Las pruebas de compatibilidad sanguínea se realizan en un laboratorio médico para identificar posibles incompatibilidades entre los sistemas de grupos sanguíneos en la transfusión de sangre . También se utilizan para diagnosticar y prevenir algunas complicaciones del embarazo que pueden ocurrir cuando el bebé tiene un grupo sanguíneo diferente al de la madre. Las pruebas de compatibilidad sanguínea incluyen la tipificación sanguínea , que detecta los antígenos en los glóbulos rojos que determinan el tipo de sangre de una persona; la prueba de anticuerpos inesperados contra los antígenos del grupo sanguíneo ( detección e identificación de anticuerpos ); y, en el caso de las transfusiones de sangre, la mezcla del plasma del receptor con los glóbulos rojos del donante para detectar incompatibilidades ( prueba cruzada ). La tipificación sanguínea de rutina implica la determinación del tipo ABO y RhD (factor Rh), [nota 1] e implica tanto la identificación de antígenos ABO en los glóbulos rojos (agrupamiento directo) como la identificación de anticuerpos ABO en el plasma (agrupamiento inverso). Se pueden analizar otros antígenos de grupos sanguíneos en situaciones clínicas específicas.
Las pruebas de compatibilidad sanguínea utilizan reacciones entre los antígenos del grupo sanguíneo y los anticuerpos , específicamente la capacidad de los anticuerpos de hacer que los glóbulos rojos se agrupen cuando se unen a los antígenos en la superficie celular, un fenómeno llamado aglutinación . Las técnicas que se basan en reacciones antígeno-anticuerpo se denominan métodos serológicos , y hay varios de estos métodos disponibles, que van desde pruebas manuales con tubos de ensayo o portaobjetos hasta sistemas completamente automatizados. Los tipos de sangre también se pueden determinar a través de pruebas genéticas , que se utilizan cuando existen condiciones que interfieren con las pruebas serológicas o cuando se requiere un alto grado de precisión en la identificación de antígenos.
Varias condiciones pueden causar resultados falsos o no concluyentes en las pruebas de compatibilidad sanguínea. Cuando estos problemas afectan la tipificación ABO, se denominan discrepancias ABO . Las discrepancias ABO deben investigarse y resolverse antes de informar el tipo de sangre de la persona. Otras fuentes de error incluyen el fenómeno de " D débil ", en el que las personas que son positivas para el antígeno RhD muestran reacciones débiles o negativas cuando se realiza la prueba de RhD, y la presencia de anticuerpos de inmunoglobulina G en los glóbulos rojos, que pueden interferir con la detección de anticuerpos, la compatibilidad cruzada y la tipificación de algunos antígenos de grupos sanguíneos.
Antes de una transfusión sanguínea se realizan pruebas de compatibilidad sanguínea de forma rutinaria . El proceso completo de pruebas de compatibilidad incluye la tipificación ABO y RhD (factor Rh); la detección de anticuerpos contra otros sistemas de grupos sanguíneos ; y la prueba cruzada , que implica comparar el plasma sanguíneo del receptor con los glóbulos rojos del donante como verificación final de incompatibilidad. Si se detecta un anticuerpo de grupo sanguíneo inesperado, se justifican más pruebas para identificar el anticuerpo [3] : 740 y garantizar que la sangre del donante sea negativa para el antígeno relevante. [1] : 261 La prueba cruzada serológica puede omitirse si la prueba de anticuerpos del receptor es negativa, no hay antecedentes de anticuerpos clínicamente significativos y su tipo ABO/Rh se ha confirmado con registros históricos o con una segunda muestra de sangre; y en emergencias, se puede transfundir sangre antes de que estén disponibles los resultados de las pruebas de compatibilidad. [1] : 262–3
Las pruebas de compatibilidad sanguínea se realizan a menudo en mujeres embarazadas y en la sangre del cordón umbilical de los recién nacidos, porque la incompatibilidad pone al bebé en riesgo de desarrollar enfermedad hemolítica del recién nacido. [4] [5] También se utiliza antes del trasplante de células madre hematopoyéticas , porque la incompatibilidad del grupo sanguíneo puede ser responsable de algunos casos de enfermedad de injerto contra huésped aguda . [6]
Los tipos de sangre se definen según la presencia o ausencia de antígenos específicos en la superficie de los glóbulos rojos. Los más importantes en medicina son los antígenos ABO y RhD [7] : 585 pero existen muchos otros sistemas de grupos sanguíneos que pueden ser clínicamente relevantes en algunas situaciones. A partir de 2021, se reconocen oficialmente 43 grupos sanguíneos. [8]
