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Tinción de plata

En patología , la tinción de plata es el uso de plata para alterar selectivamente la apariencia de un objetivo en la microscopía de secciones histológicas ; en la electroforesis en gel con gradiente de temperatura ; y en geles de poliacrilamida .

En las vidrieras tradicionales , la tinción de plata es una técnica para producir tonos de amarillo a naranja o marrón (o verde sobre una base de vidrio azul), añadiendo una mezcla que contiene compuestos de plata (en particular, nitrato de plata ) y cociéndola suavemente. Se introdujo poco después de 1800 y es el "manchador" en el término "vidriera". Los compuestos de plata [1] se mezclan con sustancias aglutinantes, se aplican a la superficie del vidrio y luego se cuecen en un horno. [2] [3] [4]

Historia

Camillo Golgi perfeccionó la tinción con plata para el estudio del sistema nervioso . Aunque se desconoce el mecanismo químico exacto por el que esto ocurre, [5] el método de Golgi tiñe un número limitado de células al azar en su totalidad. [6]

La tinción de plata fue introducida por Kerenyi y Gallyas como un procedimiento sensible para detectar trazas de proteínas en geles . [7] La ​​técnica se ha extendido al estudio de otras macromoléculas biológicas que se han separado en una variedad de soportes. [8]

La tinción clásica con azul brillante de Coomassie generalmente puede detectar una banda de proteína de 50 ng; la tinción con plata aumenta la sensibilidad típicamente 50 veces.

Muchas variables pueden influir en la intensidad del color y cada proteína tiene sus propias características de tinción; el material de vidrio limpio, los reactivos puros y el agua de máxima pureza son los puntos clave para una tinción exitosa. [9]

Química

Algunas células son argentafínicas , es decir, reducen la solución de plata a plata metálica después de la fijación con formalina . Otras células son argirofílicas , es decir, reducen la solución de plata a plata metálica después de ser expuestas a un colorante que contiene un reductor , por ejemplo, hidroquinona o formalina.

El nitrato de plata forma fosfato de plata insoluble con iones de fosfato ; este método se conoce como tinción de Von Kossa . Cuando se lo somete a un agente reductor, generalmente hidroquinona , forma plata elemental negra. Esto se utiliza para estudiar la formación de partículas de fosfato de calcio durante el crecimiento óseo.

Aplicaciones

Caracterización histológica

La tinción de plata ayuda a visualizar los objetivos de interés, es decir, los componentes celulares intracelulares y extracelulares como el ADN y las proteínas , como el colágeno tipo III y las fibras de reticulina, mediante la deposición de partículas de plata metálica sobre los objetivos de interés. [10]

Microbiología diagnóstica

Pseudomonas , [11] Legionella , Leptospira , H. pylori , Bartonella y Treponema , y ​​hongos como Pneumocystis , Cryptococcus y Candida son organismos que se tiñen con plata. [ cita requerida ]

Análisis del cariotipo

La tinción con plata se utiliza en el cariotipo . El nitrato de plata tiñe la proteína asociada a la región de organización nucleolar (NOR), lo que produce una región oscura en la que se deposita la plata y que denota la actividad de los genes del ARNr dentro de la NOR. Los cromosomas humanos 13, 14, 15, 21 y 22 tienen NOR, que aumentan la actividad de la tinción con plata al menos 50 veces. [ cita requerida ]

Análisis genómico y proteómico

La tinción con plata se utiliza para teñir geles. La tinción con plata de proteínas en geles de agarosa fue desarrollada en 1973 por Kerenyi y Gallyas. [12] Posteriormente se adaptó a los geles de poliacrilamida utilizados en SDS-PAGE , [13] [14] [15] [16] [17] y también para teñir ADN o ARN. [18] Las glicosilaciones de glicoproteínas y polisacáridos se pueden oxidar mediante un pretratamiento de 1 hora con ácido peryódico al 0,1 % a 4 °C, lo que mejora la unión de iones de plata y el resultado de la tinción. [19]

En primer lugar, las proteínas se desnaturalizan en el gel mediante una solución fijadora de ácido acético al 10% y etanol al 30% y se precipitan, al mismo tiempo que se extrae el detergente (principalmente SDS ). De este modo, la difusión de las proteínas se reduce significativamente. Después de repetidos lavados con agua, el gel se incuba en una solución de nitrato de plata . Los iones de plata se unen a las cadenas laterales de las proteínas con carga negativa. A continuación, los iones de plata sobrantes se eliminan con agua. En el paso final de desarrollo, los iones de plata se reducen a plata elemental mediante la adición de formaldehído alcalino . Esto tiñe los sitios donde están presentes las proteínas de marrón a negro.

La intensidad de la tinción depende de la estructura primaria de la proteína. Además, la limpieza de los recipientes utilizados y la pureza de los reactivos influyen en la tinción de plata. [20] Los artefactos comunes en los geles teñidos con plata son bandas de queratina en los rangos de 54-57 kDa y 65-68 kDa [21] como contaminación de la muestra antes de la electroforesis.

