stringtranslate.com

organoide

Organoide intestinal cultivado a partir de células madre Lgr5+

Un organoide es una versión miniaturizada y simplificada de un órgano producido in vitro en tres dimensiones que imita la complejidad funcional, estructural y biológica clave de ese órgano. [1] Se derivan de una o varias células de un tejido , células madre embrionarias o células madre pluripotentes inducidas , que pueden autoorganizarse en cultivos tridimensionales debido a sus capacidades de autorrenovación y diferenciación . La técnica para cultivar organoides ha mejorado rápidamente desde principios de la década de 2010, y The Scientist la considera uno de los mayores avances científicos de 2013. [2] Los científicos e ingenieros utilizan organoides para estudiar el desarrollo y las enfermedades en el laboratorio , el descubrimiento y el desarrollo de fármacos en industria, [3] diagnóstico y medicina personalizados, terapias genéticas y celulares, ingeniería de tejidos y medicina regenerativa.

Historia

Los intentos de crear órganos in vitro comenzaron con uno de los primeros experimentos de disociación-reagregación [4] donde Henry Van Peters Wilson demostró que las células esponjosas mecánicamente disociadas pueden reagregarse y autoorganizarse para generar un organismo completo. [5] En las décadas siguientes, varios laboratorios pudieron generar diferentes tipos de órganos [4] in vitro mediante la disociación y reagregación de tejidos de órganos obtenidos de anfibios [6] y polluelos embrionarios. [7] La ​​formación de las primeras colonias similares a tejidos in vitro se observó por primera vez mediante el cultivo conjunto de queratinocitos y fibroblastos 3T3. [8] El fenómeno de las células mecánicamente disociadas que se agregan y reorganizan para reformar el tejido del que se obtuvieron condujo posteriormente al desarrollo de la hipótesis de la adhesión diferencial por parte de Malcolm Steinberg . [4] Con la llegada del campo de la biología de las células madre , el potencial de las células madre para formar órganos in vitro se comprendió desde el principio con la observación de que cuando las células madre forman teratomas o cuerpos embrioides , las células diferenciadas pueden organizarse en diferentes estructuras que se asemejan los que se encuentran en múltiples tipos de tejidos . [4] La llegada del campo de los organoides comenzó con un cambio del cultivo y diferenciación de células madre en medios bidimensionales (2D) a medios tridimensionales (3D) para permitir el desarrollo de estructuras tridimensionales complejas de órganos. . [4] La utilización de métodos de medios de cultivo en medios 3D para la organización estructural fue posible gracias al desarrollo de matrices extracelulares (ECM). [9] A finales de la década de 1980, Bissell y sus colegas demostraron que un gel rico en laminina se puede utilizar como membrana basal para la diferenciación y morfogénesis en cultivos celulares de células epiteliales mamarias. [10] [11] Desde 1987, los investigadores han ideado diferentes métodos para el cultivo 3D y pudieron utilizar diferentes tipos de células madre para generar organoides que se asemejan a una multitud de órganos. [4] En la década de 1990, además de su papel en el apoyo físico, se informó el papel de los componentes de la ECM en la expresión génica mediante su interacción con vías de adhesión focal basadas en integrinas. [12] En 2006, Yaakov Nahmias y David Odde mostraron el autoensamblaje de vasosOrganoide hepático mantenido durante más de 50 días in vitro . [13] En 2008, Yoshiki Sasai y su equipo en el instituto RIKEN demostraron que las células madre pueden convertirse en bolas de células neuronales que se autoorganizan en capas distintivas. [14] En 2009, el laboratorio de Hans Clevers en el Instituto Hubrecht y el Centro Médico Universitario de Utrecht , Países Bajos, demostró que las células madre intestinales que expresan LGR5 se autoorganizan en estructuras de criptas y vellosidades in vitro sin necesidad de un nicho mesenquimal , lo que las convierte en las primeros organoides. [15] En 2010, Mathieu Unbekandt y Jamie A. Davies demostraron la producción de organoides renales a partir de células madre renogénicas derivadas de fetos murinos. [16] En 2014, Qun Wang y sus colaboradores diseñaron geles a base de colágeno I y laminina y biomateriales de espuma sintética para el cultivo y la administración de organoides intestinales [17] y encapsularon nanopartículas de oro funcionalizadas con ADN en organoides intestinales para formar un troyano intestinal. caballo para la administración de fármacos y terapia génica. [18] Informes posteriores mostraron una función fisiológica significativa de estos organoides in vitro [19] e in vivo . [20] [21]

Otros avances tempranos importantes incluyeron en 2013, Madeline Lancaster en el Instituto de Biotecnología Molecular de la Academia de Ciencias de Austria estableció un protocolo a partir de células madre pluripotentes para generar organoides cerebrales que imitan la organización celular del cerebro humano en desarrollo. [22] Meritxell Huch y Craig Dorrell del Instituto Hubrecht y del Centro Médico Universitario de Utrecht demostraron que las células Lgr5+ individuales del hígado de ratón dañado pueden expandirse clonalmente como organoides hepáticos en un medio de cultivo basado en Rspo1 durante varios meses. [23] En 2014, Artem Shkumatov et al. en la Universidad de Illinois en Urbana-Champaign demostraron que se pueden formar organoides cardiovasculares a partir de células ES mediante la modulación de la rigidez del sustrato al que se adhieren. La rigidez fisiológica promovió la tridimensionalidad de las EB y la diferenciación cardiomiogénica. [24] En 2015, Takebe et al. demostró un método generalizado para la formación de yemas de órganos a partir de diversos tejidos combinando progenitores específicos de tejido derivados de células madre pluripotentes o muestras de tejido relevantes con células endoteliales y células madre mesenquimales. Sugirieron que los tejidos menos maduros, o yemas de órganos, generados mediante el principio de condensación autoorganizada podrían ser el enfoque más eficiente hacia la reconstitución de las funciones de los órganos maduros después del trasplante, en lugar de los condensados ​​generados a partir de células en una etapa más avanzada. [25]

Propiedades

Lancaster y Knoblich [4] definen un organoide como una colección de tipos de células específicas de un órgano que se desarrolla a partir de células madre o progenitores de órganos, se autoorganiza mediante clasificación celular y compromiso de linaje espacialmente restringido de una manera similar a in vivo , y exhibe lo siguiente propiedades:

Proceso

La formación de organoides generalmente requiere cultivar células madre o células progenitoras en un medio 3D. [4] Las células madre tienen la capacidad de autorrenovarse y diferenciarse en varios subtipos de células, y permiten comprender los procesos de desarrollo y progresión de la enfermedad. [26] Por lo tanto, los organoides derivados de células madre permiten estudiar la biología y la fisiología a nivel de órganos. [27] El medio 3D se puede preparar utilizando un hidrogel de matriz extracelular como Matrigel o Cultrex BME, que es una matriz extracelular rica en laminina secretada por la línea tumoral Engelbreth-Holm-Swarm. [28] Luego se pueden crear cuerpos organoides mediante la incorporación de células madre en el medio 3D. [4] Cuando se utilizan células madre pluripotentes para la creación del organoide, generalmente, aunque no siempre, se permite que las células formen cuerpos embrioides . [4] Esos cuerpos embrioides luego se tratan farmacológicamente con factores de patrón para impulsar la formación de la identidad organoide deseada. [4] También se han creado organoides utilizando células madre adultas extraídas del órgano objetivo y cultivadas en medios 3D. [29]

Se han incorporado señales bioquímicas en cultivos de organoides 3D y, con la exposición de morfogenes, inhibidores de morfogenes o factores de crecimiento, se pueden desarrollar modelos organoides utilizando células madre embrionarias (ESC) o células madre adultas (ASC). Las técnicas de vascularización se pueden utilizar para incorporar microambientes fisiológicamente cercanos a sus contrapartes. Los sistemas vasculares que pueden facilitar oxígeno o nutrientes a la masa interna de organoides se pueden lograr a través de sistemas de microfluidos, sistemas de administración de factor de crecimiento endotelial vascular y módulos recubiertos de células endoteliales. [9] Con células madre pluripotentes inducidas (iPSC) derivadas de pacientes [30] y tecnologías de edición del genoma basadas en CRISPR/Cas [31] , se pueden generar células madre pluripotentes (PSC) mutadas o editadas con genoma con señales de señalización alteradas para controlar Señales intrínsecas dentro de los organoides.

Tipos

Se han recapitulado multitud de estructuras de órganos utilizando organoides. [4] Esta sección tiene como objetivo describir el estado del campo a partir de ahora proporcionando una lista abreviada de los organoides que se han creado con éxito, junto con un breve resumen basado en la literatura más reciente para cada organoide y ejemplos de cómo ha sido utilizado en investigaciones.

organoide cerebral

Un organoide cerebral describe órganos en miniatura cultivados artificialmente, in vitro , que se asemejan al cerebro . Los organoides cerebrales se crean mediante el cultivo de células madre pluripotentes humanas en una estructura tridimensional utilizando un biorreactor rotacional y se desarrollan en el transcurso de meses. [22] El procedimiento tiene aplicaciones potenciales en el estudio del desarrollo, la fisiología y la función del cerebro. Los organoides cerebrales pueden experimentar "sensaciones simples" en respuesta a la estimulación externa y los neurocientíficos se encuentran entre los que expresan preocupación de que dichos órganos puedan desarrollar sensibilidad . Proponen que una mayor evolución de la técnica debe estar sujeta a un riguroso procedimiento de supervisión. [32] [33] [34] En 2023, los investigadores construyeron una biocomputadora híbrida que combina organoides cerebrales humanos cultivados en laboratorio con circuitos convencionales y puede completar tareas como el reconocimiento de voz. [35] Los organoides cerebrales se están utilizando actualmente para investigar y desarrollar tecnologías de inteligencia organoide (OI) . [36]

organoide gastrointestinal

Los organoides gastrointestinales se refieren a organoides que recapitulan estructuras del tracto gastrointestinal . El tracto gastrointestinal surge del endodermo , que durante el desarrollo forma un tubo que puede dividirse en tres regiones distintas, que dan origen, junto con otros órganos, a las siguientes secciones del tracto gastrointestinal: [4]

  1. El intestino anterior da origen a la cavidad bucal y al estómago.
  2. El intestino medio da origen al intestino delgado y al colon ascendente.
  3. El intestino posterior da origen al recto y al resto del colon.

