Las pruebas de Coombs directa e indirecta , también conocidas como prueba de antiglobulina ( AGT ), son pruebas de sangre utilizadas en inmunohematología . La prueba de Coombs directa detecta anticuerpos que se encuentran adheridos a la superficie de los glóbulos rojos. [1] Dado que estos anticuerpos a veces destruyen los glóbulos rojos, pueden causar anemia ; Esta prueba puede ayudar a aclarar la afección. La prueba de Coombs indirecta detecta anticuerpos que flotan libremente en la sangre. [1] Estos anticuerpos podrían actuar contra ciertos glóbulos rojos; La prueba se puede realizar para diagnosticar reacciones a una transfusión de sangre . [1]
La prueba de Coombs directa se utiliza para detectar anemia hemolítica autoinmune , una afección en la que el sistema inmunológico descompone los glóbulos rojos y provoca anemia. La prueba de Coombs directa se utiliza para detectar anticuerpos o proteínas del complemento adheridas a la superficie de los glóbulos rojos. Para realizar la prueba, se toma una muestra de sangre y se lavan los glóbulos rojos (eliminando el plasma del paciente y los anticuerpos libres de los glóbulos rojos) y luego se incuban con globulina antihumana ("reactivo de Coombs"). Si los glóbulos rojos luego se aglutinan , la prueba es positiva, una indicación visual de que los anticuerpos o las proteínas del complemento están unidos a la superficie de los glóbulos rojos y pueden estar causando la destrucción de esas células.
La prueba de Coombs indirecta se utiliza en pruebas prenatales de mujeres embarazadas y en pruebas previas a una transfusión de sangre. La prueba detecta anticuerpos contra glóbulos rojos extraños. En este caso, el suero se extrae de una muestra de sangre extraída del paciente. El suero se incuba con glóbulos rojos extraños de antigenicidad conocida . Finalmente se añade globulina antihumana. Si se produce aglutinación, la prueba de Coombs indirecta es positiva. [2]
Las dos pruebas de Coombs se basan en la unión de anticuerpos antihumanos a anticuerpos humanos, comúnmente IgG o IgM . Estos anticuerpos antihumanos son producidos por células plasmáticas de animales no humanos después de inmunizarlos con plasma humano . Además, estos anticuerpos antihumanos también se unirán a anticuerpos humanos que pueden fijarse a antígenos en la superficie de los glóbulos rojos (RBC). En las condiciones adecuadas del tubo de ensayo, esto puede provocar la aglutinación de los glóbulos rojos y permitir la visualización de los grupos de glóbulos rojos resultantes. Si se observan grumos, la prueba de Coombs es positiva; en caso contrario, la prueba de Coombs es negativa. [3]
Los usos clínicos comunes de la prueba de Coombs incluyen la preparación de sangre para transfusión en pruebas cruzadas , anticuerpos atípicos en el plasma sanguíneo de mujeres embarazadas como parte de la atención prenatal y la detección de anticuerpos para el diagnóstico de anemias hemolíticas inmunomediadas . [4]
Las pruebas de Coombs se realizan utilizando glóbulos rojos o suero (directo o indirecto, respectivamente) de muestras de sangre entera venosa que se toman de los pacientes mediante venopunción . La sangre venosa se lleva a un laboratorio (o banco de sangre), donde personal técnico científico capacitado realiza las pruebas de Coombs. La importancia clínica del resultado la evalúa el médico que solicitó la prueba de Coombs, quizás con la ayuda de un hematólogo de laboratorio . [ cita necesaria ]
La prueba directa de Coombs, también conocida como prueba directa de antiglobulina (DAT), se utiliza para detectar si los anticuerpos o factores del sistema del complemento se han unido a los antígenos de superficie de los glóbulos rojos . [5] La DAT no es necesaria para las pruebas previas a la transfusión [6], pero algunos laboratorios pueden realizarla. [ se necesita aclaración ] Antes de la transfusión, a menudo se realiza una prueba de Coombs indirecta .
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La prueba de Coombs directa se utiliza clínicamente cuando se sospecha anemia hemolítica inmunomediada (destrucción de glóbulos rojos mediada por anticuerpos). Una prueba de Coombs positiva indica que un mecanismo inmunológico está atacando los glóbulos rojos del paciente . Este mecanismo podría ser autoinmunidad , aloinmunidad o un mecanismo mediado por el sistema inmunológico inducido por fármacos. [3]
(Un dispositivo de memoria para recordar que el DAT analiza los glóbulos rojos y se utiliza para evaluar la enfermedad hemolítica del recién nacido en los bebés es: Enfermedad Rh ; R = glóbulos rojos , D = DAT.)
