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Proteína quinasa A

En biología celular , la proteína quinasa A ( PKA ) es una familia de serina-treonina quinasas [1] cuya actividad depende de los niveles celulares de AMP cíclico (cAMP). La PKA también se conoce como proteína quinasa dependiente de AMPc ( EC 2.7.11.11). La PKA tiene varias funciones en la célula, incluida la regulación del metabolismo del glucógeno , el azúcar y los lípidos . No debe confundirse con la proteína quinasa activada por 5' -AMP ( proteína quinasa activada por AMP ).

Historia

La proteína quinasa A, más precisamente conocida como proteína quinasa dependiente de adenosina 3',5'-monofosfato (AMP cíclico), abreviada como PKA, fue descubierta por los químicos Edmond H. Fischer y Edwin G. Krebs en 1968. Ganaron el Premio Nobel de Fisiología o Medicina en 1992 por su trabajo sobre la fosforilación y desfosforilación y su relación con la actividad de la PKA. [2]

La PKA es una de las proteínas quinasas más investigadas , en parte debido a su singularidad; de los 540 genes de proteína quinasa diferentes que componen el cinoma humano , solo se sabe que existe otra proteína quinasa, la caseína quinasa 2 , en un complejo tetramérico fisiológico, lo que significa que consta de cuatro subunidades. [1]

La diversidad de las subunidades de la PKA en los mamíferos se hizo evidente después de que el Dr. Stan McKnight y otros identificaran cuatro posibles genes de subunidades catalíticas y cuatro genes de subunidades reguladoras. En 1991, Susan Taylor y sus colegas cristalizaron la subunidad Cα de la PKA, lo que reveló por primera vez la estructura bilobulada del núcleo de la proteína quinasa, proporcionando un modelo para todas las demás proteínas quinasas en un genoma (el cinoma). [3]

Estructura

Cuando está inactiva, la apoenzima PKA existe como un tetrámero que consta de dos subunidades reguladoras y dos subunidades catalíticas. La subunidad catalítica contiene el sitio activo, una serie de residuos canónicos que se encuentran en las proteínas quinasas que se unen e hidrolizan el ATP , y un dominio para unir la subunidad reguladora. La subunidad reguladora tiene dominios para unirse al AMP cíclico, un dominio que interactúa con la subunidad catalítica y un dominio autoinhibitorio. Hay dos formas principales de subunidad reguladora: RI y RII. [4]

Las células de mamíferos tienen al menos dos tipos de PKA: el tipo I se encuentra principalmente en el citosol , mientras que el tipo II se une a través de sus subunidades reguladoras y proteínas de anclaje especiales, descritas en la sección de anclaje, a la membrana plasmática , la membrana nuclear , la membrana externa mitocondrial y los microtúbulos . En ambos tipos, una vez que las subunidades catalíticas se liberan y se activan, pueden migrar al núcleo (donde pueden fosforilar proteínas reguladoras de la transcripción), mientras que las subunidades reguladoras permanecen en el citoplasma. [5]

Los siguientes genes humanos codifican subunidades de PKA:

Mecanismo

Descripción general: Mecanismos de activación e inactivación de la PKA

Activación

La PKA también se conoce comúnmente como proteína quinasa dependiente de AMPc, porque tradicionalmente se ha pensado que se activa a través de la liberación de las subunidades catalíticas cuando los niveles del segundo mensajero llamado monofosfato de adenosina cíclico , o AMPc, aumentan en respuesta a una variedad de señales. Sin embargo, estudios recientes que evalúan los complejos de holoenzimas intactos, incluidos los complejos de señalización reguladores unidos a AKAP, han sugerido que la activación subcelular local de la actividad catalítica de la PKA podría proceder sin la separación física de los componentes reguladores y catalíticos, especialmente a concentraciones fisiológicas de AMPc. [6] [7] Por el contrario, las concentraciones suprafisiológicas inducidas experimentalmente de AMPc, es decir, más altas que las observadas normalmente en las células, pueden causar la separación de las holoenzimas y la liberación de las subunidades catalíticas. [6]

Las hormonas extracelulares, como el glucagón y la epinefrina , inician una cascada de señalización intracelular que desencadena la activación de la proteína quinasa A al unirse primero a un receptor acoplado a proteína G (GPCR) en la célula diana. Cuando un GPCR es activado por su ligando extracelular, se induce un cambio conformacional en el receptor que se transmite a un complejo de proteína G heterotrimérico intracelular unido por dinámica de dominios proteicos . La subunidad Gs alfa del complejo de proteína G estimulado intercambia GDP por GTP en una reacción catalizada por el GPCR y se libera del complejo. La subunidad Gs alfa activada se une y activa una enzima llamada adenilil ciclasa , que, a su vez, cataliza la conversión de ATP en AMPc, aumentando directamente el nivel de AMPc. Cuatro moléculas de AMPc pueden unirse a las dos subunidades reguladoras. Esto se realiza mediante la unión de dos moléculas de AMPc a cada uno de los dos sitios de unión de AMPc (CNB-B y CNB-A), lo que induce un cambio conformacional en las subunidades reguladoras de PKA, lo que hace que las subunidades se desprendan y liberen las dos subunidades catalíticas, ahora activadas. [8]