Se han creado organoides para las siguientes estructuras del tracto gastrointestinal:

organoide intestinal

Hasta ahora, los organoides intestinales [15] se encuentran entre los organoides intestinales generados directamente a partir de tejidos intestinales o células madre pluripotentes. [4] Una forma en que las células madre pluripotentes humanas pueden ser impulsadas a formar organoides intestinales es mediante la aplicación primero de activina A para conducir a las células a una identidad mesoendodérmica, seguida de la regulación positiva farmacológica de las vías de señalización Wnt3a y Fgf4 , como se ha demostrado que promover el destino intestinal posterior. [4] También se han generado organoides intestinales a partir de células madre intestinales, extraídas de tejido adulto y cultivadas en medios 3D. [29] Estos organoides derivados de células madre adultas a menudo se denominan enteroides o colonoides, según su segmento de origen, y se han establecido tanto en el intestino humano como en el murino. [15] [37] [38] Los organoides intestinales consisten en una sola capa de células epiteliales intestinales polarizadas que rodean una luz central. Como tal, recapitula la estructura de criptas y vellosidades del intestino, recapitulando su función, fisiología y organización, y manteniendo todos los tipos de células que se encuentran normalmente en la estructura, incluidas las células madre intestinales. [4] Por lo tanto, los organoides intestinales son un modelo valioso para estudiar el transporte intestinal de nutrientes, [39] [40] la absorción y administración de fármacos, [41] [42] los nanomateriales y la nanomedicina, [43] [44] la secreción de la hormona incretina, [45 ] [46] e infección por diversos enteropatógenos. [47] [48] Por ejemplo, el equipo de Qun Wang diseñó racionalmente nanopartículas de virus artificiales como vehículos de administración de fármacos orales (ODDV) con modelos de mucosa intestinal derivados de organoides [49] y demostró un nuevo concepto de uso de organoides de colon recientemente establecidos como herramientas para alta -Detección de fármacos de rendimiento, pruebas de toxicidad y desarrollo de fármacos orales. [50] Los organoides intestinales también recapitulan la estructura de las criptas y las vellosidades con un grado de fidelidad tan alto que se han trasplantado con éxito a intestinos de ratones y, por lo tanto, se los considera un modelo valioso para la investigación. [4] Uno de los campos de investigación en los que se han utilizado los organoides intestinales es el del nicho de células madre. Se utilizaron organoides intestinales para estudiar la naturaleza del nicho de células madre intestinales , y la investigación realizada con ellos demostró el papel positivo que tiene la IL-22 en el mantenimiento de las células madre intestinales, [51]además de demostrar las funciones de otros tipos de células como neuronas y fibroblastos en el mantenimiento de las células madre intestinales. [29] En el campo de la biología de las infecciones, se han explorado diferentes sistemas modelo basados ​​en organoides intestinales. Por un lado, los organoides pueden infectarse en masa simplemente mezclándolos con el enteropatógeno de interés. [52] Sin embargo, para modelar la infección a través de una ruta más natural a partir de la luz intestinal, se requiere una microinyección del patógeno . [53] [54] Además, la polaridad de los organoides intestinales se puede invertir, [55] e incluso se pueden disociar en células individuales y cultivar como monocapas 2D [56] [57] para formar tanto el apical como el basolateral. lados del epitelio más fácilmente accesibles. Los organoides intestinales también han demostrado potencial terapéutico. [58]

Un organoide intestinal (Minigut) crece en 7 días. Las barras de escala son de 200 μm.

Para recapitular con mayor precisión el intestino in vivo , se han desarrollado cocultivos de organoides intestinales y células inmunes . [57] Además, los modelos de órgano en un chip combinan organoides intestinales con otros tipos de células, como células endoteliales o inmunes, así como flujo peristáltico . [59] [60]

organoide gástrico

Los organoides gástricos recapitulan al menos en parte la fisiología del estómago . Los organoides gástricos se han generado directamente a partir de células madre pluripotentes mediante la manipulación temporal de las vías de señalización de FGF , WNT , BMP , ácido retinoico y EGF en condiciones de cultivo tridimensionales. [61] También se han generado organoides gástricos utilizando LGR5 que expresa células madre adultas del estómago . [62] Los organoides gástricos se han utilizado como modelo para el estudio del cáncer [63] [64] junto con las enfermedades humanas [61] y el desarrollo. [61] Por ejemplo, un estudio [64] investigó las alteraciones genéticas subyacentes detrás de la población de tumores metastásicos de un paciente e identificó que, a diferencia del tumor primario del paciente, la metástasis tenía ambos alelos del gen TGFBR2 mutados. Para evaluar más a fondo el papel de TGFBR2 en la metástasis, los investigadores crearon organoides donde se anula la expresión de TGFBR2, a través de los cuales pudieron demostrar que la actividad reducida de TGFBR2 conduce a la invasión y metástasis de tumores cancerosos tanto in vitro como in vivo .

organoide lingual

Los organoides linguales son organoides que recapitulan, al menos en parte, aspectos de la fisiología de la lengua. Se han generado organoides linguales epiteliales utilizando BMI1 que expresa células madre epiteliales en condiciones de cultivo tridimensionales mediante la manipulación de EGF , WNT y TGF-β . [65] Sin embargo, este cultivo organoide carece de receptores gustativos , ya que estas células no surgen de Bmi1 que expresa células madre epiteliales. [65] Sin embargo, los organoides de las papilas gustativas linguales que contienen células gustativas se han creado utilizando células madre/progenitoras LGR5 + o CD44 + del tejido de la papila circunvalada (CV). [66] Estos organoides de papilas gustativas se han creado con éxito directamente a partir de células madre/progenitoras gustativas aisladas que expresan Lgr5 o LGR6 . [67] e indirectamente, a través del aislamiento, digestión y posterior cultivo de tejido CV que contiene células madre/progenitoras Lgr5+ o CD44+. [66]

Otro

Los organoides tímicos recapitulan al menos en parte la arquitectura y la funcionalidad del nicho de células madre del timo , [70] que es un órgano linfoide donde maduran las células T. Los organoides tímicos se han generado mediante la siembra de células del estroma tímico en cultivo tridimensional. [70] Los organoides tímicos parecen recapitular con éxito la función del timo, ya que el cocultivo de células madre hematopoyéticas o de médula ósea humanas con organoides tímicos de ratón dio como resultado la producción de células T. [70]
Los avances recientes en placas de microtitulación repelentes de células han permitido la detección rápida y rentable de bibliotecas similares a fármacos de moléculas pequeñas y grandes frente a modelos 3D de cáncer de páncreas. Estos modelos son consistentes en fenotipo y perfiles de expresión con los encontrados en el laboratorio del Dr. David Tuveson .

Ahora se pueden lograr fácilmente modelos organoides 3D de cáncer cerebral derivados de explantes derivados de pacientes (PDX) o directamente de tejido canceroso y permiten una detección de alto rendimiento de estos tumores frente al panel actual de medicamentos aprobados en todo el mundo.

Los agregados celulares autoensamblados que consisten en BMEC, astrocitos y pericitos están surgiendo como una alternativa potencial a los modelos transwell y microfluídicos para ciertas aplicaciones. Estos organoides pueden generar muchas características de la BHE, como la expresión de uniones estrechas, transportadores moleculares y bombas de eflujo de fármacos y, por lo tanto, pueden usarse para modelar el transporte de fármacos a través de la BHE. Además, pueden servir como modelo para evaluar las interacciones entre la BHE y el tejido cerebral adyacente y proporcionar una plataforma para comprender las capacidades combinadas de un nuevo fármaco para superar la BHE y su efecto sobre el tejido cerebral. Además, estos modelos son altamente escalables y más fáciles de fabricar y operar que los dispositivos de microfluidos. Sin embargo, tienen una capacidad limitada para reconstruir la morfología y fisiología de la BHE y no pueden simular el flujo fisiológico ni el esfuerzo cortante .

Investigación básica

Los organoides permiten estudiar cómo interactúan las células entre sí en un órgano, su interacción con su entorno, cómo les afectan las enfermedades y el efecto de los fármacos. El cultivo in vitro hace que este sistema sea fácil de manipular y facilita su seguimiento. Si bien los órganos son difíciles de cultivar porque su tamaño limita la penetración de nutrientes, el pequeño tamaño de los organoides limita este problema. Por otro lado, no presentan todas las características de los órganos y las interacciones con otros órganos no se recapitulan in vitro . Si bien la investigación sobre las células madre y la regulación de su capacidad fue el primer campo de aplicación de los organoides intestinales, [15] ahora también se utilizan para estudiar, por ejemplo, la absorción de nutrientes, el transporte de fármacos y la secreción de hormonas incretinas . [101] Esto es de gran relevancia en el contexto de las enfermedades de malabsorción , así como de las enfermedades metabólicas como la obesidad , la resistencia a la insulina y la diabetes .

