La citrato sintasa existe en casi todas las células y cataliza la primera reacción del ciclo de Krebs.

La citrato sintasa se utiliza comúnmente como marcador enzimático cuantitativo para la presencia de mitocondrias intactas.

Cuando el citroil-CoA se ha formado, la enzima sufre otro cambio conformacional que causa la hidrólisis del tioéster liberando coenzima A.

El sitio activo contiene tres residuos claves: His-274, His-320 y Asp-375, que son altamente selectivos en sus interacciones con los sustratos.

Estos experimentos han revelado que este único sitio alterna entre dos formas con actividad ligasa e hidrolasa.