Los glóbulos rojos del paciente se lavan (eliminando el suero del propio paciente ) y luego se centrifugan con globulina antihumana (también conocida como reactivo de Coombs). Si se han fijado inmunoglobulinas o factores del complemento en la superficie de los glóbulos rojos in vitro , la globulina antihumana aglutinará los glóbulos rojos y la prueba de Coombs directa será positiva. (En la mitad superior del esquema se muestra una representación visual de una prueba de Coombs directa positiva). [ cita necesaria ]
La prueba de Coombs indirecta, también conocida como prueba de antiglobulina indirecta (IAT), se utiliza para detectar reacciones anticuerpo-antígeno in vitro . Se utiliza para detectar concentraciones muy bajas de anticuerpos presentes en el plasma/suero de un paciente antes de una transfusión de sangre. En la atención prenatal, la IAT se utiliza para detectar anticuerpos en mujeres embarazadas que pueden causar enfermedad hemolítica del recién nacido . El IAT también se puede utilizar para pruebas de compatibilidad , identificación de anticuerpos, fenotipado de glóbulos rojos y estudios de titulación. [ cita necesaria ]
La prueba de Coombs indirecta se utiliza para detectar anticuerpos en la preparación de sangre para transfusión de sangre . La sangre del donante y del receptor debe ser compatible ABO y Rh D. La sangre de los donantes para transfusión también se analiza para detectar infecciones en procesos separados. [ cita necesaria ]
Se analiza una muestra de sangre del receptor y una muestra de sangre de cada unidad de sangre del donante para detectar anticuerpos con la prueba de Coombs indirecta. Cada muestra se incuba frente a una amplia gama de glóbulos rojos que juntos presentan una gama completa de antígenos de superficie (es decir, tipos de sangre ).
La prueba de Coombs indirecta se utiliza para analizar una muestra del suero del receptor en busca de anticuerpos contra una muestra de glóbulos rojos del donante de sangre . A esto a veces se le llama sangre cruzada .
La prueba de Coombs indirecta se utiliza para detectar anticuerpos IgG en mujeres embarazadas que probablemente pasen a través de la placenta hacia la sangre fetal y causen enfermedad hemolítica en el recién nacido . [ cita necesaria ]
El IAT es una prueba de dos etapas. (Se muestra visualmente una coincidencia cruzada en la mitad inferior del esquema como ejemplo de una prueba de Coombs indirecta). [ cita necesaria ]
Los glóbulos rojos (RBC) lavados y no pacientes con antígenos conocidos se incuban con suero del paciente que contiene un contenido de anticuerpos desconocido. Si el suero contiene anticuerpos contra antígenos en la superficie de los glóbulos rojos, los anticuerpos se unirán a la superficie de los glóbulos rojos. [ cita necesaria ]
Los glóbulos rojos se lavan tres o cuatro veces con solución salina isotónica y luego se incuban con globulina antihumana. Si los anticuerpos se han unido a los antígenos de superficie de los glóbulos rojos en la primera etapa, los glóbulos rojos se aglutinarán cuando se incuban con la globulina antihumana (también conocida como reactivo de Coombs) en esta etapa, y la prueba de Coombs indirecta será positiva.
Diluyendo un suero que contiene anticuerpos se puede medir la cantidad de anticuerpo en el suero. Esto se hace realizando diluciones seriadas del suero y encontrando la dilución máxima del suero de prueba que sea capaz de producir la aglutinación de los glóbulos rojos relevantes. [ cita necesaria ]
El reactivo de Coombs (también conocido como antiglobulina de Coombs o globulina antihumana ) se utiliza tanto en la prueba de Coombs directa como en la prueba de Coombs indirecta. El reactivo de Coombs es la globulina antihumana . Se elabora inyectando globulina humana en animales, que producen anticuerpos policlonales específicos para las inmunoglobulinas humanas y los factores del sistema del complemento humano. Se pueden utilizar reactivos de Coombs más específicos o anticuerpos monoclonales . [ cita necesaria ]
Tanto los anticuerpos IgM como los IgG se unen fuertemente a sus antígenos complementarios. Los anticuerpos IgG son más reactivos a 37°C. Los anticuerpos IgM se detectan fácilmente en solución salina a temperatura ambiente , ya que los anticuerpos IgM pueden formar un puente entre los glóbulos rojos debido a su gran tamaño, creando de manera eficiente lo que se considera aglutinación . Los anticuerpos IgG son más pequeños y requieren ayuda para unirse lo suficientemente bien como para formar una reacción de aglutinación visual . Los reactivos utilizados para mejorar la detección de IgG se denominan potenciadores. Los glóbulos rojos tienen una carga neta negativa llamada potencial zeta que hace que tengan una repulsión natural entre sí. Los potenciadores reducen el potencial zeta de las membranas de los glóbulos rojos. Los potenciadores comunes incluyen solución de baja fuerza iónica (LISS), albúmina , polietilenglicol (PEG) y enzimas proteolíticas .
La prueba de Coombs fue descrita por primera vez en 1945 por los inmunólogos de Cambridge Robin Coombs (de quien lleva el nombre), Arthur Mourant y Rob Race . [8] Históricamente, se hacía en tubos de ensayo . Hoy en día, se realiza comúnmente utilizando tecnología automatizada de fase sólida o gel.