Las personas que carecen de ciertos antígenos de grupos sanguíneos en sus glóbulos rojos pueden formar anticuerpos contra estos antígenos. Por ejemplo, una persona con sangre tipo A producirá anticuerpos contra el antígeno B. Los anticuerpos del grupo sanguíneo ABO se producen de forma natural, lo que significa que se encuentran en personas que no han estado expuestas a sangre incompatible. [7] : 585–92 Los anticuerpos contra la mayoría de los demás antígenos de grupos sanguíneos, incluido el RhD, se desarrollan después de que las personas se exponen a los antígenos a través de una transfusión o el embarazo. [1] : 62 Algunos de estos anticuerpos pueden unirse a los glóbulos rojos incompatibles y hacer que se destruyan , lo que da lugar a reacciones a la transfusión y otras complicaciones. [9] : 210–11
Los métodos serológicos para las pruebas de compatibilidad sanguínea hacen uso de estas reacciones anticuerpo-antígeno . En la tipificación sanguínea, reactivos que contienen anticuerpos del grupo sanguíneo, llamados antisueros , [7] : 586 se añaden a suspensiones de células sanguíneas. Si el antígeno relevante está presente, los anticuerpos en el reactivo harán que los glóbulos rojos se aglutinen (se aglomeren), lo que se puede identificar visualmente. [1] : 65 En la detección de anticuerpos, el plasma del individuo se prueba contra un conjunto de glóbulos rojos con perfiles de antígenos conocidos; si el plasma aglutina uno de los glóbulos rojos en el panel, esto indica que el individuo tiene un anticuerpo contra uno de los antígenos presentes en las células. En la prueba cruzada, el plasma de un posible receptor de transfusión se agrega a los glóbulos rojos del donante y se observa la aglutinación (o hemólisis) para detectar anticuerpos que podrían causar reacciones transfusionales. [3] : 722–5
Los anticuerpos del grupo sanguíneo se presentan en dos formas principales: inmunoglobulina M (IgM) e inmunoglobulina G (IgG). Los anticuerpos que son predominantemente IgM, como los anticuerpos ABO, normalmente provocan una aglutinación inmediata de los glóbulos rojos a temperatura ambiente. Por lo tanto, el tipo sanguíneo ABO de una persona se puede determinar simplemente añadiendo los glóbulos rojos al reactivo y centrifugando o mezclando la muestra, [1] : 122 y en la prueba de compatibilidad cruzada, la incompatibilidad entre los tipos ABO se puede detectar inmediatamente después de la centrifugación. [3] : 725 La tipificación RhD también suele utilizar reactivos IgM [10] : 477 aunque el anti-RhD suele presentarse como IgG en el cuerpo. [1] : 161 Los anticuerpos que son predominantemente IgG, como los dirigidos contra antígenos de los sistemas Duffy y Kidd , [1] : 198–200 generalmente no causan aglutinación inmediata porque el pequeño tamaño del anticuerpo IgG impide la formación de una estructura reticular. Por lo tanto, la tipificación sanguínea utilizando antisueros IgG y la detección de anticuerpos IgG requiere el uso de la prueba de antiglobulina indirecta para demostrar la unión de IgG a los glóbulos rojos. [1] : 104
En la prueba de antiglobulina indirecta, la mezcla de antisuero o plasma y glóbulos rojos se incuba a 37 °C (99 °F), la temperatura ideal para la reactividad de los anticuerpos IgG. Después de la incubación, los glóbulos rojos se lavan con solución salina para eliminar los anticuerpos no unidos y se agrega el reactivo antiglobulina humana. Si los anticuerpos IgG se han unido a antígenos en la superficie celular, la globulina antihumana se unirá a esos anticuerpos, lo que hará que los glóbulos rojos se aglutinen después de la centrifugación. Si la reacción es negativa, se agregan "células de control" (células reactivas recubiertas con IgG) para garantizar que la prueba esté funcionando correctamente. Si el resultado de la prueba es realmente negativo, las células de control deben reaccionar con la globulina antihumana no unida y demostrar la aglutinación. [3] : 716–9
