo del receptor a una muestra de glóbulos rojos del donante. Si la sangre es incompatible, los anticuerpos del plasma del receptor se unirán a los antígenos de los glóbulos rojos del donante. Esta reacción anticuerpo-antígeno se puede detectar mediante aglomeración visible o destrucción de los glóbulos rojos, o mediante reacción con globulina antihumana , después de la centrifugación. [7] : 600–3
Si el receptor de la transfusión tiene una prueba de anticuerpos negativa y no tiene antecedentes de anticuerpos, a menudo se realiza una prueba cruzada de "giro inmediato": los glóbulos rojos y el plasma se centrifugan inmediatamente después de mezclarlos como verificación final de incompatibilidad entre los tipos de sangre ABO. Si se detecta un anticuerpo clínicamente significativo (o se detectó en el pasado), o si la prueba cruzada inmediata demuestra incompatibilidad, se realiza una prueba cruzada "completa" o "IgG", que utiliza la prueba de antiglobulina indirecta para detectar la incompatibilidad del grupo sanguíneo causada por IgG. anticuerpos. El procedimiento de prueba cruzada de IgG es más largo que la prueba cruzada por centrifugación inmediata y, en algunos casos, puede tardar más de dos horas. [20]
Las personas que tienen una prueba de anticuerpos negativa y no tienen antecedentes de anticuerpos también pueden someterse a una "prueba cruzada electrónica", siempre que su tipo ABO y Rh se haya determinado a partir de la muestra de sangre actual y que los resultados de otro tipo ABO/Rh estén registrados. En este caso, el tipo de sangre del receptor simplemente se compara con el del donante, sin necesidad de pruebas serológicas. [7] : 600–3 En emergencias, se puede emitir sangre antes de que se complete la prueba cruzada. [1] : 262–3
La tipificación sanguínea se puede realizar utilizando tubos de ensayo, microplacas o portaobjetos para tipificación sanguínea. El método del tubo consiste en mezclar una suspensión de glóbulos rojos con antisuero (o plasma, para agrupación inversa) en un tubo de ensayo. La mezcla se centrifuga para separar las células del reactivo y luego se resuspende agitando suavemente el tubo. Si el antígeno de interés está presente, los glóbulos rojos se aglutinan formando una masa sólida en el tubo. Si está ausente, los glóbulos rojos vuelven a suspenderse cuando se mezclan. [7] : 611–12 [9] : 214 El método de la microplaca es similar al método del tubo, excepto que en lugar de utilizar tubos de ensayo individuales, la tipificación sanguínea se realiza en una placa que contiene docenas de pocillos, lo que permite realizar múltiples pruebas al mismo tiempo. al mismo tiempo. Las reacciones de aglutinación se leen después de centrifugar la placa. [21] : 201
La detección e identificación de anticuerpos también se puede realizar mediante el método del tubo. En este procedimiento, el plasma y los glóbulos rojos se mezclan en un tubo que contiene un medio que mejora las reacciones de aglutinación, como la solución salina de baja fuerza iónica (LISS). Los tubos se incuban a temperatura corporal durante un período de tiempo definido, luego se centrifugan y se examinan para detectar aglutinación o hemólisis; primero inmediatamente después del período de incubación y luego después del lavado y la adición del reactivo antiglobulina humana. [3] : 722 La compatibilidad cruzada, igualmente, puede realizarse mediante el método del tubo; las reacciones se leen inmediatamente después de la centrifugación en la prueba cruzada de centrifugación inmediata, o después de la incubación y adición de AHG en el procedimiento de prueba cruzada completa. [3] : 725
El método en portaobjetos para tipificar la sangre implica mezclar una gota de sangre con una gota de antisuero en un portaobjetos. El portaobjetos se inclina para mezclar las células y los reactivos y luego se observa la aglutinación, lo que indica un resultado positivo. Este método se utiliza normalmente en zonas de escasos recursos o situaciones de emergencia; de lo contrario, se prefieren métodos alternativos. [9] : 214 [10] : 476
