Hibridación in situ
[9] Desde la aparición de la hibridación in situ, numerosos métodos han sido desarrollados.
Sin embargo esta técnica posee una baja eficiencia de amplificación y una mala reproducibilidad.
Estos artefactos exhiben señales nucleares y son evidentes en células apoptóticas.
Los falsos positivos no se eliminan por completo pero, el grado de detección específica aumenta.
Los sistemas colorimétricos basados en fosfatasa alcalina o peróxidos resultan en una señal pobre.
[11] Es una técnica que detecta secuencias de ácidos nucleicos en células o tejidos preservados mediante el empleo de una sonda marcada con un fluorocromo, la cual va dirigida hacia un lugar específico del cromosoma y que emite fluorescencia que puede ser observada por medio de un microscopio.
[12] Se caracteriza por permitir la visualización directa de las alteraciones genéticas en la célula.
Con independencia del enfoque aplicado FISH específica, sólo las células que contienen el ADN diana son reconocidos por la sonda, y estarán etiquetados con fluorescencia cuando se visualizan con las técnicas adecuadas.
[13] En el FISH multicolor, se usa dos o más sondas marcadas específicamente, las cuales luego de hibridarse con las secuencias de la muestra, son identificadas con diferentes colores fluorescentes.
[1] Los tipos de FISH multicolor incluyen FISH multiplex, cariotipaje espectral, bandas de color entre especies (cross-species color banding) e hibridación genómica comparativa, estas técnicas se describen a continuación: En el multiplex-FISH, el cariotipo espectral del genoma humano se realiza con 24 colores diferentes.
En esta técnica los anticuerpos se conjugan con una enzima que cataliza reacciones de sustratos cromogénicos.
La técnica fue desarrollada inicialmente para líneas celulares híbridas de animales (1986) y, tiempo después para plantas a cargo del Instituto de Fitomejoramiento, Cambridge (1987), donde obtuvo su nombre.