En la tipificación ABO y Rh, se añaden reactivos que contienen anticuerpos contra los antígenos A, B y RhD a suspensiones de células sanguíneas. Si el antígeno relevante está presente, los glóbulos rojos mostrarán una aglutinación visible (agrupamiento). [1] : 65 Además de identificar los antígenos ABO, lo que se denomina agrupamiento directo, la tipificación sanguínea ABO de rutina también incluye la identificación de los anticuerpos ABO en el plasma de la persona. Esto se llama agrupamiento inverso, [1] : 120 y se realiza para confirmar el tipo sanguíneo ABO. En el agrupamiento inverso, el plasma de la persona se añade a los glóbulos rojos tipo A 1 y tipo B. El plasma debe aglutinar las células que expresan antígenos de los que carece la persona, mientras que no puede aglutinar las células que expresan los mismos antígenos que el paciente. Por ejemplo, el plasma de una persona con sangre tipo A debe reaccionar con los glóbulos rojos tipo B, pero no con los A 1. Si no se producen los resultados esperados, se requieren más pruebas. [7] : 595 La aglutinación se puntúa de 1+ a 4+ según la fuerza de la reacción. En la tipificación ABO, una puntuación de 3+ o 4+ indica una reacción positiva, mientras que una puntuación de 1+ o 2+ no es concluyente y requiere una investigación más exhaustiva. [1] : 236
Antes de recibir una transfusión de sangre, se examina a los individuos para detectar la presencia de anticuerpos contra antígenos de sistemas de grupos sanguíneos no ABO . [5] Los antígenos de grupos sanguíneos además de ABO y RhD que son significativos en la medicina transfusional incluyen los antígenos RhC/c y E/e y los antígenos de los sistemas Duffy , Kell , Kidd y MNS . [1] : 158–173 Si se identifica un anticuerpo clínicamente significativo, el receptor debe ser transfundido con sangre que sea negativa para el antígeno correspondiente para prevenir una reacción transfusional. Esto requiere que las unidades del donante sean tipificadas para el antígeno relevante. [1] : 261 El receptor también puede ser tipificado para el antígeno para confirmar la identidad del anticuerpo, ya que solo los individuos que son negativos para un antígeno de grupo sanguíneo deberían producir anticuerpos contra él. [7] : 603
En Europa, las mujeres que requieren transfusiones de sangre a menudo se tipifican para los antígenos Kell y Rh extendido para prevenir la sensibilización a estos antígenos, lo que podría ponerlas en riesgo de desarrollar enfermedad hemolítica del recién nacido durante el embarazo. [11] La Sociedad Americana de Hematología recomienda que las personas con enfermedad de células falciformes se tipifiquen la sangre para los antígenos RhC/c, RhE/e, Kell, Duffy, Kidd y MNS antes de la transfusión, [12] : 130–1 porque a menudo requieren transfusiones y pueden sensibilizarse a estos antígenos si se transfunden con sangre no compatible. [13] La fenotipificación extendida de glóbulos rojos también se recomienda para personas con beta-talasemia . [14] Los sistemas de grupos sanguíneos distintos de ABO y Rh tienen un riesgo relativamente pequeño de complicaciones cuando se mezcla la sangre, por lo que en emergencias como una hemorragia importante , la urgencia de la transfusión puede superar la necesidad de pruebas de compatibilidad con otros sistemas de grupos sanguíneos (y potencialmente Rh también). [15]
Los anticuerpos contra la mayoría de los antígenos de los grupos sanguíneos, además de los del sistema ABO, se desarrollan después de la exposición a sangre incompatible. [1] : 62 Estos anticuerpos "inesperados" contra los grupos sanguíneos solo se encuentran en el 0,8-2 % de las personas; sin embargo, los receptores de transfusiones de sangre deben someterse a pruebas de detección de estos anticuerpos para prevenir reacciones a las transfusiones. La detección de anticuerpos también se realiza como parte de la atención prenatal , porque los anticuerpos contra RhD y otros antígenos de los grupos sanguíneos pueden causar enfermedad hemolítica del recién nacido, y porque las madres Rh negativas que han desarrollado un anticuerpo anti-RhD no son elegibles para recibir inmunoglobulina Rho(D) (Rhogam). [1] : 233
En el procedimiento de detección de anticuerpos, el plasma de un individuo se añade a un panel de dos o tres grupos de glóbulos rojos que se han elegido para expresar la mayoría de los antígenos de los grupos sanguíneos clínicamente significativos. En la detección de anticuerpos sólo se utilizan células del grupo O, ya que de lo contrario las células reaccionarían con los anticuerpos del grupo sanguíneo ABO que se producen de forma natural. La mezcla de plasma y glóbulos rojos se incuba a 37 °C y se analiza mediante la prueba de antiglobulina indirecta. Algunos protocolos de detección e identificación de anticuerpos incorporan una fase de prueba después de la incubación a temperatura ambiente, pero esto a menudo se omite porque la mayoría de los anticuerpos inesperados que reaccionan a temperatura ambiente son clínicamente insignificantes. [3] : 722–4