Modelos de enfermedad

Los organoides brindan la oportunidad de crear modelos celulares de enfermedades humanas, que pueden estudiarse en el laboratorio para comprender mejor las causas de las enfermedades e identificar posibles tratamientos. El poder de los organoides a este respecto se demostró por primera vez en una forma genética de microcefalia , en la que se utilizaban células de pacientes para producir organoides cerebrales , que eran más pequeños y mostraban anomalías en la generación temprana de neuronas. [22] En otro ejemplo, el sistema de edición del genoma llamado CRISPR se aplicó a células madre pluripotentes humanas para introducir mutaciones específicas en genes relevantes para dos enfermedades renales diferentes, la poliquistosis renal y la glomeruloesclerosis focal y segmentaria . [82] Estas células madre pluripotentes modificadas con CRISPR se cultivaron posteriormente en organoides de riñón humano, que exhibieron fenotipos específicos de la enfermedad. Los organoides renales de células madre con mutaciones en la enfermedad renal poliquística formaron estructuras quísticas grandes y translúcidas a partir de los túbulos renales. Cuando se cultivaron en ausencia de señales adherentes (en suspensión), estos quistes alcanzaron tamaños de 1 cm de diámetro durante varios meses. [102] Los organoides renales con mutaciones en un gen vinculado a la glomeruloesclerosis focal y segmentaria desarrollaron defectos de unión entre los podocitos, las células filtrantes afectadas en esa enfermedad. [103] Es importante destacar que estos fenotipos de enfermedades estaban ausentes en los organoides de control con antecedentes genéticos idénticos, pero que carecían de las mutaciones CRISPR. [82] [102] [103] La comparación de estos fenotipos organoides con tejidos enfermos de ratones y humanos sugirió similitudes con defectos en el desarrollo temprano. [102] [103]

Como lo desarrollaron por primera vez Takahashi y Yamanaka en 2007, las células madre pluripotentes inducidas (iPSC) también pueden reprogramarse a partir de fibroblastos de la piel de los pacientes. [104] Estas células madre contienen los antecedentes genéticos exactos del paciente, incluidas cualquier mutación genética que pueda contribuir al desarrollo de enfermedades humanas. La diferenciación de estas células en organoides renales se ha realizado en pacientes con síndrome de Lowe debido a mutaciones en ORCL1 . [105] Este informe comparó los organoides renales diferenciados de las iPSC del paciente con las iPSC de control no relacionadas y demostró una incapacidad de las células renales del paciente para movilizar el factor de transcripción SIX2 del complejo de Golgi . [105] Debido a que SIX2 es un marcador bien caracterizado de células progenitoras de nefrona en el mesénquima de la tapa , los autores concluyeron que la enfermedad renal que se observa con frecuencia en el síndrome de Lowe (insuficiencia global de la reabsorción del túbulo proximal o síndrome de Fanconi renal ) podría estar relacionada con una alteración en el patrón de nefrona. que surgen de células progenitoras de nefrona que carecen de esta importante expresión del gen SIX2 . [105]

Otros estudios han utilizado la edición de genes CRISPR para corregir la mutación del paciente en las células iPSC del paciente para crear un control isogénico , que se puede realizar simultáneamente con la reprogramación de iPSC. [106] [107] [108] La comparación de un organoide derivado de iPSC de un paciente con un control isogénico es el estándar de oro actual en este campo, ya que permite el aislamiento de la mutación de interés como la única variable dentro del modelo experimental. [109] En uno de esos informes, los organoides renales derivados de iPSC de un paciente con síndrome de Mainzer-Saldino debido a mutaciones heterocigotas compuestas en IFT140 se compararon con un organoide de control isogénico en el que se detectó una variante de IFT140 que daba lugar a una transcripción de ARNm no viable. corregido por CRISPR. [107] Los organoides renales de los pacientes demostraron una morfología ciliar anormal consistente con los modelos animales existentes que fueron rescatados a una morfología de tipo salvaje en los organoides corregidos genéticamente. [107] El perfil transcripcional comparativo de células epiteliales purificadas de organoides de pacientes y de control destacó las vías involucradas en la polaridad celular , las uniones célula-célula y el ensamblaje motor de dineína , algunas de las cuales habían sido implicadas en otros genotipos dentro de la familia fenotípica de ciliopatías renales. [107] Otro informe que utilizó un control isogénico demostró una localización anormal de nefrina en los glomérulos de organoides renales generados a partir de un paciente con síndrome nefrótico congénito . [108]

También se pueden modelar aspectos como el metabolismo epitelial. [110]

Medicina personalizada

Los organoides intestinales cultivados a partir de biopsias rectales utilizando protocolos de cultivo establecidos por el grupo Clevers se han utilizado para modelar la fibrosis quística , [111] y condujeron a la primera aplicación de organoides para un tratamiento personalizado. [112] La fibrosis quística es una enfermedad hereditaria causada por mutaciones genéticas del gen regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística que codifica un canal iónico epitelial necesario para la salud de los fluidos de la superficie epitelial. Estudios realizados por el laboratorio de Jeffrey Beekman (Hospital Infantil Wilhelmina, Centro Médico Universitario de Utrecht, Países Bajos) describieron en 2013 que la estimulación de los organoides colorrectales con agonistas que aumentan el AMPc, como la forskolina o la toxina del cólera, inducía una rápida inflamación de los organoides de una manera totalmente dependiente del CFTR. . [111] Mientras que los organoides de sujetos sin fibrosis quística se hinchan en respuesta a la forskolina como consecuencia del transporte de líquido hacia la luz de los organoides, esto está muy reducido o ausente en los organoides derivados de personas con fibrosis quística. La hinchazón podría restaurarse mediante tratamientos que reparen la proteína CFTR (moduladores de CFTR), lo que indica que las respuestas individuales a la terapia de modulación de CFTR podrían cuantificarse en un entorno de laboratorio preclínico. Schwank et al. También demostró que el fenotipo organoide de la fibrosis quística intestinal podría repararse mediante la edición del gen CRISPR-Cas9 en 2013. [113]

Los estudios de seguimiento de Dekkers et al. en 2016 reveló que las diferencias cuantitativas en la inflamación inducida por forskolina entre organoides intestinales derivados de personas con fibrosis quística se asocian con marcadores de diagnóstico y pronóstico conocidos, como mutaciones del gen CFTR o biomarcadores in vivo de la función CFTR. [112] Además, los autores demostraron que las respuestas del modulador de CFTR en organoides intestinales con mutaciones específicas de CFTR se correlacionaban con los datos de ensayos clínicos publicados de estos tratamientos. Esto llevó a estudios preclínicos en los que se descubrió que los organoides de pacientes con mutaciones de CFTR extremadamente raras para quienes no se registró ningún tratamiento respondían fuertemente a un modulador de CFTR clínicamente disponible. El beneficio clínico sugerido del tratamiento para estos sujetos basado en la prueba preclínica de organoides fue confirmado posteriormente tras la introducción clínica del tratamiento por miembros del centro clínico de FQ bajo la supervisión de Kors van der Ent (Departamento de Neumología Pediátrica, Hospital Infantil Wilhelmina, Centro Médico Universitario Utrecht, Países Bajos). Estos estudios muestran por primera vez que los organoides se pueden utilizar para la adaptación individual de terapias o medicina personalizada .

Trasplantes de organoides

El primer trasplante exitoso de un organoide a un ser humano, un paciente con colitis ulcerosa cuyas células se utilizaron para el organoide, se llevó a cabo en 2022. [114] [115]

Como modelo para la biología del desarrollo.

Los organoides ofrecen a los investigadores un modelo excepcional para estudiar la biología del desarrollo . [116] Desde la identificación de las células madre pluripotentes , ha habido grandes avances en la dirección del destino de las células madre pluripotentes in vitro utilizando cultivos 2D. [116] Estos avances en la dirección del destino de PSC, junto con los avances en las técnicas de cultivo 3D, permitieron la creación de organoides que recapitulan las propiedades de varias subregiones específicas de una multitud de órganos. [116] Por lo tanto, el uso de estos organoides ha contribuido en gran medida a ampliar nuestra comprensión de los procesos de organogénesis y el campo de la biología del desarrollo. [116] En el desarrollo del sistema nervioso central , por ejemplo, los organoides han contribuido a nuestra comprensión de las fuerzas físicas que subyacen a la formación de la copa retiniana. [116] [117] Un trabajo más reciente ha ampliado ampliamente los períodos de crecimiento de los organoides corticales y, a casi un año, en condiciones de diferenciación específicas, los organoides persisten y tienen algunas características de las etapas de desarrollo fetal humano. [118]