Una vez liberadas de la subunidad reguladora inhibidora, las subunidades catalíticas pueden continuar fosforilando una serie de otras proteínas en el contexto de sustrato mínimo Arg-Arg-X-Ser/Thr., [9] aunque todavía están sujetas a otras capas de regulación, incluida la modulación por el inhibidor pseudosustrato termoestable de PKA, denominado PKI. [7] [10]

A continuación se muestra una lista de los pasos involucrados en la activación de PKA:

  1. El AMPc citosólico aumenta
  2. Dos moléculas de AMPc se unen a cada subunidad reguladora de PKA
  3. Las subunidades reguladoras se mueven fuera de los sitios activos de las subunidades catalíticas y el complejo R2C2 se disocia.
  4. Las subunidades catalíticas libres interactúan con las proteínas para fosforilar residuos de Ser o Thr.

Catálisis

Las subunidades catalíticas liberadas pueden entonces catalizar la transferencia de fosfatos terminales de ATP a sustratos proteicos en residuos de serina o treonina . Esta fosforilación generalmente da como resultado un cambio en la actividad del sustrato. Dado que las PKA están presentes en una variedad de células y actúan sobre diferentes sustratos, la regulación de la PKA y la regulación del AMPc están involucradas en muchas vías diferentes.

Los mecanismos de efectos adicionales pueden dividirse en fosforilación proteica directa y síntesis proteica:

Mecanismo de fosforilación

El residuo de serina/treonina del péptido sustrato está orientado de tal manera que el grupo hidroxilo se enfrenta al grupo gamma fosfato de la molécula de ATP unida. Tanto el sustrato, ATP, como dos iones Mg2+ forman contactos intensivos con la subunidad catalítica de PKA. En la conformación activa, la hélice C se compacta contra el lóbulo N-terminal y el residuo de aspartato del motivo DFG conservado forma quelatos con los iones Mg2+, lo que ayuda a posicionar el sustrato de ATP. El grupo trifosfato de ATP señala hacia afuera del bolsillo de adenosina para la transferencia de gamma fosfato a la serina/treonina del sustrato peptídico. Hay varios residuos conservados, incluidos el glutamato (E) 91 y la lisina (K) 72, que median el posicionamiento de los grupos alfa y beta fosfato. El grupo hidroxilo de la serina/treonina del sustrato peptídico ataca al grupo gamma fosfato en el fósforo a través de una reacción nucleofílica SN2, que da como resultado la transferencia del fosfato terminal al sustrato peptídico y la escisión del enlace fosfodiéster entre los grupos beta-fosfato y gamma-fosfato. La PKA actúa como un modelo para comprender la biología de la proteína quinasa , y la posición de los residuos conservados ayuda a distinguir los miembros activos de la proteína quinasa y los miembros inactivos de la pseudoquinasa del cinoma humano.

Inactivación

acampar

La regulación negativa de la proteína quinasa A se produce por un mecanismo de retroalimentación y utiliza una serie de enzimas fosfodiesterasas (PDE) hidrolizadoras de AMPc, que pertenecen a los sustratos activados por la PKA. La fosfodiesterasa convierte rápidamente el AMPc en AMP, reduciendo así la cantidad de AMPc que puede activar la proteína quinasa A. La PKA también está regulada por una serie compleja de eventos de fosforilación, que pueden incluir la modificación por autofosforilación y la fosforilación por quinasas reguladoras, como PDK1. [7]

Por lo tanto, la PKA está controlada, en parte, por los niveles de AMPc . Además, la subunidad catalítica en sí misma puede ser regulada a la baja por fosforilación.

Anclaje

El dímero de la subunidad reguladora de la PKA es importante para localizar la quinasa dentro de la célula. El dominio de dimerización y acoplamiento (D/D) del dímero se une al dominio de unión a la quinasa A (AKB) de la proteína de anclaje de la quinasa A (AKAP). Las AKAP localizan la PKA en varias ubicaciones (por ejemplo, membrana plasmática, mitocondrias, etc.) dentro de la célula.