La aglutinación de las células de detección por el plasma, con o sin la adición de globulina antihumana, indica la presencia de un anticuerpo de un grupo sanguíneo inesperado. Si esto ocurre, es necesario realizar más pruebas con más células (normalmente 10-11) para identificar el anticuerpo. Al examinar los perfiles antigénicos de los glóbulos rojos con los que reacciona el plasma de la persona, es posible determinar la identidad del anticuerpo. Se incluye un "autocontrol", en el que se prueba el plasma del individuo frente a sus propios glóbulos rojos, para determinar si la aglutinación se debe a un aloanticuerpo (un anticuerpo contra un antígeno extraño), un autoanticuerpo (un anticuerpo contra los propios antígenos) u otra sustancia interferente. [3] : 722–4
La imagen superior muestra la interpretación de un panel de anticuerpos utilizado en serología para detectar anticuerpos contra los antígenos de los grupos sanguíneos más relevantes. Cada fila representa glóbulos rojos de “referencia” o “control” de donantes que tienen composiciones antigénicas conocidas y son del grupo ABO O. El símbolo + significa que el antígeno está presente en los glóbulos rojos de referencia, y 0 significa que está ausente; nt significa “no analizado”. La columna de “resultado” a la derecha muestra la reactividad al mezclar glóbulos rojos de referencia con plasma del paciente en 3 fases diferentes: temperatura ambiente, 37°C y AHG (con globulina antihumana, mediante la prueba de antiglobulina indirecta ). [16]
En este caso, el panel de anticuerpos muestra la presencia de anticuerpos anti-Fy a . Esto indica que se debe utilizar sangre de donante tipificada como negativa para el antígeno Fy a . Aun así, si una prueba cruzada posterior muestra reactividad, se deben realizar pruebas adicionales contra antígenos previamente descartados (en este caso, potencialmente E, K, Kp a y/o Lu a ). [16]
Cuando hay múltiples anticuerpos presentes, o cuando un anticuerpo se dirige contra un antígeno de alta frecuencia, el procedimiento normal del panel de anticuerpos puede no proporcionar una identificación concluyente. En estos casos, se puede utilizar la inhibición de la hemaglutinación , en la que una sustancia neutralizante anula un antígeno específico. [17] Alternativamente, el plasma se puede incubar con células de perfiles de antígeno conocidos para eliminar un anticuerpo específico (un proceso denominado adsorción ); o las células se pueden tratar con enzimas como la ficaína o la papaína que inhiben la reactividad de algunos anticuerpos de grupos sanguíneos y potencian otros. [3] : 723–9 El efecto de la ficaína y la papaína en los principales sistemas de grupos sanguíneos es el siguiente: [18] [19]
Las personas que en el pasado dieron positivo en una prueba de anticuerpos de un grupo sanguíneo inesperado pueden no mostrar una reacción positiva en pruebas posteriores; sin embargo, si el anticuerpo es clínicamente significativo, se les debe transfundir sangre negativa al antígeno de todos modos. [20]
La prueba de compatibilidad, que se realiza de forma rutinaria antes de una transfusión de sangre, implica agregar el plasma sanguíneo del receptor a una muestra de glóbulos rojos del donante. Si la sangre es incompatible, los anticuerpos del plasma del receptor se unirán a los antígenos de los glóbulos rojos del donante. Esta reacción anticuerpo-antígeno se puede detectar a través de la aglutinación o destrucción visible de los glóbulos rojos, o por reacción con globulina antihumana , después de la centrifugación. [7] : 600–3
Si el receptor de la transfusión tiene un resultado negativo en la prueba de anticuerpos y no tiene antecedentes de anticuerpos, a menudo se realiza una prueba cruzada de "centrifugación inmediata": los glóbulos rojos y el plasma se centrifugan inmediatamente después de mezclarlos como una comprobación final de la incompatibilidad entre los grupos sanguíneos ABO. Si se detecta un anticuerpo clínicamente significativo (o se detectó en el pasado), o si la prueba cruzada de centrifugación inmediata demuestra incompatibilidad, se realiza una prueba cruzada "completa" o "de IgG", que utiliza la prueba de antiglobulina indirecta para detectar la incompatibilidad de grupo sanguíneo causada por anticuerpos IgG. El procedimiento de prueba cruzada de IgG es más largo que la prueba cruzada de centrifugación inmediata y, en algunos casos, puede llevar más de dos horas. [20]
Las personas que tengan un resultado negativo en la prueba de anticuerpos y no tengan antecedentes de anticuerpos también pueden someterse a una "prueba cruzada electrónica", siempre que se haya determinado su tipo ABO y Rh a partir de la muestra de sangre actual y que se hayan registrado los resultados de otro tipo ABO/Rh. En este caso, el tipo de sangre del receptor simplemente se compara con el del donante, sin necesidad de realizar pruebas serológicas. [7] : 600–3 En caso de emergencia, se puede suministrar sangre antes de que se complete la prueba cruzada. [1] : 262–3
