La terapia génica utiliza la introducción de ADN en las células, lo que se puede lograr mediante varios métodos, que se resumen a continuación. Las dos clases principales de métodos son los que utilizan virus recombinantes (a veces llamados nanopartículas biológicas o vectores virales) y los que utilizan ADN desnudo o complejos de ADN (métodos no virales).
Todos los virus se unen a sus huéspedes e introducen su material genético en la célula huésped como parte de su ciclo de replicación. Este material genético contiene "instrucciones" básicas sobre cómo producir más copias de estos virus, modificando la maquinaria de producción normal del cuerpo para satisfacer las necesidades del virus. La célula huésped llevará a cabo estas instrucciones y producirá copias adicionales del virus, lo que hará que cada vez más células se infecten. Algunos tipos de virus insertan su genoma en el citoplasma del huésped, pero en realidad no entran en la célula. Otros penetran la membrana celular camuflados en moléculas de proteína y entran en la célula.
Existen dos tipos principales de infección viral: lítica y lisogénica . Poco después de insertar su ADN, los virus del ciclo lítico producen rápidamente más virus, salen de la célula e infectan más células. Los virus lisogénicos integran su ADN en el ADN de la célula huésped y pueden vivir en el cuerpo durante muchos años antes de responder a un desencadenante. El virus se reproduce como lo hace la célula y no inflige daño corporal hasta que se activa. El desencadenante libera el ADN del del huésped y lo emplea para crear nuevos virus. [ cita requerida ]
El material genético de los retrovirus está en forma de moléculas de ARN , mientras que el material genético de sus huéspedes está en forma de ADN. Cuando un retrovirus infecta una célula huésped, introducirá su ARN junto con algunas enzimas, a saber, la transcriptasa inversa y la integrasa , en la célula. Esta molécula de ARN del retrovirus debe producir una copia de ADN a partir de su molécula de ARN antes de que pueda integrarse en el material genético de la célula huésped. El proceso de producción de una copia de ADN a partir de una molécula de ARN se denomina transcripción inversa . Lo lleva a cabo una de las enzimas transportadas en el virus, llamada transcriptasa inversa . Después de que se produce esta copia de ADN y está libre en el núcleo de la célula huésped, debe incorporarse al genoma de la célula huésped. Es decir, debe insertarse en las grandes moléculas de ADN de la célula (los cromosomas). Este proceso lo realiza otra enzima transportada en el virus llamada integrasa . [ cita requerida ]
Ahora que el material genético del virus ha sido insertado, se puede decir que la célula huésped ha sido modificada para contener nuevos genes. Si esta célula huésped se divide más tarde, sus descendientes contendrán todos los nuevos genes. A veces, los genes del retrovirus no expresan su información inmediatamente. [ cita requerida ]
Uno de los problemas de la terapia génica con retrovirus es que la enzima integrasa puede insertar el material genético del virus en cualquier posición arbitraria del genoma del huésped; inserta aleatoriamente el material genético en un cromosoma. Si el material genético se inserta en medio de uno de los genes originales de la célula huésped, este gen se verá alterado ( mutagénesis insercional ). Si el gen es uno que regula la división celular, puede producirse una división celular descontrolada (es decir, cáncer ). Este problema ha comenzado a abordarse recientemente utilizando nucleasas de dedos de zinc [1] o incluyendo ciertas secuencias como la región de control del locus de beta-globina para dirigir el sitio de integración a sitios cromosómicos específicos.
