La empresa colonial se inició siguiendo los planes del líder hugonote francés y almirante de Francia, Gaspard de Coligny, para establecer colonias en el Nuevo Mundo donde los protestantes perseguidos pudieran establecerse con seguridad.Charlesfort fue abandonado por todos los colonos, salvo uno, al año siguiente debido a las dificultades y conflictos internos religiosos, y tuvieron que regresar a Francia.En 1564, René Goulaine de Laudonnière volvió a viajar desde Francia, esta vez para establecer el Fuerte Caroline, en lo que ahora es Jacksonville (Florida).El establecimiento francés fue aniquilado por los españoles en 1565 dirigidos por Pedro Menéndez de Avilés, y todos los hugonotes resultaron muertos, en la captura de Fort Caroline, y la subsiguiente masacre en el por ese motivo conocido como Matanzas Inlet.En 1568, Dominique de Gourgue exploró la zona y, con la ayuda de sus aliados, los indios saturiwa, masacraron a la guarnición española en represalia, pero no aprovecharon debidamente esta acción.