La tipificación sanguínea se puede realizar utilizando tubos de ensayo, microplacas o portaobjetos. El método del tubo implica mezclar una suspensión de glóbulos rojos con antisueros (o plasma, para la agrupación inversa) en un tubo de ensayo. La mezcla se centrifuga para separar las células del reactivo y luego se resuspende agitando suavemente el tubo. Si el antígeno de interés está presente, los glóbulos rojos se aglutinan, formando un grumo sólido en el tubo. Si no está presente, los glóbulos rojos vuelven a estar en suspensión cuando se mezclan. [7] : 611–12 [9] : 214 El método de microplaca es similar al método del tubo, excepto que en lugar de utilizar tubos de ensayo individuales, la tipificación sanguínea se lleva a cabo en una placa que contiene docenas de pocillos, lo que permite realizar múltiples pruebas al mismo tiempo. Las reacciones de aglutinación se leen después de centrifugar la placa. [21] : 201
La detección e identificación de anticuerpos también se puede realizar mediante el método del tubo. En este procedimiento, el plasma y los glóbulos rojos se mezclan en un tubo que contiene un medio que mejora las reacciones de aglutinación, como la solución salina de baja fuerza iónica (LISS). Los tubos se incuban a temperatura corporal durante un período de tiempo definido, luego se centrifugan y se examinan para detectar aglutinación o hemólisis; primero inmediatamente después del período de incubación y luego después del lavado y la adición de reactivo de globulina antihumana. [3] : 722 La prueba cruzada, de la misma manera, se puede realizar mediante el método del tubo; las reacciones se leen inmediatamente después de la centrifugación en la prueba cruzada de centrifugación inmediata, o después de la incubación y la adición de AHG en el procedimiento de prueba cruzada completa. [3] : 725
El método de portaobjetos para la tipificación de la sangre consiste en mezclar una gota de sangre con una gota de antisuero en un portaobjetos. El portaobjetos se inclina para mezclar las células y los reactivos y luego se observa si hay aglutinación, lo que indica un resultado positivo. Este método se utiliza normalmente en zonas con pocos recursos o situaciones de emergencia; de lo contrario, se prefieren métodos alternativos. [9] : 214 [10] : 476
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Las técnicas de aglutinación en columna para las pruebas de compatibilidad sanguínea (a veces denominadas "pruebas de gel") utilizan tarjetas que contienen columnas de gel de dextrano - poliacrilamida . Las tarjetas diseñadas para la tipificación sanguínea contienen reactivos de tipificación sanguínea previamente dispensados para la agrupación directa y pocillos que contienen solo una solución tampón , a la que se añaden los glóbulos rojos reactivos y el plasma, para la agrupación inversa. La detección y el emparejamiento cruzado de anticuerpos también se pueden realizar mediante aglutinación en columna, en cuyo caso se utilizan tarjetas que contienen reactivo de globulina antihumana. Las tarjetas de gel se centrifugan (a veces después de la incubación, según la prueba), durante la cual los aglutinados de glóbulos rojos quedan atrapados en la parte superior de la columna porque son demasiado grandes para migrar a través del gel. Las células que no se han aglutinado se acumulan en la parte inferior. Por lo tanto, una línea de glóbulos rojos en la parte superior de la columna indica un resultado positivo. La fuerza de las reacciones positivas se puntúa de 1+ a 4+ dependiendo de la distancia que hayan recorrido las células a través del gel. La prueba en gel tiene ventajas sobre los métodos manuales, ya que elimina la variabilidad asociada con la resuspensión manual de las células y las tarjetas se pueden conservar como un registro de la prueba. [1] : 269–71 El método de aglutinación en columna es utilizado por algunos analizadores automáticos para realizar la tipificación sanguínea automáticamente. [7] : 590 Estos analizadores pipetean glóbulos rojos y plasma en tarjetas de gel, los centrifugan y escanean y leen las reacciones de aglutinación para determinar el tipo de sangre. [1] : 270–1