Ver también

Referencias

  1. ^ Zhao Z, Chen X, Dowbaj AM, Sljukic A, Bratlie K, Lin L, Fong ELS, Balachander GM, Chen Z, Soragni A, Huch M, Zeng YA, Wang Q, Yu H. Organoids. Nature Reviews Methods Primers 2, 94 (2022). https://doi.org/10.1038/s43586-022-00174-y
  2. ^ Grens K (24 de diciembre de 2013). "Los grandes avances científicos de 2013". El científico . Consultado el 26 de diciembre de 2013 .
  3. ^ Hans inteligentes, Asher Mullard. Los miniórganos atraen a las grandes farmacéuticas. Nature Reviews Drug Discovery (16 de febrero de 2023). https://doi.org/10.1038/d41573-023-00030-y
  4. ^ abcdefghijklmnopq Lancaster MA, Knoblich JA (julio de 2014). "Organogénesis en un plato: modelado del desarrollo y la enfermedad utilizando tecnologías organoides". Ciencia . 345 (6194): 1247125. doi : 10.1126/science.1247125. PMID  25035496. S2CID  16105729.
  5. ^ Wilson HV (junio de 1907). "Un nuevo método mediante el cual se pueden criar esponjas artificialmente". Ciencia . 25 (649): 912–5. Código Bib : 1907 Ciencia.... 25.. 912W. doi : 10.1126/ciencia.25.649.912. PMID  17842577.
  6. ^ Holtfreter J (1944). "Estudios experimentales sobre el desarrollo del pronefros". Rev. Can. Biol . 3 : 220–250.
  7. ^ Weiss P, Taylor AC (septiembre de 1960). "Reconstitución de órganos completos a partir de suspensiones unicelulares de embriones de pollo en estados avanzados de diferenciación". Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América . 46 (9): 1177–85. Código bibliográfico : 1960PNAS...46.1177W. doi : 10.1073/pnas.46.9.1177 . PMC 223021 . PMID  16590731. 
  8. ^ Rheinwald, James G.; Verde, Howard (noviembre de 1975). "Formación de un epitelio queratinizante en cultivo mediante una línea celular clonada derivada de un teratoma". Celúla . 6 (3): 317–330. doi :10.1016/0092-8674(75)90183-x. ISSN  0092-8674. PMID  1052770. S2CID  28185779.
  9. ^ ab Yi, Sang Ah; Zhang, Yixiao; Rathnam, Christopher; Pongkulapa, Thanapat; Lee, Ki-Bum (noviembre de 2021). "Enfoques de bioingeniería para la investigación avanzada de organoides". Materiales avanzados . 33 (45): e2007949. Código Bib : 2021AdM....3307949Y. doi :10.1002/adma.202007949. ISSN  0935-9648. PMC 8682947 . PMID  34561899. 
  10. ^ Li, ML; Aggeler, J; Farson, DA; Hatier, C; Hassell, J; Bissell, MJ (enero de 1987). "Influencia de una membrana basal reconstituida y sus componentes sobre la expresión y secreción del gen de la caseína en células epiteliales mamarias de ratón". Procedimientos de la Academia Nacional de Ciencias . 84 (1): 136-140. Código bibliográfico : 1987PNAS...84..136L. doi : 10.1073/pnas.84.1.136 . ISSN  0027-8424. PMC 304157 . PMID  3467345. 
  11. ^ Barcellos-Hoff, MH; Aggeler, J.; Ram, TG; Bissell, MJ (1 de febrero de 1989). "Diferenciación funcional y morfogénesis alveolar de cultivos mamarios primarios sobre membrana basal reconstituida". Desarrollo . 105 (2): 223–235. doi :10.1242/dev.105.2.223. ISSN  0950-1991. PMC 2948482 . PMID  2806122. 
  12. ^ Streuli, CH; Schmidhauser, C; Bailey, N; Yurchenco, P; Skubitz, AP; Roskelley, C; Bissell, MJ (1 de mayo de 1995). "La laminina media la expresión de genes específicos de tejido en el epitelio mamario". La revista de biología celular . 129 (3): 591–603. doi :10.1083/jcb.129.3.591. ISSN  0021-9525. PMC 2120432 . PMID  7730398. 
  13. ^ Nahmias Y, Schwartz RE, Hu WS, Verfaillie CM, Odde DJ (junio de 2006). "Reclutamiento de hepatocitos mediado por endotelio en el establecimiento de tejido similar al hígado in vitro". Ingeniería de tejidos . 12 (6): 1627–38. doi :10.1089/diez.2006.12.1627. PMID  16846358.
  14. ^ Yong E (28 de agosto de 2013). "Cerebros modelo cultivados en laboratorio". El científico . Consultado el 26 de diciembre de 2013 .
  15. ^ abcde Sato T, Vries RG, Snippert HJ, van de Wetering M, Barker N, Stange DE, et al. (mayo de 2009). "Las células madre Lgr5 individuales construyen estructuras de criptas y vellosidades in vitro sin un nicho mesenquimatoso". Naturaleza . 459 (7244): 262–5. Código Bib :2009Natur.459..262S. doi : 10.1038/naturaleza07935. PMID  19329995. S2CID  4373784.
  16. ^ ab Unbekandt M, Davies JA (marzo de 2010). "La disociación de los riñones embrionarios seguida de su reagregación permite la formación de tejidos renales". Riñón Internacional . 77 (5): 407–16. doi : 10.1038/ki.2009.482 . PMID  20016472.
  17. ^ Peng H, Poovaiah N, Forrester M, Cochran E, Wang Q. Cultivo ex vivo de células madre intestinales primarias en espumas y geles de colágeno. ACS Ciencia e ingeniería de biomateriales. 2 de diciembre de 2014; 1 (1): 37–42. https://doi.org/10.1021/ab500041d. PMID: 33435081.
  18. ^ Peng H, Wang C, Xu X, Yu C, Wang Q. Un caballo de Troya intestinal para la entrega de genes. Nanoescala. 6 de enero de 2015; 7 (10): 4354–4360. https://doi.org/10.1039/C4NR06377E. PMID: 25619169.
  19. ^ Lawrence ML, Chang CH, Davies JA (marzo de 2015). "Transporte de aniones y cationes orgánicos en el desarrollo de riñones embrionarios murinos y en riñones diseñados reagregados en serie". Informes científicos . 5 : 9092. Código Bib : 2015NatSR...5E9092L. doi :10.1038/srep09092. PMC 4357899 . PMID  25766625. 
  20. ^ Xinaris C, Benedetti V, Rizzo P, Abbate M, Corna D, Azzollini N, et al. (Noviembre 2012). "Maduración in vivo de organoides renales funcionales formados a partir de suspensiones de células embrionarias". Revista de la Sociedad Estadounidense de Nefrología . 23 (11): 1857–68. doi :10.1681/ASN.2012050505. PMC 3482737 . PMID  23085631. 
  21. ^ Yui, S., Nakamura, T., Sato, T. et al. Injerto funcional de epitelio de colon expandido in vitro a partir de una única célula madre adulta Lgr5+. Medicina de la naturaleza 18, 618–623 (2012). https://doi.org/10.1038/nm.2695
  22. ^ abc Lancaster MA, Renner M, Martin CA, Wenzel D, Bicknell LS, Hurles ME, et al. (Septiembre 2013). "Los organoides cerebrales modelan el desarrollo del cerebro humano y la microcefalia". Naturaleza . 501 (7467): 373–9. Código Bib :2013Natur.501..373L. doi : 10.1038/naturaleza12517. PMC 3817409 . PMID  23995685. 
  23. ^ Huch, M., Dorrell, C., Boj, S. et al. Expansión in vitro de células madre hepáticas Lgr5+ individuales inducidas por regeneración impulsada por Wnt. Naturaleza 494, 247–250 (2013). https://doi.org/10.1038/nature11826
  24. ^ Shkumatov A, Baek K, Kong H (2014). "Formación de organoides cardiovasculares modulada por rigidez de la matriz a partir de cuerpos embrioides". MÁS UNO . 9 (4): e94764. Código Bib : 2014PLoSO...994764S. doi : 10.1371/journal.pone.0094764 . PMC 3986240 . PMID  24732893. 
  25. ^ Takebe T, Enomura M, Yoshizawa E, Kimura M, Koike H, Ueno Y, et al. (mayo de 2015). "Yemas de órganos complejas y vascularizadas de diversos tejidos mediante condensación impulsada por células mesenquimales". Célula madre celular . 16 (5): 556–65. doi : 10.1016/j.stem.2015.03.004 . PMID  25891906.
  26. ^ Murry, Charles E.; Keller, Gordon (febrero de 2008). "Diferenciación de células madre embrionarias en poblaciones clínicamente relevantes: lecciones del desarrollo embrionario". Celúla . 132 (4): 661–680. doi : 10.1016/j.cell.2008.02.008 . ISSN  0092-8674. PMID  18295582.
  27. ^ Choudhury, Deepak; Ashok, aswathi; Naing, May Win (marzo de 2020). "Comercialización de Organoides". Tendencias en Medicina Molecular . 26 (3): 245–249. doi :10.1016/j.molmed.2019.12.002. ISSN  1471-4914. PMID  31982341. S2CID  210922708.
  28. ^ Li ML, Aggeler J, Farson DA, Hatier C, Hassell J, Bissell MJ (enero de 1987). "Influencia de una membrana basal reconstituida y sus componentes sobre la expresión y secreción del gen de la caseína en células epiteliales mamarias de ratón". Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América . 84 (1): 136–40. Código bibliográfico : 1987PNAS...84..136L. doi : 10.1073/pnas.84.1.136 . PMC 304157 . PMID  3467345. 