Los ensayos de terapia génica que utilizan vectores retrovirales para tratar la inmunodeficiencia combinada grave ligada al cromosoma X (X-SCID) representan la aplicación más exitosa de la terapia génica hasta la fecha. Más de veinte pacientes han sido tratados en Francia y Gran Bretaña, con una alta tasa de reconstitución del sistema inmunológico observada. En los EE. UU. se restringieron o detuvieron ensayos similares cuando se informó leucemia en pacientes tratados en el ensayo de terapia génica X-SCID francés. [2] Hasta la fecha, cuatro niños en el ensayo francés y uno en el ensayo británico han desarrollado leucemia como resultado de mutagénesis insercional por el vector retroviral. Todos menos uno de estos niños respondieron bien al tratamiento antileucémico convencional. Los ensayos de terapia génica para tratar SCID debido a la deficiencia de la enzima adenosina desaminasa ( ADA ) (una forma de SCID) [3] continúan con relativo éxito en los EE. UU., Gran Bretaña, Irlanda, Italia y Japón. [ cita requerida ]
Los adenovirus son virus que llevan su material genético en forma de ADN de doble cadena. Provocan infecciones respiratorias, intestinales y oculares en los seres humanos (especialmente el resfriado común). Cuando estos virus infectan una célula huésped, introducen su molécula de ADN en el huésped. El material genético de los adenovirus no se incorpora (transitorio) al material genético de la célula huésped. La molécula de ADN queda libre en el núcleo de la célula huésped y las instrucciones de esta molécula de ADN adicional se transcriben como cualquier otro gen. La única diferencia es que estos genes adicionales no se replican cuando la célula está a punto de sufrir una división celular, por lo que los descendientes de esa célula no tendrán el gen adicional. [ cita requerida ]
Como resultado, el tratamiento con el adenovirus requerirá la readministración en una población de células en crecimiento, aunque la ausencia de integración en el genoma de la célula huésped debería prevenir el tipo de cáncer observado en los ensayos de SCID. Este sistema de vector ha sido promovido para tratar el cáncer y, de hecho, el primer producto de terapia génica que se autorizó para tratar el cáncer, Gendicine , es un adenovirus. Gendicine, una terapia génica basada en p53 adenoviral , fue aprobada por los reguladores de alimentos y medicamentos chinos en 2003 para el tratamiento del cáncer de cabeza y cuello. Advexin, un enfoque de terapia génica similar de Introgen, fue rechazado por la Administración de Alimentos y Medicamentos de los Estados Unidos (FDA) en 2008. [4]
Las preocupaciones sobre la seguridad de los vectores de adenovirus surgieron después de la muerte en 1999 de Jesse Gelsinger mientras participaba en un ensayo de terapia génica. Desde entonces, el trabajo con vectores de adenovirus se ha centrado en versiones genéticamente limitadas del virus. [ cita requerida ]
El citomegalovirus (CMV) es parte de la subfamilia de los virus del herpes β, que incluye a los roseolovirus. El CMV coevolucionó con una variedad de hospedadores mamíferos, incluidos el CMV humano (HCMV), el CMV murino (MCMV) y el CMV rhesus (RhCMV). Los CMV se caracterizan por tener genomas de ADN grandes y una infección típicamente asintomática en hospedadores sanos.
La primera investigación sobre el citomegalovirus (CMV) como vector de terapia génica se publicó en 2000. El tropismo del CMV por las células progenitoras hematopoyéticas y su gran genoma (230 kbp) atrajeron inicialmente a los investigadores. [5] Desde entonces, se han utilizado vectores de vacunas basados en CMV para inducir la respuesta de las células T. [6] Más recientemente, se administró CMV que contenía telomerasa y folistatina por vía intravenosa e intranasal en estudios con ratones con la intención de prolongar la vida útil. [7]
Los vectores virales descritos anteriormente tienen poblaciones de células hospedadoras naturales que infectan de manera más eficiente. Los retrovirus tienen rangos limitados de células hospedadoras naturales, y aunque los adenovirus y los virus adenoasociados pueden infectar un rango relativamente más amplio de células de manera eficiente, algunos tipos de células también son resistentes a la infección por estos virus. La adhesión y la entrada en una célula susceptible está mediada por la envoltura proteica en la superficie de un virus. Los retrovirus y los virus adenoasociados tienen una sola proteína que recubre su membrana, mientras que los adenovirus están recubiertos tanto con una proteína de envoltura como con fibras que se extienden desde la superficie del virus. Las proteínas de envoltura en cada uno de estos virus se unen a moléculas de la superficie celular como el sulfato de heparina , que las localiza sobre la superficie del hospedador potencial, así como con el receptor proteico específico que induce cambios estructurales que promueven la entrada en la proteína viral, o localiza el virus en endosomas donde la acidificación del lumen induce este replegamiento de la envoltura viral . En cualquier caso, la entrada a las células huésped potenciales requiere una interacción favorable entre una proteína en la superficie del virus y una proteína en la superficie de la célula. [ cita requerida ]