Los ensayos en fase sólida (a veces llamados el método de "captura de antígeno") utilizan antígenos reactivos o anticuerpos fijados a una superficie (generalmente una microplaca). [9] : 214 Los pocillos de microplaca recubiertos con reactivos anti-A, -B y -D se utilizan para la agrupación directa. Se agrega la muestra de prueba y se centrifuga la microplaca; en una reacción positiva, los glóbulos rojos se adhieren a la superficie del pocillo. [7] : 590 [10] : 477 Algunos analizadores automáticos utilizan ensayos en fase sólida para la tipificación sanguínea. [1] : 275–6
Las pruebas genéticas pueden utilizarse para determinar el tipo de sangre de una persona en determinadas situaciones en las que las pruebas serológicas son insuficientes. Por ejemplo, si a una persona se le ha transfundido un gran volumen de sangre de un donante, los resultados de las pruebas serológicas reflejarán los antígenos de las células del donante y no el tipo de sangre real de la persona. [11] Las personas que producen anticuerpos contra sus propios glóbulos rojos [21] : 202 o que reciben tratamiento con determinados fármacos pueden mostrar reacciones de aglutinación falsas en las pruebas serológicas, por lo que puede ser necesario realizar una genotipificación para determinar su tipo de sangre con precisión. [1] : 261 Las pruebas genéticas son necesarias para tipificar los antígenos de los glóbulos rojos para los que no hay antisueros comerciales disponibles. [11]
La AABB recomienda la genotipificación del antígeno RhD para mujeres con fenotipos D débiles serológicos que tienen el potencial de tener hijos. Esto se debe a que algunas personas con fenotipos D débiles pueden producir anticuerpos contra el antígeno RhD, que puede causar enfermedad hemolítica del recién nacido, mientras que otras no pueden. La genotipificación puede identificar el tipo específico de antígeno D débil, que determina el potencial de la persona para producir anticuerpos, evitando así el tratamiento innecesario con inmunoglobulina Rho(D) . [22] [23] La genotipificación es preferible a las pruebas serológicas para las personas con enfermedad de células falciformes, porque es más precisa para ciertos antígenos y puede identificar antígenos que no se pueden detectar mediante métodos serológicos. [13]
La genotipificación también se utiliza en las pruebas prenatales para la enfermedad hemolítica del recién nacido. Cuando una mujer embarazada tiene un anticuerpo de grupo sanguíneo que puede causar HDN, el feto puede ser tipificado para el antígeno relevante para determinar si tiene riesgo de desarrollar la enfermedad. Debido a que no es práctico extraer sangre del feto, el tipo de sangre se determina utilizando una muestra de amniocentesis o ADN fetal libre de células aislado de la sangre de la madre. [21] : 202 [22] El padre también puede ser genotipificado para predecir el riesgo de enfermedad hemolítica del recién nacido, porque si el padre es homocigoto para el antígeno relevante (es decir, tiene dos copias del gen), el bebé será positivo para el antígeno y, por lo tanto, estará en riesgo de desarrollar la enfermedad. Si el padre es heterocigoto (tiene solo una copia), el bebé solo tiene un 50% de posibilidades de ser positivo para el antígeno. [11]
En la tipificación ABO, los resultados de la agrupación directa e inversa siempre deben corresponderse entre sí. Una diferencia inesperada entre los dos resultados se denomina discrepancia ABO y debe resolverse antes de informar el tipo de sangre de la persona. [1] : 136
Las reacciones débiles en el agrupamiento directo pueden ocurrir en personas que pertenecen a ciertos subgrupos ABO (tipos sanguíneos variantes que se caracterizan por una expresión reducida de los antígenos A o B o cambios en su estructura). La expresión debilitada de los antígenos ABO también puede ocurrir en la leucemia y el linfoma de Hodgkin . Las reacciones débiles en el agrupamiento directo pueden reforzarse incubando la mezcla de sangre y reactivo a temperatura ambiente o a 4 °C (39 °F), o utilizando ciertas enzimas para mejorar las reacciones antígeno-anticuerpo. [1] : 139
Ocasionalmente, se observan dos poblaciones de glóbulos rojos después de la reacción con los antisueros de tipificación sanguínea. Algunos de los glóbulos rojos están aglutinados, mientras que otros no, lo que dificulta la interpretación del resultado. Esto se denomina reacción de campo mixto y puede ocurrir si alguien ha recibido recientemente una transfusión de sangre con un tipo de sangre diferente (como en el caso de un paciente de tipo A que recibe sangre de tipo O), si ha recibido un trasplante de médula ósea o de células madre de alguien con un tipo de sangre diferente, o en pacientes con ciertos subgrupos ABO, como A3 . La investigación de la historia clínica de la persona puede aclarar la causa de la reacción de campo mixto. [1] : 138 [24] : 314