  29. ^ abc Pastuła A, Middelhoff M, Brandtner A, Tobiasch M, Höhl B, Nuber AH, et al. (2016). "Cultivo de organoides gastrointestinales tridimensionales en combinación con nervios o fibroblastos: un método para caracterizar el nicho de células madre gastrointestinales". Células Madre Internacional . 2016 : 3710836. doi : 10.1155/2016/3710836 . PMC 4677245 . PMID  26697073. 
  30. ^ Takahashi, Kazutoshi; Yamanaka, Shinya (agosto de 2006). "Inducción de células madre pluripotentes a partir de cultivos de fibroblastos adultos y embrionarios de ratón mediante factores definidos". Celúla . 126 (4): 663–676. doi :10.1016/j.cell.2006.07.024. hdl : 2433/159777 . ISSN  0092-8674. PMID  16904174.
  31. ^ Corrió, F Ann; Hsu, Patrick D; Wright, Jason; Agarwala, Vineeta; Scott, David A; Zhang, Feng (24 de octubre de 2013). "Ingeniería del genoma mediante el sistema CRISPR-Cas9". Protocolos de la Naturaleza . 8 (11): 2281–2308. doi :10.1038/nprot.2013.143. ISSN  1754-2189. PMC 3969860 . PMID  24157548. 
  32. ^ Lavazza A, Massimini M (septiembre de 2018). "Organoides cerebrales: cuestiones éticas y evaluación de la conciencia". Revista de Ética Médica . 44 (9): 606–610. doi : 10.1136/medethics-2017-104555 . PMID  29491041.
  33. ^ Prosser Scully, Ruby (6 de julio de 2019). "Los cerebros en miniatura cultivados en el laboratorio tienen una actividad neuronal similar a la humana". Científico nuevo . N° 3237.
  34. ^ Muestra, Ian (21 de octubre de 2019). "Los científicos 'pueden haber cruzado la línea ética' al desarrollar cerebros humanos". El guardián . pag. 15.
  35. ^ Cai, H., Ao, Z., Tian, ​​C. et al. Computación del reservorio de organoides cerebrales para inteligencia artificial. Nat Electron (2023). https://doi.org/10.1038/s41928-023-01069-w.
  36. ^ Smirnova L, Caffo BS, Gracias DH, Huang Q, Morales Pantoja IE, Tang B, Zack DJ, Berlinicke CA, Boyd JL, Harris TD, Johnson EC, Kagan BJ, Kahn J, Muotri AR, Paulhamus BL, Schwamborn JC, Plotkin J, Szalay AS, Vogelstein JT, Worley PF y Hartung T. Inteligencia organoide (OI): la nueva frontera en biocomputación e inteligencia en un plato. Ciencia frontal (2023) 1:1017235. https://doi.org/10.3389/fsci.2023.1017235.
  37. ^ Sato, Toshiro; Extraño, Daniel E.; Ferrante, Marc; Vries, Robert GJ; van Es, Johan H.; van den Brink, Stieneke; van Houdt, Winan J.; Pronk, Apolo; van Gorp, Joost; Siersema, Peter D.; Inteligentes, Hans (noviembre de 2011). "Expansión a largo plazo de organoides epiteliales del colon humano, adenoma, adenocarcinoma y epitelio de Barrett". Gastroenterología . 141 (5): 1762-1772. doi : 10.1053/j.gastro.2011.07.050 . ISSN  0016-5085. PMID  21889923.
  38. ^ Jung, Pedro; Sato, Toshiro; Merlos-Suárez, Anna; Barriga, Francisco M; Iglesias, Mar; Rossell, David; Auer, Herbert; Gallardo, Mercedes; Blasco, María A; Sancho, Elena; Inteligentes, Hans (octubre de 2011). "Aislamiento y expansión in vitro de células madre de colon humano". Medicina de la Naturaleza . 17 (10): 1225-1227. doi :10.1038/nm.2470. ISSN  1078-8956. PMID  21892181. S2CID  205388154.
  39. ^ Cai T, Qi Y, Jergens A, Wannemuehler M, Barrett TA, Wang Q. Efectos de seis nutrientes dietéticos comunes sobre el crecimiento de organoides intestinales murinos. Más uno. 1 de febrero de 2018; 13 (2): e0191517. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0191517. PMID: 29389993; PMCID: PMC5794098.
  40. ^ Qi Y, Lohman J, Bratlie KM, Peroutka-Bigus N, Bellaire B, Wannemuehler M, Yoon KJ, Barrett TA, Wang Q. Vitamina C y B3 como nuevos biomateriales para alterar las células madre intestinales. Revista de investigación de materiales biomédicos, parte A. Septiembre de 2019; 107 (9): 1886–1897. https://doi.org/10.1002/jbm.a.36715. Publicación electrónica del 23 de mayo de 2019. PMID: 31071241; PMCID: PMC6626554.
  41. ^ Davoudi Z, Peroutka-Bigus N, Bellaire B, Wannemuehler M, Barrett TA, Narasimhan B, Wang Q. Organoides intestinales que contienen nanopartículas de poli (ácido láctico-co-glicólico) para el tratamiento de enfermedades inflamatorias del intestino. Revista de investigación de materiales biomédicos, parte A. Abril de 2018;106(4):876–886. https://doi.org/10.1002/jbm.a.36305. Publicación electrónica del 21 de diciembre de 2017. PMID: 29226615; PMCID: PMC5826879.
  42. ^ Davoudi Z, Peroutka-Bigus N, Bellaire B, Jergens A, Wannemuehler M, Wang Q. Organoide intestinal como nueva plataforma para estudiar nanopartículas de PLGA mediadas por alginato y quitosano para la administración de fármacos. Drogas Marinas. 2021 mayo 20;19(5):282. https://doi.org/10.3390/md19050282. PMID: 34065505; PMCID: PMC8161322.
  43. ^ Qi Y, Shi E, Peroutka-Bigus N, Bellaire B, Wannemuehler M, Jergens A, Barrett T, Wu Y, Wang Q. Estudio ex vivo de nanocables de teluro en Minigut. Revista de nanotecnología biomédica. 1 de mayo de 2018; 14 (5): 978–986. https://doi.org/10.1166/jbn.2018.2578. PMID: 29883567
  44. ^ Reding B, Carter P, Qi Y, Li Z, Wu Y, Wannemuehler M, Bratlie KM, Wang Q. Manipular organoides intestinales con nanohojas de carburo de niobio. Revista de investigación de materiales biomédicos, parte A. Abril de 2021; 109 (4): 479–487. https://doi.org/10.1002/jbm.a.37032. Publicación electrónica del 17 de junio de 2020. PMID: 32506610.
  45. ^ Zietek T, Giesbertz P, Ewers M, Reichart F, Weinmüller M, Demir IE, et al. (2020). "Organoides para estudiar el transporte intestinal de nutrientes, la absorción de fármacos y el metabolismo: actualización del modelo humano y ampliación de aplicaciones". Fronteras en Bioingeniería y Biotecnología . 8 : 577656. doi : 10.3389/fbioe.2020.577656 . PMC 7516017 . PMID  33015026. 
  46. ^ Zietek T, Rath E, Haller D, Daniel H (noviembre de 2015). "Organoides intestinales para evaluar el transporte de nutrientes, la detección y la secreción de incretinas". Informes científicos . 5 (1): 16831. Código bibliográfico : 2015NatSR...516831Z. doi : 10.1038/srep16831 . PMC 4652176 . PMID  26582215. 
  47. ^ Rahmani, Sara; Breyner, Natalia M.; Su, Hsuan-Ming; Verdú, Elena F.; Didar, Tohid F. (1 de febrero de 2019). "Organoides intestinales: un nuevo paradigma para la ingeniería del epitelio intestinal in vitro". Biomateriales . 194 : 195–214. doi :10.1016/j.biomaterials.2018.12.006. ISSN  0142-9612. PMID  30612006. S2CID  58603850.
  48. ^ Sun L, Rollins D, Qi Y, Fredericks J, Mansell TJ, Jergens A, Phillips GJ, Wannemuehler M, Wang Q. TNFα regula los organoides intestinales de ratones con microbiota definida y convencional. Revista internacional de macromoléculas biológicas. 1 de diciembre de 2020; 164: 548–556. https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2020.07.176. Publicación electrónica del 18 de julio de 2020. PMID: 32693143; PMCID: PMC7657954.
  49. ^ Tong T, Qi Y, Rollins D, Bussiere LD, Dhar D, Miller CL, Yu C, Wang Q. Diseño racional de fármacos orales dirigidos a la administración de mucosas con plataformas organoides intestinales. Materiales bioactivos. 2023; 30: 116-128. https://doi.org/10.1016/j.bioactmat.2023.07.014. PMID: 37560199.
  50. ^ Davoudi Z, Atherly T, Borcherding DC, Jergens AE, Wannemuehler M, Barrett TA, Wang Q. Estudio del transporte de fármacos dentro de sistemas organoides de colon murino recientemente establecidos. Biología avanzada. 2023; e2300103. https://doi.org/10.1002/adbi.202300103. PMID: 37607116.
  51. ^ Lindemans C, Mertelsmann A, Dudakov JA, Velardi E, Hua G, O'Connor M, et al. (2014). "La administración de IL-22 protege las células madre intestinales del Gvhd". Biología del trasplante de sangre y médula . 20 (2): S53-S54. doi : 10.1016/j.bbmt.2013.12.056 .