Tinciones de plata con metenamina

Existen varias tinciones de plata que incorporan metenamina , entre ellas:

Galería

Referencias

  1. ^ Steinhoff, Frederick Louis (1973). Industria cerámica. Publicaciones industriales, Incorporated.
  2. ^ Enciclopedia de Chambers. Pergamon Press. 1967.
  3. ^ "Datos sobre el vidrio: manchas de plata". Proyecto de conservación de Boppard – Museos de Glasgow . 18 de julio de 2013.
  4. ^ Historic England (2011). Vidrio y acristalamiento . Practical Building Conservation. Ashgate Publishing, Ltd. pág. 290. ISBN 978-0754645573.
  5. ^ Golgi C (1873). "Sulla struttura della sostanza grigia del cervello". Gazzetta Médica Italiana (Lombardía) . 33 : 244–246.
  6. ^ Grant G (octubre de 2007). "Cómo el Premio Nobel de Fisiología o Medicina de 1906 fue compartido entre Golgi y Cajal". Brain Res Rev . 55 (2): 490–498. doi :10.1016/j.brainresrev.2006.11.004. PMID  17306375. S2CID  24331507.
  7. ^ Kerenyi L, Gallyas F (1973). "Über Probleme der quantitiven Auswertung der mit physikalischer Entwicklung versilberten Agarelektrophoretogramme". Clínico. Chim. Acta . 47 (3): 425–436. doi :10.1016/0009-8981(73)90276-3. PMID  4744834.
  8. ^ Switzer RC 3rd, Merril CR, Shifrin S (septiembre de 1979). "Una tinción de plata altamente sensible para detectar proteínas y péptidos en geles de poliacrilamida". Anal. Biochem . 98 (1): 231–237. doi :10.1016/0003-2697(79)90732-2. PMID  94518.{{cite journal}}: CS1 maint: nombres múltiples: lista de autores ( enlace ) CS1 maint: nombres numéricos: lista de autores ( enlace )
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  10. ^ Schwint OA, Labraga M, Cervino CO, et al. (2004). "Una modificación de la técnica de tinción de fibras reticulares para el análisis de imágenes de la red de colágeno cardíaco". Cardiovasc. Pathol . 13 (4): 213–20. doi :10.1016/S1054-8807(03)00153-4. PMID  15210137.
  11. ^ Barnini S, Dodi C, Campa M (2004). "Resolución mejorada de la genotipificación aleatoria de ADN polimórfico amplificado de Pseudomonas aeruginosa". Lett. Appl. Microbiol . 39 (3): 274–7. doi : 10.1111/j.1472-765X.2004.01576.x . PMID  15287874.
  12. ^ Kerényi L, Gallyas F (septiembre de 1973). "[Errores en las estimaciones cuantitativas sobre electroforesis en agar utilizando tinción de plata]". Clin. Chim. Acta . 47 (3): 425–36. doi :10.1016/0009-8981(73)90276-3. PMID  4744834.
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  14. ^ RC Switzer, CR Merril, S. Shifrin (septiembre de 1979), "Una tinción de plata altamente sensible para detectar proteínas y péptidos en geles de poliacrilamida", Anal Biochem (en alemán), vol. 98, n.º 1, págs. 231-237, doi :10.1016/0003-2697(79)90732-2, PMID  94518{{citation}}: CS1 maint: varios nombres: lista de autores ( enlace )
  15. ^ Rabilloud T, et al. (1988). "Mejora y simplificación de la tinción de proteínas con plata de bajo fondo mediante el uso de ditionito de sodio". Electroforesis . 9 (6): 288–291. doi :10.1002/elps.1150090608. PMID  2466660. S2CID  33007991.
  16. ^ Rabilloud T (1992). "Una comparación entre tinciones de proteína con nitrato de plata y diamina de plata de bajo fondo". Electroforesis . 13 (7): 429–439. doi :10.1002/elps.1150130190. PMID  1425556. S2CID  43084621.
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  18. ^ Blum H, Beier H, Gross HJ (1987). "Tinción de plata mejorada de proteína vegetal, ARN y ADN en geles de PAA". Electroforesis . 8 : 93–99. doi :10.1002/elps.1150080203. S2CID  84471792.
  19. ^ Dubray G, Bezard G (1982). "Una tinción de plata con ácido peryódico altamente sensible para grupos 1,2-diol de glicoproteínas y polisacáridos en geles de poliacrilamida". Anal. Biochem. 119 (2): 325–329. doi :10.1016/0003-2697(82)90593-0. PMID  6176144.
  20. ^ E. Hempelmann, M. Schulze, O. Götze: Los grupos SH libres son importantes para la tinción policromática de proteínas con nitrato de plata. En: V. Neuhof (Editor): Electroforesis . Verlag Chemie, Weinheim, 1984, págs. 328–330.
  21. ^ Ochs D (1983). "Contaminantes proteicos de geles de poliacrilamida con dodecil sulfato de sodio". Anal Biochem . 135 (2): 470–4. doi :10.1016/0003-2697(83)90714-5. PMID  6197906.
  22. ^ Hempelmann E, Götze O ​​(1984). "Caracterización de proteínas de membrana mediante tinción policromática de plata". Hoppe-Seyler's Z Physiol Chem . 365 : 241–242.

Enlaces externos