_-_type_O_positive.jpg/1280px-Blood_typing_by_gel_card_method_(column_agglutination_or_MTS_gel)_-_type_O_positive.jpg)
Las técnicas de aglutinación en columna para pruebas de compatibilidad sanguínea (a veces denominadas "prueba de gel") utilizan tarjetas que contienen columnas de gel de dextrano y poliacrilamida . Las tarjetas diseñadas para el tipaje sanguíneo contienen reactivos predispensados para el tipaje sanguíneo para el agrupamiento directo y pocillos que contienen solo una solución tampón , a la que se agregan glóbulos rojos y plasma reactivos, para el agrupamiento inverso. La detección de anticuerpos y la compatibilidad cruzada también se pueden realizar mediante aglutinación en columna, en cuyo caso se utilizan tarjetas que contienen reactivo antiglobulina humana. Las tarjetas de gel se centrifugan (a veces después de la incubación, según la prueba), durante lo cual los aglutinados de glóbulos rojos quedan atrapados en la parte superior de la columna porque son demasiado grandes para migrar a través del gel. Las células que no se han aglutinado se acumulan en el fondo. Por lo tanto, una línea de glóbulos rojos en la parte superior de la columna indica un resultado positivo. La fuerza de las reacciones positivas se califica de 1+ a 4+ dependiendo de qué tan lejos hayan viajado las células a través del gel. La prueba de gel tiene ventajas sobre los métodos manuales porque elimina la variabilidad asociada con la resuspensión manual de las células y porque las tarjetas se pueden conservar como registro de la prueba. [1] : 269–71 Algunos analizadores automatizados utilizan el método de aglutinación en columna para realizar la tipificación sanguínea automáticamente. [7] : 590 Estos analizadores pipetean glóbulos rojos y plasma en tarjetas de gel, los centrifugan y escanean y leen las reacciones de aglutinación para determinar el tipo de sangre. [1] : 270-1
Los ensayos en fase sólida (a veces llamados método de "captura de antígeno") utilizan antígenos reactivos o anticuerpos fijados a una superficie (generalmente una microplaca). [9] : 214 pocillos de microplacas recubiertos con reactivos anti-A, -B y -D se utilizan para el agrupamiento directo. Se añade la muestra problema y se centrifuga la microplaca; en una reacción positiva, los glóbulos rojos se adhieren a la superficie del pocillo. [7] : 590 [10] : 477 Algunos analizadores automatizados utilizan ensayos de fase sólida para tipificar la sangre. [1] : 275-6
Las pruebas genéticas se pueden utilizar para determinar el tipo de sangre de una persona en determinadas situaciones en las que las pruebas serológicas son insuficientes. Por ejemplo, si a una persona se le han transfundido grandes volúmenes de sangre de un donante, los resultados de las pruebas serológicas reflejarán los antígenos de las células del donante y no el tipo de sangre real de la persona. [11] Las personas que producen anticuerpos contra sus propios glóbulos rojos [21] : 202 o que son tratados con ciertos medicamentos pueden mostrar reacciones de aglutinación falsas en las pruebas serológicas, por lo que puede ser necesario realizar un genotipado para determinar su tipo de sangre con precisión. [1] : 261 Se requieren pruebas genéticas para tipificar los antígenos de los glóbulos rojos para los cuales no hay antisueros comerciales disponibles. [11]
La AABB recomienda el genotipado del antígeno RhD para mujeres con fenotipos D serológicos débiles que tienen potencial para tener hijos. Esto se debe a que algunas personas con fenotipos D débiles pueden producir anticuerpos contra el antígeno RhD, que puede causar enfermedad hemolítica del recién nacido, mientras que otras no. El genotipado puede identificar el tipo específico de antígeno D débil, lo que determina el potencial de la persona para producir anticuerpos, evitando así un tratamiento innecesario con inmunoglobulina Rho(D) . [22] [23] Se prefiere el genotipado a las pruebas serológicas para personas con anemia de células falciformes, porque es más preciso para ciertos antígenos y puede identificar antígenos que no pueden detectarse mediante métodos serológicos. [13]
