Hija del tenor John Defferin Rutherford y la actriz Lucille Mansfield (prima del actor Richard Mansfield), tuvo sus primeros éxitos desde la infancia como prolífica intérprete de radio.
Apareció por primera vez en la gran pantalla en 1935, cuando obtuvo un papel en la película de Joseph Santley The Port Girl.
En solo tres años, entre 1935 y 1938, participó en más de veinte películas, alcanzando cierta notoriedad.
Ann Rutherford (cuya hermana Judith tuvo una breve carrera como actriz y cantante con el nombre de Judith Arlen), se ha casado dos veces: la primera con David May, (casados en la víspera de Navidad de 1942), del que se divorció en 1953 y con el que tuvo una hija, la actriz Gloria May, nacida en 1943, y la segunda con el ya mencionado William Dozier.
Ann Rutherford, falleció a los 94 años en su casa de Beverly Hills, asistida amorosamente por su familia y una amiga de toda la vida, la actriz Anne Jeffreys, que comunicó la triste noticia a los periodistas.