Para los fines de la terapia génica, se podría querer limitar o expandir el rango de células susceptibles a la transducción por un vector de terapia génica. Con este fin, se han desarrollado muchos vectores en los que las proteínas de la envoltura viral endógenas han sido reemplazadas por proteínas de la envoltura de otros virus o por proteínas quiméricas. Dichas quimeras consistirían en aquellas partes de la proteína viral necesarias para la incorporación al virión, así como secuencias destinadas a interactuar con proteínas específicas de la célula huésped. Los virus en los que se han reemplazado las proteínas de la envoltura como se describe se denominan virus pseudotipados . Por ejemplo, el vector retroviral más popular para su uso en ensayos de terapia génica ha sido el lentivirus Virus de inmunodeficiencia de simios recubierto con las proteínas de la envoltura, proteína G , del virus de la estomatitis vesicular . Este vector se denomina lentivirus pseudotipado VSV G e infecta un conjunto casi universal de células. Este tropismo es característico de la proteína G VSV con la que está recubierto este vector. Se han hecho muchos intentos para limitar el tropismo de los vectores virales a una o unas pocas poblaciones de células hospedadoras. Este avance permitiría la administración sistémica de una cantidad relativamente pequeña de vector. El potencial de modificación de células no deseadas sería limitado y se aliviarían muchas preocupaciones de la comunidad médica. La mayoría de los intentos para limitar el tropismo han utilizado proteínas de envoltura quiméricas que contienen fragmentos de anticuerpos . Estos vectores son muy prometedores para el desarrollo de terapias génicas "mágicas". [ cita requerida ]
En la replicación de células tumorales se utiliza un vector con capacidad de replicación denominado ONYX-015. Se ha descubierto que, en ausencia de la proteína viral E1B-55Kd, el adenovirus provoca una apoptosis muy rápida de las células infectadas, p53(+), lo que da como resultado una reducción drástica de la progenie del virus y la no propagación posterior. La apoptosis se debe principalmente a la capacidad del EIA de inactivar el p300. En las células p53(-), la eliminación de E1B 55kd no tiene consecuencias en términos de apoptosis, y la replicación viral es similar a la del virus de tipo salvaje, lo que da como resultado la muerte masiva de células. [ cita requerida ]
Un vector con defectos de replicación elimina algunos genes esenciales. Estos genes eliminados siguen siendo necesarios en el organismo, por lo que se reemplazan con un virus auxiliar o una molécula de ADN. [8]
Los vectores con defectos de replicación siempre contienen un "constructo de transferencia". El constructo de transferencia lleva el gen que se va a transducir o "transgén". El constructo de transferencia también lleva las secuencias que son necesarias para el funcionamiento general del genoma viral: secuencia de empaquetamiento, repeticiones para la replicación y, cuando es necesario, preparación de la transcripción inversa. Estos se denominan elementos que actúan en cis, porque necesitan estar en el mismo fragmento de ADN que el genoma viral y el gen de interés. Los elementos que actúan en trans son elementos virales, que pueden estar codificados en una molécula de ADN diferente. Por ejemplo, las proteínas estructurales virales pueden expresarse a partir de un elemento genético diferente al del genoma viral. [8]
El virus del herpes simple es un virus neurotrópico humano. Se estudia principalmente para la transferencia de genes en el sistema nervioso. El virus HSV-1 de tipo salvaje puede infectar neuronas y evadir la respuesta inmunitaria del huésped, pero aún puede reactivarse y producir un ciclo lítico de replicación viral. Por lo tanto, es típico utilizar cepas mutantes de HSV-1 que son deficientes en su capacidad de replicación. Aunque el virus latente no es evidente a nivel transcripcional, posee promotores específicos de neuronas que pueden seguir funcionando normalmente. [ se necesita más explicación ] Los anticuerpos contra HSV-1 son comunes en humanos, sin embargo, las complicaciones debido a la infección por herpes son algo raras. [9] Se debe tener precaución en casos raros de encefalitis y esto proporciona cierta justificación para usar HSV-2 como vector viral, ya que generalmente tiene tropismo por las células neuronales que inervan el área urogenital del cuerpo y podría entonces evitarle al huésped una patología grave en el cerebro. [ cita requerida ]
Los métodos no virales presentan ciertas ventajas sobre los métodos virales, siendo la producción simple a gran escala y la baja inmunogenicidad del huésped sólo dos de ellas. Anteriormente, los bajos niveles de transfección y expresión del gen ponían a los métodos no virales en desventaja; sin embargo, los avances recientes en la tecnología de vectores han producido moléculas y técnicas con eficiencias de transfección similares a las de los virus. [10]
Este es el método más simple de transfección no viral. Se han realizado ensayos clínicos de inyección intramuscular de un plásmido de ADN desnudo con cierto éxito; sin embargo, la expresión ha sido muy baja en comparación con otros métodos de transfección. Además de los ensayos con plásmidos, se han realizado ensayos con productos de PCR desnudos , que han tenido un éxito similar o mayor. La captación celular de ADN desnudo es generalmente ineficiente. Los esfuerzos de investigación centrados en mejorar la eficiencia de la captación de ADN desnudo han producido varios métodos novedosos, como la electroporación , la sonoporación y el uso de una " pistola genética ", que dispara partículas de oro recubiertas de ADN dentro de la célula utilizando gas a alta presión. [11]
La electroporación es un método que utiliza pulsos cortos de alto voltaje para transportar el ADN a través de la membrana celular. Se cree que este choque provoca la formación temporal de poros en la membrana celular, lo que permite que las moléculas de ADN pasen a través de ella. La electroporación es generalmente eficiente y funciona en una amplia gama de tipos de células. Sin embargo, una alta tasa de muerte celular después de la electroporación ha limitado su uso, incluidas las aplicaciones clínicas.