El genotipado también se utiliza en pruebas prenatales para detectar enfermedades hemolíticas del recién nacido. Cuando una mujer embarazada tiene un anticuerpo de grupo sanguíneo que puede causar HDN, se puede tipificar el feto para el antígeno relevante para determinar si está en riesgo de desarrollar la enfermedad. Debido a que no es práctico extraer sangre del feto, el tipo de sangre se determina mediante una muestra de amniocentesis o ADN fetal libre de células aislado de la sangre de la madre. [21] : 202 [22] El genotipo del padre también puede ser genotipado para predecir el riesgo de enfermedad hemolítica del recién nacido, porque si el padre es homocigoto para el antígeno relevante (es decir, tiene dos copias del gen) el bebé será positivo para el antígeno y, por tanto, en riesgo de desarrollar la enfermedad. Si el padre es heterocigoto (tiene solo una copia), el bebé solo tiene un 50% de posibilidades de ser positivo para el antígeno. [11]
En la tipificación ABO, los resultados de la agrupación directa e inversa siempre deben corresponder entre sí. Una diferencia inesperada entre los dos resultados se denomina discrepancia ABO y debe resolverse antes de informar el tipo de sangre de la persona. [1] : 136
Pueden ocurrir reacciones débiles en el grupo directo en personas que pertenecen a ciertos subgrupos ABO: tipos de sangre variantes caracterizados por una expresión disminuida de los antígenos A o B o cambios en su estructura. También puede producirse una expresión debilitada de los antígenos ABO en la leucemia y el linfoma de Hodgkin . Las reacciones débiles en la agrupación directa se pueden fortalecer incubando la mezcla de sangre y reactivo a temperatura ambiente o 4 °C (39 °F), o usando ciertas enzimas para mejorar las reacciones antígeno-anticuerpo. [1] : 139
Ocasionalmente, se observan dos poblaciones de glóbulos rojos después de la reacción con los antisueros de tipificación sanguínea. Algunos de los glóbulos rojos están aglutinados, mientras que otros no, lo que dificulta la interpretación del resultado. Esto se llama reacción de campo mixto y puede ocurrir si alguien ha recibido recientemente una transfusión de sangre con un tipo de sangre diferente (como en un paciente tipo A que recibe sangre tipo O), si ha recibido un trasplante de médula ósea o de células madre de alguien con un tipo de sangre diferente, o en pacientes con ciertos subgrupos ABO, como A 3 . La investigación del historial médico de la persona puede aclarar la causa de la reacción de campo mixto. [1] : 138 [24] : 314
Las personas con enfermedad de aglutininas frías producen anticuerpos contra sus propios glóbulos rojos que hacen que se aglutinen espontáneamente a temperatura ambiente, lo que genera reacciones falsas positivas en la agrupación directa. Las aglutininas frías generalmente se pueden desactivar calentando la muestra a 37 °C (99 °F) y lavando los glóbulos rojos con solución salina. Si esto no es eficaz, se puede utilizar ditiotreitol para destruir los anticuerpos. [1] : 141
Las muestras de sangre del cordón umbilical pueden estar contaminadas con gelatina de Wharton , una sustancia viscosa que puede hacer que los glóbulos rojos se peguen, imitando la aglutinación. La gelatina de Wharton se puede eliminar lavando bien los glóbulos rojos. [1] : 141
En un fenómeno poco común conocido como "antígeno B adquirido", un paciente cuyo verdadero tipo de sangre es A puede mostrar un resultado positivo débil para B en el grupo directo. Esta afección, que se asocia con enfermedades gastrointestinales como el cáncer de colon [1] : 139 y la obstrucción intestinal , [24] : 126 resulta de la conversión del antígeno A en una estructura que imita al antígeno B mediante enzimas bacterianas. [10] : 477 A diferencia del antígeno B verdadero, el antígeno B adquirido no reacciona con reactivos dentro de un cierto rango de pH. [1] : 139