  52. ^ Zhang, Yong-Guo; Wu, Shaoping; Xia, Yinglin; Dom, junio (septiembre de 2014). "Sistema de cultivo de organoides intestinales derivados de criptas infectadas con Salmonella para interacciones huésped-bacteria". Informes Fisiológicos . 2 (9): e12147. doi : 10.14814/phy2.12147. PMC 4270227 . PMID  25214524. 
  53. ^ Geiser, Petra; Di Martino, María Letizia; Samperio Ventayol, Pilar; Eriksson, Jens; Sima, Eduardo; Al-Saffar, Anas Kh.; Ah, David; Phillipson, Mía; Webb, Dominic-Luc; Sundbom, Magnus; Hellström, por M. (23 de febrero de 2021). Sperandio, Vanessa (ed.). "Salmonella enterica Serovar Typhimurium aprovecha el ciclo a través de células epiteliales para colonizar enteroides humanos y murinos". mBio . 12 (1). doi :10.1128/mBio.02684-20. ISSN  2161-2129. PMC 7844539 . PMID  33436434. 
  54. ^ Dutta, Devanjali; Heo, Inha; O'Connor, Roberta (14 de septiembre de 2019). "Estudio de la infección por Cryptosporidium en sistemas de cultivo de organoides humanos derivados de tejidos 3D mediante microinyección". Revista de experimentos visualizados (151): 59610. doi :10.3791/59610. ISSN  1940-087X. PMID  31566619. S2CID  203377662.
  55. ^ Co, Julia Y.; Margalef-Català, Mar; Li, Xingnan; Mah, Amanda T.; Kuo, Calvin J.; Monack, Denise M.; Amieva, Manuel R. (febrero de 2019). "Control de la polaridad epitelial: un modelo enteroide humano para interacciones huésped-patógeno". Informes celulares . 26 (9): 2509–2520.e4. doi :10.1016/j.celrep.2019.01.108. PMC 6391775 . PMID  30811997. 
  56. ^ Tong T, Qi Y, Bussiere LD, Wannemuehler M, Miller CL, Wang Q, Yu C. Transporte de nanoportadores artificiales similares a virus a través de monocapas intestinales mediante células de micropliegues. Nanoescala. 14 de agosto de 2020; 12 (30): 16339-16347. https://doi.org/10.1039/D0NR03680C. Publicación electrónica del 29 de julio de 2020. PMID: 32725029.
  57. ^ ab Noël, Gaelle; Baetz, Nicholas W.; Staab, Janet F.; Donowitz, Marcos; Kovbasnjuk, Olga; Pasetti, Marcela F.; Zachos, Nicolás C. (31 de mayo de 2017). "Un modelo primario de cocultivo de macrófagos y enteroides humanos para investigar la fisiología de la mucosa intestinal y las interacciones huésped-patógeno". Informes científicos . 7 (1): 45270. Código bibliográfico : 2017NatSR...745270N. doi :10.1038/srep45270. ISSN  2045-2322. PMC 5366908 . PMID  28345602. 
  58. ^ Bouchi R, Foo KS, Hua H, Tsuchiya K, Ohmura Y, Sandoval PR, Ratner LE, Egli D, Leibel RL, Accili D (junio de 2014). "La inhibición de FOXO1 produce células productoras de insulina funcionales en cultivos de organoides intestinales humanos". Comunicaciones de la naturaleza . 5 : 4242. Código Bib : 2014NatCo...5.4242B. doi : 10.1038/ncomms5242. PMC 4083475 . PMID  24979718. 
  59. ^ Sontheimer-Phelps, Alexandra; Chou, David B.; Tovaglieri, Alessio; Ferrante, Thomas C.; Duckworth, Taylor; Fadel, Cicely; Frismantas, Viktoras; Sutherland, Arlene D.; Jalili-Firoozinezhad, Sasan; Kasendra, Magdalena; Stas, Eric (2020). "El colon humano en un chip permite el análisis continuo in vitro de la fisiología y la acumulación de la capa de moco del colon". Gastroenterología y Hepatología Celular y Molecular . 9 (3): 507–526. doi :10.1016/j.jcmgh.2019.11.008. PMC 7036549 . PMID  31778828. 
  60. ^ Grassart, Alejandro; Malardé, Valérie; Gobaa, Samy; Sartori-Rupp, Anna; Kerns, Jordania; Karalis, Katia; Marteyn, Benoit; Sansonetti, Philippe; Sauvonnet, Nathalie (septiembre de 2019). "Un órgano humano en un chip diseñado por bioingeniería revela el microambiente intestinal y las fuerzas mecánicas que afectan la infección por Shigella". Célula huésped y microbio . 26 (3): 435–444.e4. doi : 10.1016/j.chom.2019.08.007 . PMID  31492657. S2CID  201868491.
  61. ^ abc McCracken KW, Catá EM, Crawford CM, Sinagoga KL, Schumacher M, Rockich BE, et al. (Diciembre de 2014). "Modelado del desarrollo humano y las enfermedades en organoides gástricos derivados de células madre pluripotentes". Naturaleza . 516 (7531): 400–4. Código Bib :2014Natur.516..400M. doi : 10.1038/naturaleza13863. PMC 4270898 . PMID  25363776. 
  62. ^ Barker N, Huch M, Kujala P, van de Wetering M, Snippert HJ, van Es JH, et al. (Enero de 2010). "Las células madre Lgr5 (+ ve) impulsan la autorrenovación en el estómago y construyen unidades gástricas de larga duración in vitro". Célula madre celular . 6 (1): 25–36. doi : 10.1016/j.stem.2009.11.013 . PMID  20085740.
  63. ^ Li X, Nadauld L, Ootani A, Corney DC, Pai RK, Gevaert O, et al. (Julio de 2014). "Transformación oncogénica de diversos tejidos gastrointestinales en cultivo de organoides primarios". Medicina de la Naturaleza . 20 (7): 769–77. doi :10.1038/nm.3585. PMC 4087144 . PMID  24859528. 
  64. ^ ab Nadauld LD, García S, Natsoulis G, Bell JM, Miotke L, Hopmans ES, et al. (Agosto de 2014). "La evolución del tumor metastásico y el modelado de organoides implican al TGFBR2 como un impulsor del cáncer en el cáncer gástrico difuso". Biología del genoma . 15 (8): 428. doi : 10.1186/s13059-014-0428-9 . PMC 4145231 . PMID  25315765. 
  65. ^ ab Hisha H, Tanaka T, Kanno S, Tokuyama Y, Komai Y, Ohe S, et al. (Noviembre de 2013). "Establecimiento de un nuevo sistema de cultivo de organoides linguales: generación de organoides que tienen epitelio queratinizado maduro a partir de células madre epiteliales adultas". Informes científicos . 3 : 3224. Código Bib : 2013NatSR...3E3224H. doi :10.1038/srep03224. PMC 3828633 . PMID  24232854. 
  66. ^ ab Aihara E, Mahe MM, Schumacher MA, Matthis AL, Feng R, Ren W, et al. (noviembre de 2015). "Caracterización del ciclo de células madre / progenitoras utilizando organoide de papila gustativa de papila circunvalada murina". Informes científicos . 5 : 17185. Código Bib : 2015NatSR...517185A. doi :10.1038/srep17185. PMC 4665766 . PMID  26597788. 
  67. ^ Ren W, Lewandowski BC, Watson J, Aihara E, Iwatsuki K, Bachmanov AA, Margolskee RF, Jiang P (noviembre de 2014). "Las células madre / progenitoras del gusto que expresan Lgr5 o Lgr6 individuales generan células de papilas gustativas ex vivo". Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América . 111 (46): 16401–6. Código Bib : 2014PNAS..11116401R. doi : 10.1073/pnas.1409064111 . PMC 4246268 . PMID  25368147. 
  68. ^ Martín A, Barbesino G, Davies TF (1999). "Receptores de células T y enfermedad tiroidea autoinmune: señales de enfermedades impulsadas por antígenos de células T". Revisiones internacionales de inmunología . 18 (1–2): 111–40. doi :10.3109/08830189909043021. PMID  10614741.
  69. ^ Bredenkamp N, Ulyanchenko S, O'Neill KE, Manley NR, Vaidya HJ, Blackburn CC (septiembre de 2014). "Un timo organizado y funcional generado a partir de fibroblastos reprogramados con FOXN1". Biología celular de la naturaleza . 16 (9): 902–8. doi :10.1038/ncb3023. PMC 4153409 . PMID  25150981. 
  70. ^ abc Vianello F, Poznansky MC (2007). "Generación de un organoide tímico diseñado mediante ingeniería tisular ". Métodos en biología molecular. vol. 380, págs. 163–70. doi :10.1385/1-59745-395-1:163 (inactivo 2024-01-24). ISBN 978-1-59745-395-0. PMID  17876092.{{cite book}}: Mantenimiento CS1: DOI inactivo a partir de enero de 2024 ( enlace )
  71. ^ Sakib, hombre triste; et al. (1 de junio de 2019). "Formación de organoides testiculares organotípicos en cultivo de micropocillos". Biología de la Reproducción . 100 (6): 1648-1660. doi :10.1093/biolre/ioz053. PMC 7302515 . PMID  30927418. 
  72. ^ Drost, Jarno; Karthaus, Wouter R.; Gao, Dong; Driehuis, Else; Sawyers, Charles L.; Chen, Yu; Clevers, Hans (21 de enero de 2016). "Sistemas de cultivo de organoides para tejido canceroso y epitelial de próstata". Protocolos de la Naturaleza . 11 (2): 347–358. doi :10.1038/nprot.2016.006. ISSN  1750-2799. PMC 4793718 . PMID  26797458. 
