Una hidrolasa es una enzima capaz de catalizar la hidrólisis de un enlace químico.
Por ejemplo, una enzima que catalice la reacción siguiente será una hidrolasa: La nomenclatura sistemática denomina a estas enzimas como sustrato hidrolasa; no obstante, aún se emplea la nomenclatura tradicional de sustratoasa.
Por ejemplo, el ácido nucleico hidrolasa se conoce como nucleasa.
Las enzimas digestivas pertenecen a esta categoría.
Pertenecen a la categoría EC 3 en la numeración EC.