Los bebés menores de 3 a 6 meses presentan reacciones débiles o faltantes en el agrupamiento inverso porque producen niveles muy bajos de anticuerpos ABO. [1] : 136 Por lo tanto, la agrupación inversa generalmente no se realiza para este grupo de edad. [10] : 486 Las personas mayores también pueden presentar una disminución de la producción de anticuerpos, al igual que las personas con hipogammaglobulinemia . Las reacciones débiles se pueden intensificar permitiendo que el plasma y los glóbulos rojos se incuben a temperatura ambiente durante 15 a 30 minutos y, si esto no es efectivo, se pueden incubar a 4 °C (39 °F). [1] : 137–8
Aproximadamente el 20% de los individuos con el tipo de sangre A o AB pertenecen a un subgrupo de A, denominado A 2 , mientras que el subgrupo más común, que abarca aproximadamente el 80% de los individuos, se denomina A 1 . Debido a pequeñas diferencias en la estructura de los antígenos A 1 y A 2 , algunos individuos del subgrupo A 2 pueden producir un anticuerpo contra A 1 . Por lo tanto, estos individuos escribirán como A o AB en el grupo directo, pero exhibirán una reacción positiva inesperada con los glóbulos rojos tipo A 1 en el grupo inverso. La discrepancia se puede resolver analizando los glóbulos rojos de la persona con un reactivo anti-A 1 , que dará un resultado negativo si el paciente pertenece al subgrupo A 2 . Los anticuerpos anti-A 1 se consideran clínicamente insignificantes a menos que reaccionen a 37 °C (99 °F). Existen otros subgrupos de A, así como subgrupos de B, pero rara vez se encuentran. [1] : 127–32
Si hay altos niveles de proteína en el plasma de una persona, puede ocurrir un fenómeno conocido como rouleaux cuando su plasma se agrega a las células reactivas. Rouleaux hace que los glóbulos rojos se apilen, lo que puede imitar la aglutinación y provocar un resultado falso positivo en el agrupamiento inverso. Esto se puede evitar retirando el plasma, reemplazándolo con solución salina y volviendo a centrifugar el tubo. Rouleaux desaparecerá una vez que el plasma se reemplace con solución salina, pero persistirá la verdadera aglutinación. [1] : 140-1
Los anticuerpos contra antígenos de grupos sanguíneos distintos de A y B pueden reaccionar con las células reactivas utilizadas en el agrupamiento inverso. Si hay un autoanticuerpo que reacciona al frío , el resultado falso positivo se puede resolver calentando la muestra a 37 °C (99 °F). Si el resultado es causado por un aloanticuerpo, se puede realizar una prueba de anticuerpos para identificar el anticuerpo [7] : 141-2 y se puede realizar la agrupación inversa utilizando muestras que carecen del antígeno relevante. [10] : 477
Aproximadamente del 0,2 al 1% de las personas tienen un fenotipo "D débil", [25] lo que significa que son positivas para el antígeno RhD, pero exhiben reacciones débiles o negativas con algunos reactivos anti-RhD debido a una disminución de la expresión del antígeno o variantes atípicas del antígeno. estructura. Si las pruebas serológicas de rutina para RhD dan como resultado una puntuación de 2+ o menos, se puede utilizar la prueba de antiglobulina para demostrar la presencia de RhD. [1] : 159 La prueba de D débil también se realiza en donantes de sangre que inicialmente escriben como RhD negativo. [22] Históricamente, los donantes de sangre con D débil eran tratados como Rh positivos y los pacientes con D débil eran tratados como Rh negativos para evitar una posible exposición a sangre incompatible. El genotipado se utiliza cada vez más para determinar las bases moleculares de los fenotipos D débiles, ya que esto determina si los individuos con D débil pueden producir anticuerpos contra RhD o sensibilizar a otros al antígeno RhD. [25]