  73. ^ Huch M, Gehart H, van Boxtel R, Hamer K, Blokzijl F, Verstegen MM y col. (Enero de 2015). "Cultivo a largo plazo de células madre bipotentes genómicamente estables de hígado humano adulto". Celúla . 160 (1–2): 299–312. doi :10.1016/j.cell.2014.11.050. PMC 4313365 . PMID  25533785. 
  74. ^ Li P, Li Y, Wang Y, Liu J, Lavrijsen M, Li Y, Zhang R, Verstegen MMA, Wang Y, Li TC, Ma Z, Kainov DE, Bruno MJ, de Man RA, van der Laan LJW, Peppelenbosch MP, Pan Q (2022). "Recapitulando las interacciones entre el virus de la hepatitis E y el huésped y facilitando el descubrimiento de fármacos antivirales en organoides derivados del hígado humano". Avances científicos . 8 (3): 103–111. Código Bib : 2022SciA....8.5908L. doi : 10.1126/sciadv.abj5908. hdl : 11250/3047921 . PMID  5044825. S2CID  246069868.{{cite journal}}: Mantenimiento CS1: varios nombres: lista de autores ( enlace )
  75. ^ Huch M, Bonfanti P, Boj SF, Sato T, Loomans CJ, van de Wetering M, et al. (Octubre 2013). "Expansión in vitro ilimitada de progenitores de páncreas bipotentes adultos a través del eje Lgr5 / R-espondina". La Revista EMBO . 32 (20): 2708–21. doi :10.1038/emboj.2013.204. PMC 3801438 . PMID  24045232. 
  76. ^ Hou S, Tiriac H, Sridharan BP, Scampavia L, Madoux F, Seldin J; et al. (2018). "Desarrollo avanzado de modelos de tumores organoides pancreáticos primarios para la detección de fármacos fenotípicos de alto rendimiento". Discoteca SLAS . 23 (6): 574–584. doi :10.1177/2472555218766842. PMC 6013403 . PMID  29673279. {{cite journal}}: Mantenimiento CS1: varios nombres: lista de autores ( enlace )
  77. ^ Wolff RA, Wang-Gillam A, Álvarez H, Tiriac H, Engle D, Hou S; et al. (2018). "Cambios dinámicos durante el tratamiento del cáncer de páncreas". Oncoobjetivo . 9 (19): 14764–14790. doi :10.18632/oncotarget.24483. PMC 5871077 . PMID  29599906. {{cite journal}}: Mantenimiento CS1: varios nombres: lista de autores ( enlace )
  78. ^ A continuación, Christopher R.; Kelly, Juana; Marrón, Alejandro; Humphries, Jonathan D.; Hutton, Colin; Xu, Jingshu; Lee, Brian Y.; Cintas, Celia; Zhang, Xiaohong; Hernández-Gordillo, Víctor; Stockdale, Linda (13 de septiembre de 2021). "Un modelo tridimensional sintético inspirado en el microambiente para organoides de adenocarcinoma ductal de páncreas". Materiales de la naturaleza . 21 (1): 110-119. doi :10.1038/s41563-021-01085-1. ISSN  1476-4660. PMC 7612137 . PMID  34518665. 
  79. ^ Barker N, van Es JH, Kuipers J, Kujala P, van den Born M, Cozijnsen M, et al. (octubre de 2007). "Identificación de células madre en intestino delgado y colon mediante el gen marcador Lgr5". Naturaleza . 449 (7165): 1003–7. Código Bib : 2007Natur.449.1003B. doi : 10.1038/naturaleza06196. PMID  17934449. S2CID  4349637.
  80. ^ Lee JH, Bhang DH, Beede A, Huang TL, Stripp BR, Bloch KD y otros. (Enero 2014). "Diferenciación de células madre pulmonares en ratones dirigida por células endoteliales a través de un eje BMP4-NFATc1-trombospondina-1". Celúla . 156 (3): 440–55. doi :10.1016/j.cell.2013.12.039. PMC 3951122 . PMID  24485453. 
  81. ^ Takasato M, Er PX, Chiu HS, Maier B, Baillie GJ, Ferguson C, et al. (octubre de 2015). "Los organoides renales de células iPS humanas contienen múltiples linajes y modelan la nefrogénesis humana". Naturaleza . 526 (7574): 564–8. Código Bib :2015Natur.526..564T. doi : 10.1038/naturaleza15695. PMID  26444236. S2CID  4443766.
  82. ^ abc Freedman BS, Brooks CR, Lam AQ, Fu H, Morizane R, Agrawal V, et al. (octubre de 2015). "Modelado de enfermedad renal con organoides renales mutantes CRISPR derivados de esferoides de epiblastos pluripotentes humanos". Comunicaciones de la naturaleza . 6 : 8715. Código Bib : 2015NatCo...6.8715F. doi :10.1038/ncomms9715. PMC 4620584 . PMID  26493500. 
  83. ^ Morizane R, Lam AQ, Freedman BS, Kishi S, Valerius MT, Bonventre JV (noviembre de 2015). "Los organoides de nefrona derivados de células madre pluripotentes humanas modelan el desarrollo y la lesión renal". Biotecnología de la Naturaleza . 33 (11): 1193–200. doi :10.1038/nbt.3392. PMC 4747858 . PMID  26458176. 
  84. ^ van den Brink SC, Baillie-Johnson P, Balayo T, Hadjantonakis AK, Nowotschin S, Turner DA, et al. (noviembre de 2014). "Rotura de simetría, especificación de la capa germinal y organización axial en agregados de células madre embrionarias de ratón". Desarrollo . 141 (22): 4231–42. doi :10.1242/dev.113001. PMC 4302915 . PMID  25371360. 
  85. ^ Turner DA, Baillie-Johnson P, Martinez Arias A (febrero de 2016). "Los organoides y el autoensamblaje genéticamente codificado de células madre embrionarias". Bioensayos . 38 (2): 181–91. doi :10.1002/bies.201500111. PMC 4737349 . PMID  26666846. 
  86. ^ Turner DA, Girgin M, Alonso-Crisostomo L, Trivedi V, Baillie-Johnson P, Glodowski CR, et al. (noviembre de 2017). "Polaridad anteroposterior y alargamiento en ausencia de tejidos extraembrionarios y de señalización espacialmente localizada en gastruloides: organoides embrionarios de mamíferos". Desarrollo . 144 (21): 3894–3906. doi :10.1242/dev.150391. PMC 5702072 . PMID  28951435. 
  87. ^ ab Beccari L, Moris N, Girgin M, Turner DA, Baillie-Johnson P, Cossy AC, et al. (octubre de 2018). "Propiedades de autoorganización multiaxial de células madre embrionarias de ratón en gastruloides". Naturaleza . 562 (7726): 272–276. Código Bib :2018Natur.562..272B. doi :10.1038/s41586-018-0578-0. PMID  30283134. S2CID  52915553.
  88. ^ "Blastoide: la historia de fondo de la formación de una estructura similar a un blastocisto únicamente a partir de células madre". 2018-06-27.
  89. ^ "Laboratorio Nicolas Rivron | Blastoide | Países Bajos".
  90. ^ Rivron NC, Frías-Aldeguer J, Vrij EJ, Boisset JC, Korving J, Vivié J, et al. (mayo de 2018). "Estructuras similares a blastocistos generadas únicamente a partir de células madre" (PDF) . Naturaleza . 557 (7703): 106–111. Código Bib :2018Natur.557..106R. doi :10.1038/s41586-018-0051-0. PMID  29720634. S2CID  13749109.
  91. ^ Rawlings TM, Makwana K, Tryfonos M, Lucas ES (julio de 2021). "Organoides para modelar el endometrio: implantación y más allá". Reproducción Fértil . 2 (3): R85–R101. doi :10.1530/RAF-21-0023. PMC 8801025 . PMID  35118399. 
  92. ^ Lee EJ, Kim DE, Azeloglu EU, Costa KD (febrero de 2008). "Cámaras organoides cardíacas diseñadas: hacia un ventrículo modelo biológico funcional". Ingeniería de tejidos. Parte A. 14 (2): 215–25. doi : 10.1089/tea.2007.0351. PMID  18333774.
  93. ^ Molteni M (27 de junio de 2018). "Estos minicorazones palpitantes podrían ahorrar mucho dinero y tal vez vidas". CABLEADO . Consultado el 30 de junio de 2018 .
  94. ^ Wiley LA, Burnight ER, DeLuca AP, Anfinson KR, Cranston CM, Kaalberg EE, et al. (Julio de 2016). "Producción de cGMP de iPSC específicas del paciente y células precursoras de fotorreceptores para tratar la ceguera degenerativa de la retina". Informes científicos . 6 : 30742. Código Bib : 2016NatSR...630742W. doi :10.1038/srep30742. PMC 4965859 . PMID  27471043. 
  95. ^ Zilova, Lucie; Weinhardt, Venera; Tavhelidse, Tinatini; Schlagheck, Cristina; Thumberger, Thomas; Wittbrodt, Joachim (12 de julio de 2021). Martínez Arias, Alfonso; Stanier, Didier YR; Martínez Arias, Alfonso (eds.). "Las células pluripotentes embrionarias primarias de peces se ensamblan en el tejido de la retina reflejando el desarrollo ocular temprano in vivo". eVida . 10 : e66998. doi : 10.7554/eLife.66998 . ISSN  2050-084X. PMC 8275126 . PMID  34252023. 