Las personas con enfermedad por crioaglutininas producen anticuerpos contra sus propios glóbulos rojos que hacen que se aglutinen espontáneamente a temperatura ambiente, lo que da lugar a reacciones positivas falsas en el agrupamiento directo. Las crioaglutininas se pueden desactivar generalmente calentando la muestra a 37 °C (99 °F) y lavando los glóbulos rojos con solución salina. Si esto no es eficaz, se puede utilizar ditiotreitol para destruir los anticuerpos. [1] : 141
Las muestras de sangre del cordón umbilical pueden estar contaminadas con gelatina de Wharton , una sustancia viscosa que puede hacer que los glóbulos rojos se adhieran entre sí, imitando la aglutinación. La gelatina de Wharton se puede eliminar lavando bien los glóbulos rojos. [1] : 141
En un fenómeno poco frecuente conocido como "antígeno B adquirido", un paciente cuyo tipo de sangre verdadero es A puede mostrar un resultado positivo débil para B en el grupo de agrupación directa. Esta condición, que se asocia con enfermedades gastrointestinales como el cáncer de colon [1] : 139 y la obstrucción intestinal , [24] : 126 resulta de la conversión del antígeno A a una estructura que imita al antígeno B por enzimas bacterianas. [10] : 477 A diferencia del antígeno B verdadero, el antígeno B adquirido no reacciona con reactivos dentro de un cierto rango de pH. [1] : 139
Los bebés menores de 3 a 6 meses de edad presentan reacciones débiles o ausentes en el agrupamiento inverso porque producen niveles muy bajos de anticuerpos ABO. [1] : 136 Por lo tanto, el agrupamiento inverso generalmente no se realiza para este grupo de edad. [10] : 486 Las personas mayores también pueden presentar una producción reducida de anticuerpos, al igual que las personas con hipogammaglobulinemia . Las reacciones débiles se pueden fortalecer permitiendo que el plasma y los glóbulos rojos se incuben a temperatura ambiente durante 15 a 30 minutos, y si esto no es efectivo, se pueden incubar a 4 °C (39 °F). [1] : 137–8
Aproximadamente el 20% de las personas con el tipo de sangre A o AB pertenecen a un subgrupo de A, denominado A 2 , mientras que el subgrupo más común, que abarca aproximadamente el 80% de las personas, se denomina A 1 . Debido a pequeñas diferencias en la estructura de los antígenos A 1 y A 2 , algunas personas del subgrupo A 2 pueden producir un anticuerpo contra A 1 . Por lo tanto, estas personas se clasificarán como A o AB en el grupo directo, pero exhibirán una reacción positiva inesperada con los glóbulos rojos de tipo A 1 en el grupo inverso. La discrepancia se puede resolver analizando los glóbulos rojos de la persona con un reactivo anti-A 1 , que dará un resultado negativo si el paciente pertenece al subgrupo A 2. Los anticuerpos anti-A 1 se consideran clínicamente insignificantes a menos que reaccionen a 37 °C (99 °F). Existen otros subgrupos de A, así como subgrupos de B, pero rara vez se encuentran. [1] : 127–32
Si hay niveles elevados de proteína en el plasma de una persona, puede producirse un fenómeno conocido como rouleaux cuando se añade el plasma a las células reactivas. Los rouleaux hacen que los glóbulos rojos se apilen, lo que puede imitar la aglutinación y provocar un resultado positivo falso en la agrupación inversa. Esto se puede evitar retirando el plasma, reemplazándolo con solución salina y volviendo a centrifugar el tubo. Los rouleaux desaparecerán una vez que se reemplace el plasma con solución salina, pero persistirá la aglutinación verdadera. [1] : 140–1
Los anticuerpos contra antígenos de grupos sanguíneos distintos de A y B pueden reaccionar con las células reactivas utilizadas en la agrupación inversa. Si hay un autoanticuerpo que reacciona al frío , el resultado positivo falso se puede resolver calentando la muestra a 37 °C (99 °F). Si el resultado es causado por un aloanticuerpo, se puede realizar una prueba de detección de anticuerpos para identificar el anticuerpo, [7] : 141–2 y la agrupación inversa se puede realizar utilizando muestras que carecen del antígeno relevante. [10] : 477
Aproximadamente entre el 0,2 y el 1 % de las personas tienen un fenotipo "D débil", [25] lo que significa que son positivos para el antígeno RhD, pero presentan reacciones débiles o negativas con algunos reactivos anti-RhD debido a la disminución de la expresión del antígeno o variantes atípicas de la estructura del antígeno. Si las pruebas serológicas de rutina para RhD dan como resultado una puntuación de 2+ o menos, se puede utilizar la prueba de antiglobulina para demostrar la presencia de RhD. [1] : 159 Las pruebas de D débil también se realizan en donantes de sangre que inicialmente se tipifican como RhD negativo. [22] Históricamente, los donantes de sangre con D débil eran tratados como Rh positivo y los pacientes con D débil eran tratados como Rh negativo para evitar la posible exposición a sangre incompatible. La genotipificación se utiliza cada vez más para determinar la base molecular de los fenotipos D débil, ya que esto determina si los individuos con D débil pueden producir anticuerpos contra RhD o sensibilizar a otros al antígeno RhD. [25]