Más recientemente, se ha utilizado un nuevo método de electroporación, denominado transfección por avalancha de electrones, en experimentos de terapia génica. Mediante el uso de una descarga de plasma de alto voltaje, el ADN se administró de manera eficiente después de pulsos muy cortos (microsegundos). En comparación con la electroporación, la técnica resultó en una eficiencia mucho mayor y un menor daño celular.
El uso del bombardeo de partículas, o pistola genética , es otro método físico de transfección de ADN. En esta técnica, el ADN se recubre con partículas de oro y se carga en un dispositivo que genera una fuerza para lograr la penetración del ADN en las células, dejando el oro en un disco de "detención".
La sonoporación utiliza frecuencias ultrasónicas para introducir ADN en las células. Se cree que el proceso de cavitación acústica altera la membrana celular y permite que el ADN ingrese en las células.
En un método denominado magnetofección , el ADN se combina con partículas magnéticas y se coloca un imán debajo de la placa de cultivo de tejidos para poner los complejos de ADN en contacto con una monocapa de células.
La administración hidrodinámica implica la inyección rápida de un gran volumen de una solución en la vasculatura (como en la vena cava inferior , el conducto biliar o la vena de la cola ). La solución contiene moléculas que se insertarán en las células, como plásmidos de ADN o ARNi , y la transferencia de estas moléculas a las células se ve asistida por la presión hidrostática elevada causada por el gran volumen de solución inyectada. [12] [13] [14]
El uso de oligonucleótidos sintéticos en terapia génica consiste en desactivar los genes implicados en el proceso patológico. Existen varios métodos para lograrlo. Una estrategia utiliza antisentido específico del gen diana para interrumpir la transcripción del gen defectuoso. Otra utiliza pequeñas moléculas de ARN llamadas ARNi para indicar a la célula que corte secuencias únicas específicas en la transcripción del ARNm del gen defectuoso, lo que altera la traducción del ARNm defectuoso y, por lo tanto, la expresión del gen. Otra estrategia utiliza oligodesoxinucleótidos de doble cadena como señuelo para los factores de transcripción que se requieren para activar la transcripción del gen diana. Los factores de transcripción se unen a los señuelos en lugar del promotor del gen defectuoso, lo que reduce la transcripción del gen diana y, por lo tanto, la expresión. Además, se han utilizado oligonucleótidos de ADN monocatenarios para dirigir un cambio de una sola base dentro de un gen mutante. El oligonucleótido está diseñado para hibridarse con complementariedad con el gen diana con la excepción de una base central, la base diana, que sirve como base de plantilla para la reparación. Esta técnica se conoce como reparación genética mediada por oligonucleótidos, reparación genética dirigida o alteración de nucleótidos dirigida.
Para mejorar la entrega del nuevo ADN a la célula, el ADN debe estar protegido de daños y cargado positivamente. Inicialmente, se utilizaron lípidos aniónicos y neutros para la construcción de lipoplexos para vectores sintéticos. Sin embargo, a pesar de que tienen poca toxicidad, son compatibles con los fluidos corporales y existía la posibilidad de adaptarlos para que sean específicos de los tejidos, su producción es complicada y lleva mucho tiempo, por lo que se centró la atención en las versiones catiónicas.
