La obtención de ADN monohebra ha sido muy importante para las técnicas de secuenciación aunque en la actualidad se realizan igualmente con ADN bicatenario.
Así las aplicaciones del ADN monocatenario se concentran actualmente en su empleo como sondas y en ensayos de mutagénesis.
Generalmente se manejan como plásmidos, pudiendo crecerlos en gran cantidad como ADN bicatenario.
La proteína II del fago reconoce la "región intergénica" (origen de replicación de fago filamentoso) insertada en el plásmido, corta la hebra (+) y la replica en "círculo-rodante".
El ADN monohebra se recubre de proteínas y sale por extrusión (es un parásito celular, no un fago lítico) de la célula.