La diócesis de Margarita (en latín: Dioecesis Margaritensis) es una circunscripción eclesiástica de la Iglesia católica en Venezuela.

La diócesis tiene 1150 km² y extiende su jurisdicción sobre los fieles católicos de rito latino residentes en el estado Nueva Esparta, constituido por tres islas principales: Margarita, Coche y Cubagua y conformado por 11 municipios.

En El Valle del Espíritu Santo se halla la basílica de Nuestra Señora del Valle.

La diócesis fue erigida el 18 de julio de 1969 mediante la bula Verba Christi del papa Pablo VI, obteniendo el territorio de la diócesis de Cumaná (hoy arquidiócesis).

Según el Anuario Pontificio 2022 la diócesis tenía a fines de 2021 un total de 452 000 fieles bautizados.