Los lípidos catiónicos , debido a su carga positiva, se utilizaron por primera vez para condensar moléculas de ADN con carga negativa a fin de facilitar la encapsulación del ADN en liposomas. Más tarde se descubrió que el uso de lípidos catiónicos mejoraba significativamente la estabilidad de los lipoplexos. Además, como resultado de su carga, los liposomas catiónicos interactúan con la membrana celular; se creía ampliamente que la endocitosis era la principal vía por la que las células captaban los lipoplexos. Los endosomas se forman como resultado de la endocitosis; sin embargo, si los genes no pueden liberarse en el citoplasma rompiendo la membrana del endosoma, se enviarán a los lisosomas donde se destruirá todo el ADN antes de que puedan cumplir sus funciones. También se descubrió que, aunque los lípidos catiónicos podían condensar y encapsular el ADN en liposomas, la eficiencia de la transfección es muy baja debido a la falta de capacidad en términos de "escape endosómico". Sin embargo, cuando se añadieron lípidos auxiliares (normalmente lípidos electroneutrales, como el DOPE) para formar lipoplexos, se observó una eficiencia de transfección mucho mayor. Más tarde, se descubrió que ciertos lípidos tienen la capacidad de desestabilizar las membranas endosómicas para facilitar el escape del ADN del endosoma, por lo que esos lípidos se denominan lípidos fusogénicos. Aunque los liposomas catiónicos se han utilizado ampliamente como una alternativa para los vectores de administración de genes, también se observó una toxicidad dependiente de la dosis de los lípidos catiónicos que podría limitar sus usos terapéuticos. [15]
El uso más común de los lipoplexos ha sido en la transferencia de genes a células cancerosas, donde los genes suministrados han activado genes de control supresores de tumores en la célula y han disminuido la actividad de los oncogenes. Estudios recientes han demostrado que los lipoplexos son útiles en la transfección de células epiteliales respiratorias .
Los polimerosomas son versiones sintéticas de los liposomas ( vesículas con una bicapa lipídica ), hechas de copolímeros de bloque anfifílicos . Pueden encapsular contenidos hidrofílicos o hidrofóbicos y pueden usarse para transportar carga como ADN, proteínas o fármacos a las células. Las ventajas de los polimerosomas sobre los liposomas incluyen mayor estabilidad, resistencia mecánica, tiempo de circulación sanguínea y capacidad de almacenamiento. [16] [17] [18]
Los complejos de polímeros con ADN se denominan poliplexos. [15] [19] La mayoría de los poliplexos consisten en polímeros catiónicos y su fabricación se basa en el autoensamblaje por interacciones iónicas. Una diferencia importante entre los métodos de acción de los poliplexos y los lipoplexos es que los poliplexos no pueden liberar directamente su carga de ADN en el citoplasma. Como resultado, se requirió la cotransfección con agentes líticos endosómicos como el adenovirus inactivado para facilitar el escape de las nanopartículas de la vesícula endocítica creada durante la absorción de partículas. Sin embargo, una mejor comprensión de los mecanismos por los cuales el ADN puede escapar de la vía endolisosomal, es decir, el efecto esponja de protones, [20] ha desencadenado nuevas estrategias de síntesis de polímeros como la incorporación de residuos protonables en la cadena principal del polímero y ha revitalizado la investigación sobre sistemas basados en policationes. [21]
Debido a su baja toxicidad, alta capacidad de carga y facilidad de fabricación, los nanotransportadores policatiónicos demuestran una gran promesa en comparación con sus rivales, como los vectores virales que muestran una alta inmunogenicidad y potencial carcinogenicidad, y los vectores basados en lípidos que causan toxicidad dependiente de la dosis. La polietilenimina [22] y el quitosano se encuentran entre los portadores poliméricos que se han estudiado ampliamente para el desarrollo de terapias de administración de genes. Otros portadores policatiónicos como los poli(beta-aminoésteres) [23] y el polifosforamidato [24] se están agregando a la biblioteca de posibles portadores de genes. Además de la variedad de polímeros y copolímeros, la facilidad para controlar el tamaño, la forma y la química de la superficie de estos nanotransportadores poliméricos les da una ventaja en la capacidad de focalización y el aprovechamiento de la permeabilidad mejorada y el efecto de retención. [25]
Un dendrímero es una macromolécula muy ramificada con forma esférica. La superficie de la partícula puede funcionalizarse de muchas maneras y muchas de las propiedades del constructo resultante están determinadas por su superficie.
