Es conocido también como Girolamo del Crocifissaio por haberse especializado en sus inicios como pintor de crucifijos.Realizó su aprendizaje con Michele Tosini, cuyo estudio abandonó en 1556 para trabajar durante seis años en la decoración del Palazzo Vecchio dirigida por Vasari, parece que como diseñador de tapices.Después marchó a Roma durante dos años para completar su formación.En 1563 retornó a Florencia, donde se convirtió en miembro de la recién creada Accademia del Disegno.Macchietti pronto se hizo con un floreciente prestigio gracias a obras que ornaron algunas de las mayores iglesias florentinas (Adoración de los Reyes Magos en San Lorenzo o el Martirio de San Lorenzo en Santa Maria Novella).
