La tinción de Ziehl-Neelsen , también conocida como tinción acidorresistente , es una técnica de tinción bacteriológica utilizada en citopatología y microbiología para identificar bacterias acidorresistentes bajo microscopía , particularmente miembros del género Mycobacterium . Este método de tinción fue introducido inicialmente por Paul Ehrlich (1854-1915) y posteriormente modificado por los bacteriólogos alemanes Franz Ziehl (1859-1926) y Friedrich Neelsen (1854-1898) a finales del siglo XIX.
El método de tinción ácido-alcohol resistente, junto con la tinción de auramina fenol , sirve como herramienta de diagnóstico estándar y es ampliamente accesible para diagnosticar rápidamente la tuberculosis (causada por Mycobacterium tuberculosis ) y otras enfermedades causadas por micobacterias atípicas , como la lepra (causada por Mycobacterium leprae ) e infección por Mycobacterium avium-intracelulare (causada por el complejo Mycobacterium avium ) en muestras como esputo , líquido de lavado gástrico y líquido de lavado broncoalveolar . Estas bacterias acidorresistentes poseen una capa exterior cerosa rica en lípidos que contiene altas concentraciones de ácido micólico , lo que las hace resistentes a técnicas de tinción convencionales como la tinción de Gram . [1] [2]
Después del procedimiento de tinción de Ziehl-Neelsen con carbolfucsina , las bacterias acidorresistentes se observan como bastones de color rojo o rosa intenso sobre un fondo azul o verde, según la contratinción específica utilizada, como azul de metileno o verde malaquita , respectivamente. La contratinción coloreará las bacterias no resistentes al ácido y otras estructuras celulares, lo que permitirá una clara diferenciación. [3]
En muestras de patología anatómica, la inmunohistoquímica y las modificaciones de la tinción de Ziehl-Neelsen (como la tinción de Fite-Faraco) tienen una utilidad diagnóstica comparable para identificar Mycobacterium . Ambos son superiores a la tinción tradicional de Ziehl-Neelsen. [4]
Las micobacterias son bacilos con forma de bastón de crecimiento lento , ligeramente curvados o rectos, y se consideran Gram positivos . Algunas micobacterias son saprófitos de vida libre , pero muchas son patógenos que causan enfermedades en animales y humanos. Mycobacterium bovis causa tuberculosis en el ganado. Dado que la tuberculosis puede transmitirse a los humanos, la leche se pasteuriza para matar cualquier bacteria. [5] Mycobacterium tuberculosis que causa la tuberculosis (TB) en humanos es una bacteria transmitida por el aire que generalmente infecta los pulmones humanos. [6] [7] Las pruebas de tuberculosis incluyen análisis de sangre, pruebas cutáneas y radiografías de tórax. [8] Cuando se examinan los frotis de tuberculosis, se tiñen con una tinción acidorresistente. Estos organismos ácido-alcohol resistentes como Mycobacterium contienen grandes cantidades de sustancias lipídicas dentro de sus paredes celulares llamadas ácidos micólicos. Estos ácidos resisten la tinción mediante métodos ordinarios como la tinción de Gram . [9] También se puede utilizar para teñir algunas otras bacterias, como Nocardia . Los reactivos utilizados para la tinción de Ziehl-Neelsen son carbolfucsina , alcohol ácido y azul de metileno . Los bacilos acidorresistentes adquieren un color rojo brillante después de la tinción.
La tinción de Ziehl-Neelsen es un tipo de tinción fúngica de espectro reducido. Las tinciones fúngicas de espectro reducido son selectivas y pueden ayudar a diferenciar e identificar hongos. [10] Los resultados de la tinción de Ziehl-Neelsen son variables porque muchas paredes celulares de hongos no son resistentes al ácido. [11] Un ejemplo de un tipo común de hongo ácido resistente que generalmente se tiñe con tinción de Ziehl-Neelsen se llama histoplasma (HP). [12] El histoplasma se encuentra en el suelo y en las heces de aves y murciélagos. [13] Los humanos pueden contraer histoplasmosis por inhalación de esporas de hongos. Histoplasma ingresa al cuerpo y llega a los pulmones donde las esporas se convierten en levadura. [14] La levadura ingresa al torrente sanguíneo y afecta los ganglios linfáticos y otras partes del cuerpo. Por lo general, las personas no se enferman al inhalar las esporas, pero si lo hacen, suelen tener síntomas parecidos a los de la gripe. [15] Otra variación de este método de tinción se utiliza en micología para teñir diferencialmente las incrustaciones acidorresistentes en las hifas cuticulares de ciertas especies de hongos del género Russula . [16] [17] Algunas endosporas libres pueden confundirse con pequeñas levaduras, por lo que se utiliza la tinción para identificar los hongos desconocidos. [18] También es útil en la identificación de algunos protozoos, a saber, Cryptosporidium e Isospora . La tinción de Ziehl-Neelsen también puede dificultar el diagnóstico en el caso de paragonimiasis porque la tinción puede disolver los óvulos en la muestra de esputo para óvulos y parásitos (O&P), y a menudo se usa en este entorno clínico porque los signos y síntomas de la paragonimiasis se parecen mucho Esos de
En 1882 Robert Koch descubrió la etiología de la tuberculosis. [19] Poco después del descubrimiento de Koch, Paul Ehrlich desarrolló una tinción para Mycobacterium tuberculosis, llamada tinción de hematoxilina de alumbre. [20] Franz Ziehl luego alteró la técnica de tinción de Ehrlich utilizando ácido carbólico como mordiente. Friedrich Neelsen mantuvo la elección de mordiente de Ziehl pero cambió el colorante principal a carbolfucsina. Las modificaciones de Ziehl y Neelsen juntas han desarrollado la tinción de Ziehl-Neelsen. Joseph Kinyoun desarrolló otra tinción acidorresistente utilizando la técnica de tinción de Ziehl-Neelsen pero eliminando el paso de calentamiento del procedimiento. Esta nueva tinción de Kinyoun recibió el nombre de tinción Kinyoun.
Un procedimiento típico de tinción AFB implica dejar caer las células en suspensión en un portaobjetos, luego secar el líquido al aire y fijar las células con calor. [21]
Los estudios han demostrado que una tinción de BAAR sin cultivo tiene un valor predictivo negativo deficiente. Se debe realizar un cultivo de BAAR junto con una tinción de BAAR; esto tiene un valor predictivo negativo mucho mayor.
El mecanismo de acción de la tinción de Ziehl-Neelsen no se comprende completamente, pero se cree que implica una reacción química entre los tintes ácidos y las paredes celulares de las bacterias . La acidez de los tintes hace que se unan más fuertemente a las paredes celulares de las bacterias que a otras células o tejidos . Esto da como resultado la tinción selectiva sólo de aquellas células que tienen una alta densidad de material de pared celular, como las bacterias acidorresistentes. [26]
La tinción de Ziehl-Neelsen es un proceso de tinción de dos pasos . En el primer paso, el tejido se tiñe con una solución básica de fucsina, que tiñe todas las células de rosa. En el segundo paso, el tejido se incuba en una solución de alcohol ácido, que decolora todas las células excepto las células acidorresistentes, que conservan el color y aparecen rojas. Los mecanismos por los cuales se produce este color no se comprenden bien, pero se cree que la interacción de la fucsina básica con los componentes de la pared celular de las bacterias crea una nueva molécula responsable del color. [27]
Medios relacionados con la tinción de Ziehl-Neelsen en Wikimedia Commons