Fue fundada en el 1607 a orillas del río James sobre una península (hoy la isla Jamestown), en el actual condado de James City de Virginia.Su fundación se produjo tras varios intentos ingleses fallidos previos, incluyendo la perdida Colonia de Roanoke, establecida en 1585 en la isla de Roanoke.Cuando hacían un reconocimiento de la costa, los indígenas se presentaron y los persiguieron hasta que regresaron a las naves.El siguiente invierno, una hambruna mató a 200 personas sobreviviendo solo 60 colonos.Posteriormente el fuerte de Jamestown fue abandonado para establecer el pueblo.