Las AKAP se unen a muchas otras proteínas de señalización, creando un centro de señalización muy eficiente en una ubicación determinada dentro de la célula. Por ejemplo, una AKAP ubicada cerca del núcleo de una célula del músculo cardíaco se uniría tanto a la PKA como a la fosfodiesterasa (hidroliza el AMPc), lo que permite a la célula limitar la productividad de la PKA, ya que la subunidad catalítica se activa una vez que el AMPc se une a las subunidades reguladoras.

Función

La PKA fosforila proteínas que tienen expuesto el motivo Arginina-Arginina-X-Serina, lo que a su vez (des)activa las proteínas. Existen muchos sustratos posibles de la PKA; el NIH mantiene una lista de dichos sustratos . [11]

Como la expresión de proteínas varía de un tipo de célula a otro, las proteínas disponibles para la fosforilación dependerán de la célula en la que esté presente la PKA. Por lo tanto, los efectos de la activación de la PKA varían según el tipo de célula :

Tabla de descripción general

En adipocitos y hepatocitos

La epinefrina y el glucagón afectan la actividad de la proteína quinasa A al cambiar los niveles de AMPc en una célula a través del mecanismo de la proteína G, utilizando la adenilato ciclasa . La proteína quinasa A actúa para fosforilar muchas enzimas importantes en el metabolismo. Por ejemplo, la proteína quinasa A fosforila la acetil-CoA carboxilasa y la piruvato deshidrogenasa . Tal modificación covalente tiene un efecto inhibidor sobre estas enzimas, inhibiendo así la lipogénesis y promoviendo la gluconeogénesis neta . La insulina, por otro lado, disminuye el nivel de fosforilación de estas enzimas, lo que en cambio promueve la lipogénesis. Recordemos que la gluconeogénesis no ocurre en los miocitos.

En las neuronas del núcleo accumbens

La PKA ayuda a transferir/traducir la señal de dopamina a las células del núcleo accumbens , que media la recompensa, la motivación y la relevancia de la tarea . La gran mayoría de la percepción de la recompensa implica la activación neuronal en el núcleo accumbens, algunos ejemplos de los cuales incluyen el sexo, las drogas recreativas y la comida. La vía de transducción de señales de la proteína quinasa A ayuda a modular el consumo de etanol y sus efectos sedantes. Un estudio con ratones informa que los ratones con señalización de cAMP-PKA genéticamente reducida dan como resultado un menor consumo de etanol y son más sensibles a sus efectos sedantes. [18]

En el músculo esquelético

La PKA se dirige a ubicaciones subcelulares específicas después de unirse a las AKAP . El receptor de rianodina (RyR) se co-localiza con la AKAP muscular y la fosforilación de RyR y el eflujo de Ca 2+ se incrementa por la localización de la PKA en RyR por las AKAP. [19]

En el músculo cardíaco

En una cascada mediada por un receptor GPCR conocido como β 1 adrenérgico , activado por catecolaminas (en particular, noradrenalina ), la PKA se activa y fosforila numerosos objetivos, a saber: canales de calcio de tipo L , fosfolamban , troponina I , proteína C de unión a miosina y canales de potasio . Esto aumenta la inotropía y la lusitropía , aumentando la fuerza de contracción y permitiendo que los músculos se relajen más rápido. [20] [21]

En la formación de la memoria

La PKA siempre se ha considerado importante en la formación de la memoria . En la mosca de la fruta , las reducciones en la actividad de expresión de DCO (gen que codifica la subunidad catalítica de la PKA) pueden causar graves discapacidades de aprendizaje, memoria a medio plazo y memoria a corto plazo. La memoria a largo plazo depende del factor de transcripción CREB, regulado por la PKA. Un estudio realizado en drosophila informó que un aumento en la actividad de la PKA puede afectar la memoria a corto plazo. Sin embargo, una disminución de la actividad de la PKA del 24% inhibió las capacidades de aprendizaje y una disminución del 16% afectó tanto la capacidad de aprendizaje como la retención de la memoria. La formación de una memoria normal es muy sensible a los niveles de PKA. [22]

Véase también

Referencias

  1. ^ ab Turnham, Rigney E.; Scott, John D. (15 de febrero de 2016). "Isoforma PRKACA de la subunidad catalítica de la proteína quinasa A; Historia, función y fisiología". Gene . 577 (2): 101–108. doi :10.1016/j.gene.2015.11.052. PMC  4713328 . PMID  26687711.
  2. ^ Knighton, DR; Zheng, JH; Ten Eyck, LF; Xuong, NH; Taylor, SS; Sowadski, JM (26 de julio de 1991). "Estructura de un inhibidor peptídico unido a la subunidad catalítica de la proteína quinasa dependiente del monofosfato de adenosina cíclico". Science . 253 (5018): 414–420. Bibcode :1991Sci...253..414K. doi :10.1126/science.1862343. ISSN  0036-8075. PMID  1862343.
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Enlaces externos

Notas