La prueba de antiglobulina indirecta , que se utiliza para la prueba de D débil y la tipificación de algunos antígenos de glóbulos rojos, detecta IgG unida a glóbulos rojos. Si la IgG se une a los glóbulos rojos in vivo , como puede ocurrir en la anemia hemolítica autoinmune , la enfermedad hemolítica del recién nacido y las reacciones transfusionales, [10] : 260 la prueba de antiglobulina indirecta siempre dará un resultado positivo, independientemente de la presencia de la antígeno relevante. [10] : 477–8 Se puede realizar una prueba de antiglobulina directa para demostrar que la reacción positiva se debe a la sensibilización de los glóbulos rojos. [26] : 289
Algunos grupos de personas tienen necesidades de transfusión especializadas. Los fetos, los bebés con muy bajo peso al nacer y las personas inmunocomprometidas corren el riesgo de desarrollar una infección grave por citomegalovirus (CMV), un patógeno oportunista para el cual aproximadamente el 50% de los donantes de sangre dan positivo, y pueden recibir transfusiones de sangre CMV negativa para prevenir infección. [3] : 749 [27] Aquellos que están en riesgo de desarrollar enfermedad de injerto contra huésped , como los receptores de trasplantes de médula ósea , reciben sangre que ha sido irradiada para inactivar los linfocitos T que son responsables de esta reacción. Las personas que han tenido reacciones alérgicas graves a las transfusiones de sangre en el pasado pueden recibir una transfusión de sangre que haya sido "lavada" para eliminar el plasma. [1] : 342–5 También se examina el historial del paciente para ver si ha identificado previamente anticuerpos y cualquier otra anomalía serológica.
También se realiza una prueba de antiglobulina directa ( prueba de Coombs ) como parte de la investigación de anticuerpos. [28]
La sangre de los donantes generalmente se analiza para detectar infecciones transmitidas por transfusiones, como el VIH . En 2018, la Organización Mundial de la Salud informó que casi el 100% de las donaciones de sangre en países de ingresos altos y medianos altos se sometieron a pruebas de detección de enfermedades infecciosas, pero las cifras para los países de ingresos medianos bajos y bajos fueron del 82% y 80.3 % respectivamente. [29]
En 1901, Karl Landsteiner publicó los resultados de un experimento en el que mezcló suero y glóbulos rojos de cinco donantes humanos diferentes. Observó que el suero de una persona nunca aglutinaba sus propios glóbulos rojos, pero podía aglutinar los de otros, y basándose en las reacciones de aglutinación los glóbulos rojos podían clasificarse en tres grupos: grupo A, grupo B y grupo C. Grupo C, que consistía en glóbulos rojos que no reaccionaban con el plasma de ninguna persona, más tarde se conocería como grupo O. [30] : 5 Un cuarto grupo, ahora conocido como AB, fue descrito por los colegas de Landsteiner en 1902. [30] : 7 Este experimento fue el primer ejemplo de tipificación sanguínea. [1] : 120
En 1945, Robin Coombs , AE Mourant y RR Race publicaron una descripción de la prueba de antiglobulina (también conocida como prueba de Coombs). Investigaciones anteriores sobre anticuerpos de grupos sanguíneos habían documentado la presencia de los llamados anticuerpos "bloqueantes" o "incompletos": anticuerpos que ocupaban sitios de antígenos, impidiendo que otros anticuerpos se unieran, pero no provocaban que los glóbulos rojos se aglutinaran. Coombs y sus colegas idearon un método para demostrar fácilmente la presencia de estos anticuerpos. Inyectaron inmunoglobulinas humanas en conejos, lo que les hizo producir un anticuerpo antiglobulina humana . La antiglobulina humana podría unirse a los anticuerpos ya adheridos a los glóbulos rojos y provocar su aglutinación. La invención de la prueba de antiglobulina condujo al descubrimiento de muchos más antígenos de grupos sanguíneos. A principios de la década de 1950, las empresas habían comenzado a producir antisueros comerciales para pruebas de antígenos especiales. [30] : 62–72
{{cite web}}: Mantenimiento CS1: varios nombres: lista de autores ( enlace )