El Torneo Primera B 2000-01 fue la LXVIII edición del campeonato de Primera B del fútbol argentino en el orden de los clubes directamente afiliados a la AFA.

El campeón y único ascendido fue Defensores de Belgrano quien venció en la final del torneo a Temperley.

Los equipos ubicados en el primer y segundo lugar de la tabla de posiciones final lograron la clasificación a las semifinales del Torneo Reducido, mientras que los equipos ubicados entre el tercer y el décimo lugar se clasificaron a los octavos de final.

El ganador del reducido obtuvo el único ascenso directo que otorgó la categoría en esta temporada.

Defensores de Belgrano salió campeón y ascendió a la Primera B Nacional