La prueba de antiglobulina indirecta , que se utiliza para la detección de D débil y la tipificación de algunos antígenos de glóbulos rojos, detecta la IgG unida a los glóbulos rojos. Si la IgG está unida a los glóbulos rojos in vivo , como puede ocurrir en la anemia hemolítica autoinmune , la enfermedad hemolítica del recién nacido y las reacciones transfusionales, [10] : 260 la prueba de antiglobulina indirecta siempre dará un resultado positivo, independientemente de la presencia del antígeno relevante. [10] : 477–8 Se puede realizar una prueba de antiglobulina directa para demostrar que la reacción positiva se debe a la sensibilización de los glóbulos rojos. [26] : 289
Algunos grupos de personas tienen requisitos de transfusión especializados. Los fetos, los bebés con muy bajo peso al nacer y las personas inmunodeprimidas corren el riesgo de desarrollar una infección grave por citomegalovirus (CMV), un patógeno oportunista para el que aproximadamente el 50 % de los donantes de sangre dan positivo, y pueden recibir transfusiones de sangre CMV-negativa para prevenir la infección. [3] : 749 [27] Aquellos que corren el riesgo de desarrollar la enfermedad de injerto contra huésped , como los receptores de trasplante de médula ósea , reciben sangre que ha sido irradiada para inactivar los linfocitos T que son responsables de esta reacción. Las personas que han tenido reacciones alérgicas graves a las transfusiones de sangre en el pasado pueden recibir transfusiones de sangre que han sido "lavadas" para eliminar el plasma. [1] : 342–5 También se examina la historia del paciente para ver si ha identificado previamente anticuerpos y cualquier otra anomalía serológica.
También se realiza una prueba de antiglobulina directa ( prueba de Coombs ) como parte de la investigación de anticuerpos. [28]
La sangre de los donantes suele ser sometida a pruebas de detección de infecciones transmitidas por transfusión , como el VIH . En 2018, la Organización Mundial de la Salud informó que casi el 100 % de las donaciones de sangre en países de ingresos altos y medianos altos se sometieron a pruebas de detección de enfermedades infecciosas, pero las cifras para los países de ingresos medianos bajos y bajos fueron del 82 % y el 80,3 %, respectivamente. [29]
En 1901, Karl Landsteiner publicó los resultados de un experimento en el que mezcló el suero y los glóbulos rojos de cinco donantes humanos diferentes. Observó que el suero de una persona nunca aglutinaba sus propios glóbulos rojos, pero sí podía aglutinar los de otros, y basándose en las reacciones de aglutinación, los glóbulos rojos podían clasificarse en tres grupos: grupo A, grupo B y grupo C. El grupo C, que consistía en glóbulos rojos que no reaccionaban con el plasma de ninguna persona, se conocería más tarde como grupo O. [30] : 5 Un cuarto grupo, ahora conocido como AB, fue descrito por los colegas de Landsteiner en 1902. [30] : 7 Este experimento fue el primer ejemplo de tipificación sanguínea. [1] : 120
En 1945, Robin Coombs , AE Mourant y RR Race publicaron una descripción de la prueba de antiglobulina (también conocida como prueba de Coombs). Investigaciones anteriores sobre anticuerpos de grupos sanguíneos habían documentado la presencia de los llamados anticuerpos "bloqueantes" o "incompletos": anticuerpos que ocupaban sitios de antígenos, impidiendo que otros anticuerpos se unieran, pero no causaban que los glóbulos rojos se aglutinaran. Coombs y sus colegas idearon un método para demostrar fácilmente la presencia de estos anticuerpos. Inyectaron inmunoglobulinas humanas en conejos, lo que hizo que produjeran un anticuerpo antiglobulina humana . La globulina antihumana podía unirse a anticuerpos ya adheridos a los glóbulos rojos y hacer que se aglutinaran. La invención de la prueba de antiglobulina condujo al descubrimiento de muchos más antígenos de grupos sanguíneos. A principios de la década de 1950, las empresas habían comenzado a producir antisueros comerciales para pruebas de antígenos especiales. [30] : 62–72
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