En particular, es posible construir un dendrímero catiónico, es decir, uno con una carga superficial positiva. En presencia de material genético como ADN o ARN, la complementariedad de cargas conduce a una asociación temporal del ácido nucleico con el dendrímero catiónico. Al llegar a su destino, el complejo dendrímero-ácido nucleico es llevado a la célula a través de endocitosis.
En los últimos años, el punto de referencia para los agentes de transfección han sido los lípidos catiónicos. Se ha informado que las limitaciones de estos reactivos competitivos incluyen: la falta de capacidad para transfectar algunos tipos de células, la falta de capacidades sólidas de focalización activa, la incompatibilidad con modelos animales y la toxicidad. Los dendrímeros ofrecen una construcción covalente sólida y un control extremo sobre la estructura de la molécula y, por lo tanto, el tamaño. En conjunto, estos factores brindan ventajas convincentes en comparación con los enfoques existentes.
La producción de dendrímeros ha sido históricamente un proceso lento y costoso que consta de numerosas reacciones lentas, un obstáculo que restringió severamente su desarrollo comercial. La empresa Dendritic Nanotechnologies, con sede en Michigan, descubrió un método para producir dendrímeros utilizando química impulsada cinéticamente, un proceso que no solo redujo el costo en una magnitud de tres, sino que también redujo el tiempo de reacción de más de un mes a varios días. Estos nuevos dendrímeros "Priostar" pueden construirse específicamente para transportar una carga útil de ADN o ARN que transfecta células con una alta eficiencia con poca o ninguna toxicidad. [ cita requerida ]
Se ha demostrado que las nanopartículas inorgánicas, como el oro , el sílice , el óxido de hierro (p. ej., magnetofección ) y los fosfatos de calcio, son capaces de administrar genes. [26] Algunos de los beneficios de los vectores inorgánicos son su estabilidad de almacenamiento, su bajo coste de fabricación y, a menudo, su tiempo de fabricación reducido, su baja inmunogenicidad y su resistencia al ataque microbiano. Se ha demostrado que los materiales nanométricos de menos de 100 nm atrapan eficazmente el ADN o el ARN y permiten su escape del endosoma sin degradación. También se ha demostrado que los inorgánicos muestran una transfección in vitro mejorada para las líneas celulares adheridas debido a su mayor densidad y ubicación preferencial en la base de la placa de cultivo. Los puntos cuánticos también se han utilizado con éxito y permiten el acoplamiento de la terapia génica con un marcador de fluorescencia estable. También se están desarrollando nanopartículas orgánicas diseñadas, que podrían utilizarse para la administración conjunta de genes y agentes terapéuticos. [27]
Los péptidos que penetran en las células (CPP), también conocidos como dominios de transducción de péptidos (PTD), son péptidos cortos (<40 aminoácidos) que pasan eficientemente a través de las membranas celulares mientras están unidos covalentemente o no covalentemente a varias moléculas, facilitando así la entrada de estas moléculas a las células. La entrada a la célula se produce principalmente por endocitosis , pero también existen otros mecanismos de entrada. Los ejemplos de moléculas de carga de CPP incluyen ácidos nucleicos , liposomas y fármacos de bajo peso molecular. [28] [29]
La carga de CPP se puede dirigir hacia orgánulos celulares específicos mediante la incorporación de secuencias de localización en las secuencias de CPP. Por ejemplo, las secuencias de localización nuclear se utilizan comúnmente para guiar la carga de CPP hacia el núcleo. [30] Para guiarla hacia las mitocondrias, se puede utilizar una secuencia de orientación mitocondrial ; este método se utiliza en la protofección (una técnica que permite insertar ADN mitocondrial extraño en las mitocondrias de las células). [31] [32]
Debido a que todos los métodos de transferencia de genes tienen sus defectos, se han desarrollado algunos métodos híbridos que combinan dos o más técnicas. Los virosomas son un ejemplo; combinan liposomas con un virus de la gripe o VIH inactivado . Se ha demostrado que esto tiene una transferencia de genes más eficiente en las células epiteliales respiratorias que los métodos virales o liposomales por separado. Otros métodos implican mezclar otros vectores virales con lípidos catiónicos o hibridar virus. [ cita requerida ]
{{cite journal}}: CS1 maint: varios nombres: lista de autores ( enlace ){{cite journal}}: CS1 maint: varios nombres: lista de autores ( enlace )La definición del diccionario de polyplex en Wikcionario