  96. ^ Sachs, normando; de Ligt, Joep; Kopper, Oded; Gógola, Ewa; Bounova, gergana; Weeber, Flor; Balgobind, Anjali Vanita; Viento, Karin; Gracanín, Ana; Begthel, Harry; Korving, Jeroen; van Boxtel, Rubén; Duarte, Alexandra Alves; Lelieveld, Dafne; et al. (2018). "Un biobanco vivo de organoides de cáncer de mama captura la heterogeneidad de la enfermedad". Celúla . 172 (1–2): 373–386.e10. doi : 10.1016/j.cell.2017.11.010 . ISSN  0092-8674. PMID  29224780.
  97. ^ van de Wetering, Marc; Francies, Hayley; Francisco, Josué; Bounova, gergana; Iorio, Francisco; Pronk, Apolo; van Houdt, Winan; van Gorp, Joost; Taylor-Weiner, Amaro; Kester, Lennart; McLaren-Douglas, Anne; Blokker, Joyce; Jaksani, Sridevi; Bartfeld, Sina; et al. (2015). "Derivación prospectiva de un biobanco organoide vivo de pacientes con cáncer colorrectal". Celúla . 161 (4): 933–945. doi :10.1016/j.cell.2015.03.053. ISSN  0092-8674. PMC 6428276 . PMID  25957691. 
  98. ^ Quereda V, Hou S, Madoux F, Scampavia L, Spicer TP, Duckett D (2018). "Un ensayo de alto rendimiento de esferoide tridimensional citotóxico que utiliza células madre de glioma derivadas del paciente". Discoteca SLAS . 23 (8): 842–849. doi :10.1177/2472555218775055. PMC 6102052 . PMID  29750582. {{cite journal}}: Mantenimiento CS1: varios nombres: lista de autores ( enlace )
  99. ^ Dayton, Talya L.; Alcalá, Nicolás; Moonen, Laura; den Hartigh, Lisanne; Geurts, Veerle; Mangiante, Lise; Regazo, Lisa; Dost, Antonella FM; Beumer, Joep; Levy, Sonja; van Leeuwaarde, Rachel S.; Hackeng, Wenzel M.; Samsom, Kris; Voegele, Catherine; et al. (2023). "Análisis de la evolución de tumores y dependencias del crecimiento de fármacos en organoides de neoplasias neuroendocrinas derivados de pacientes de múltiples sitios del cuerpo". Célula cancerosa . 41 (12): 2083–2099. doi : 10.1016/j.ccell.2023.11.007 . ISSN  1535-6108. PMID  38086335.
  100. ^ Zidarič, Tanja; Gradišnik, Lidija; Velnar, Tomaž (1 de abril de 2022). "Astrocitos y modelos de barrera hematoencefálica artificial humana". Revista Bosnia de Ciencias Médicas Básicas . 22 (5): 651–672. doi : 10.17305/bjbms.2021.6943. ISSN  1840-4812. PMC 9519155 . PMID  35366791. 
  101. ^ Zietek T, Rath E, Haller D, Daniel H (noviembre de 2015). "Organoides intestinales para evaluar el transporte de nutrientes, la detección y la secreción de incretinas". Informes científicos . 5 : 16831. Código Bib : 2015NatSR...516831Z. doi :10.1038/srep16831. PMC 4652176 . PMID  26582215. 
  102. ^ abc Cruz NM, Song X, Czerniecki SM, Gulieva RE, Churchill AJ, Kim YK, et al. (noviembre de 2017). "La cistogénesis organoide revela un papel fundamental del microambiente en la poliquistosis renal humana". Materiales de la naturaleza . 16 (11): 1112-1119. Código Bib : 2017NatMa..16.1112C. doi :10.1038/nmat4994. PMC 5936694 . PMID  28967916. 
  103. ^ abc Kim YK, Refaeli I, Brooks CR, Jing P, Gulieva RE, Hughes MR, et al. (Diciembre de 2017). "Los organoides de riñón humano editados genéticamente revelan mecanismos de enfermedad en el desarrollo de podocitos". Células madre . 35 (12): 2366–2378. doi :10.1002/stem.2707. PMC 5742857 . PMID  28905451. 
  104. ^ Takahashi K, Tanabe K, Ohnuki M, Narita M, Ichisaka T, Tomoda K, et al. (noviembre de 2007). "Inducción de células madre pluripotentes a partir de fibroblastos humanos adultos mediante factores definidos" (PDF) . Celúla . 131 (5): 861–72. doi :10.1016/j.cell.2007.11.019. hdl : 2433/49782 . PMID  18035408. S2CID  8531539.
  105. ^ abc Hsieh WC, Ramadesikan S, Fekete D, Aguilar RC (14 de febrero de 2018). "Las células diferenciadas de riñón derivadas de iPSC de pacientes con síndrome de Lowe muestran defectos de ciliogénesis y retención de Six2 en el complejo de Golgi". MÁS UNO . 13 (2): e0192635. Código Bib : 2018PLoSO..1392635H. doi : 10.1371/journal.pone.0192635 . PMC 5812626 . PMID  29444177. 
  106. ^ Howden SE, Thomson JA, Little MH (mayo de 2018). "Reprogramación y edición genética simultánea de fibroblastos humanos". Protocolos de la Naturaleza . 13 (5): 875–898. doi :10.1038/nprot.2018.007. PMC 5997775 . PMID  29622803. 
  107. ^ abcd Forbes TA, Howden SE, Lawlor K, Phipson B, Maksimovic J, Hale L, et al. (mayo de 2018). "Los organoides renales derivados de iPSC del paciente muestran una validación funcional de un fenotipo renal ciliopático y revelan mecanismos patogenéticos subyacentes". Revista Estadounidense de Genética Humana . 102 (5): 816–831. doi :10.1016/j.ajhg.2018.03.014. PMC 5986969 . PMID  29706353. 
  108. ^ ab Tanigawa S, Islam M, Sharmin S, Naganuma H, Yoshimura Y, Haque F, et al. (septiembre de 2018). "Los organoides de iPSC derivadas de enfermedades nefróticas identifican alteraciones en la localización de NEPHRIN y la formación de diafragma hendido en podocitos renales". Informes de células madre . 11 (3): 727–740. doi :10.1016/j.stemcr.2018.08.003. PMC 6135868 . PMID  30174315. 
  109. ^ Engle SJ, Blaha L, Kleiman RJ (noviembre de 2018). "Mejores prácticas para el modelado de enfermedades traslacionales utilizando neuronas derivadas de iPSC humanas". Neurona . 100 (4): 783–797. doi : 10.1016/j.neuron.2018.10.033 . PMID  30465765.
  110. ^ "Metabolitos". www.mdpi.com . Consultado el 16 de octubre de 2022 .
  111. ^ ab Dekkers JF, Wiegerinck CL, de Jonge HR, Bronsveld I, Janssens HM, de Winter-de Groot KM, et al. (Julio 2013). "Un ensayo de CFTR funcional utilizando organoides intestinales de fibrosis quística primaria". Medicina de la Naturaleza . 19 (7): 939–45. doi :10.1038/nm.3201. PMID  23727931. S2CID  5369669.
  112. ^ ab Dekkers JF, Berkers G, Kruisselbrink E, Vonk A, de Jonge HR, Janssens HM, et al. (junio de 2016). "Caracterización de las respuestas a fármacos moduladores de CFTR utilizando organoides rectales derivados de sujetos con fibrosis quística". Medicina traslacional de la ciencia . 8 (344): 344ra84. doi : 10.1126/scitranslmed.aad8278. PMID  27334259. S2CID  19462535.
  113. ^ Schwank G, Koo BK, Sasselli V, Dekkers JF, Heo I, Demircan T, et al. (Diciembre 2013). "Reparación funcional de CFTR mediante CRISPR/Cas9 en organoides de células madre intestinales de pacientes con fibrosis quística". Célula madre celular . 13 (6): 653–8. doi : 10.1016/j.stem.2013.11.002 . PMID  24315439.
  114. ^ "El primer mini transporte de órganos del mundo a un paciente con colitis ulcerosa". Universidad Médica y Dental de Tokio a través de medicalxpress.com . Consultado el 18 de septiembre de 2022 .
  115. ^ Watanabe, Satoshi; Kobayashi, Sakurako; Ogasawara, Nobuhiko; Okamoto, Ryuichi; Nakamura, Tetsuya; Watanabe, Mamoru; Jensen, Kim B.; Yui, Shiro (marzo de 2022). "Trasplante de organoides intestinales a un modelo de colitis en ratón" . Protocolos de la Naturaleza . 17 (3): 649–671. doi :10.1038/s41596-021-00658-3. ISSN  1750-2799. PMID  35110738. S2CID  246488596.
  116. ^ abcde Ader M, Tanaka EM (diciembre de 2014). "Modelado del desarrollo humano en la cultura 3D". Opinión actual en biología celular . 31 : 23–8. doi :10.1016/j.ceb.2014.06.013. PMID  25033469.
  117. ^ Martínez-Morales JR, Cavodeassi F, Bovolenta P (2017). "Los mecanismos morfogenéticos coordinados dan forma al ojo de los vertebrados". Fronteras en Neurociencia . 11 : 721. doi : 10.3389/fnins.2017.00721 . PMC 5742352 . PMID  29326547. 
  118. ^ Gordon, Aarón; Yoon, Se-Jin; Tran, Stephen S.; Makinson, Christopher D.; Parque, Jin Young; Andersen, Jimena; Valencia, Alfredo M.; Horvath, Steve; Xiao, Xinshu; Huguenard, John R.; Pașca, Sergiu P. (22 de febrero de 2021). "La maduración a largo plazo de los organoides corticales humanos coincide con las transiciones posnatales tempranas clave". Neurociencia de la Naturaleza . 24 (3): 331–342. doi :10.1038/s41593-021-00802-y. ISSN  1546-1726. PMC 8109149 . PMID  33619405. 

Otras lecturas