En patología , la tinción de plata es el uso de plata para alterar selectivamente la apariencia de un objetivo en la microscopía de secciones histológicas ; en la electroforesis en gel con gradiente de temperatura ; y en geles de poliacrilamida .
En las vidrieras tradicionales , la tinción de plata es una técnica para producir tonos de amarillo a naranja o marrón (o verde sobre una base de vidrio azul), añadiendo una mezcla que contiene compuestos de plata (en particular, nitrato de plata ) y cociéndola suavemente. Se introdujo poco después de 1800 y es el "manchador" en el término "vidriera". Los compuestos de plata [1] se mezclan con sustancias aglutinantes, se aplican a la superficie del vidrio y luego se cuecen en un horno. [2] [3] [4]
Camillo Golgi perfeccionó la tinción con plata para el estudio del sistema nervioso . Aunque se desconoce el mecanismo químico exacto por el que esto ocurre, [5] el método de Golgi tiñe un número limitado de células al azar en su totalidad. [6]
La tinción de plata fue introducida por Kerenyi y Gallyas como un procedimiento sensible para detectar trazas de proteínas en geles . [7] La técnica se ha extendido al estudio de otras macromoléculas biológicas que se han separado en una variedad de soportes. [8]
La tinción clásica con azul brillante de Coomassie generalmente puede detectar una banda de proteína de 50 ng; la tinción con plata aumenta la sensibilidad típicamente 50 veces.
Muchas variables pueden influir en la intensidad del color y cada proteína tiene sus propias características de tinción; el material de vidrio limpio, los reactivos puros y el agua de máxima pureza son los puntos clave para una tinción exitosa. [9]
Algunas células son argentafínicas , es decir, reducen la solución de plata a plata metálica después de la fijación con formalina . Otras células son argirofílicas , es decir, reducen la solución de plata a plata metálica después de ser expuestas a un colorante que contiene un reductor , por ejemplo, hidroquinona o formalina.
El nitrato de plata forma fosfato de plata insoluble con iones de fosfato ; este método se conoce como tinción de Von Kossa . Cuando se lo somete a un agente reductor, generalmente hidroquinona , forma plata elemental negra. Esto se utiliza para estudiar la formación de partículas de fosfato de calcio durante el crecimiento óseo.
La tinción de plata ayuda a visualizar los objetivos de interés, es decir, los componentes celulares intracelulares y extracelulares como el ADN y las proteínas , como el colágeno tipo III y las fibras de reticulina, mediante la deposición de partículas de plata metálica sobre los objetivos de interés. [10]
Pseudomonas , [11] Legionella , Leptospira , H. pylori , Bartonella y Treponema , y hongos como Pneumocystis , Cryptococcus y Candida son organismos que se tiñen con plata. [ cita requerida ]
La tinción con plata se utiliza en el cariotipo . El nitrato de plata tiñe la proteína asociada a la región de organización nucleolar (NOR), lo que produce una región oscura en la que se deposita la plata y que denota la actividad de los genes del ARNr dentro de la NOR. Los cromosomas humanos 13, 14, 15, 21 y 22 tienen NOR, que aumentan la actividad de la tinción con plata al menos 50 veces. [ cita requerida ]
La tinción con plata se utiliza para teñir geles. La tinción con plata de proteínas en geles de agarosa fue desarrollada en 1973 por Kerenyi y Gallyas. [12] Posteriormente se adaptó a los geles de poliacrilamida utilizados en SDS-PAGE , [13] [14] [15] [16] [17] y también para teñir ADN o ARN. [18] Las glicosilaciones de glicoproteínas y polisacáridos se pueden oxidar mediante un pretratamiento de 1 hora con ácido peryódico al 0,1 % a 4 °C, lo que mejora la unión de iones de plata y el resultado de la tinción. [19]
En primer lugar, las proteínas se desnaturalizan en el gel mediante una solución fijadora de ácido acético al 10% y etanol al 30% y se precipitan, al mismo tiempo que se extrae el detergente (principalmente SDS ). De este modo, la difusión de las proteínas se reduce significativamente. Después de repetidos lavados con agua, el gel se incuba en una solución de nitrato de plata . Los iones de plata se unen a las cadenas laterales de las proteínas con carga negativa. A continuación, los iones de plata sobrantes se eliminan con agua. En el paso final de desarrollo, los iones de plata se reducen a plata elemental mediante la adición de formaldehído alcalino . Esto tiñe los sitios donde están presentes las proteínas de marrón a negro.
La intensidad de la tinción depende de la estructura primaria de la proteína. Además, la limpieza de los recipientes utilizados y la pureza de los reactivos influyen en la tinción de plata. [20] Los artefactos comunes en los geles teñidos con plata son bandas de queratina en los rangos de 54-57 kDa y 65-68 kDa [21] como contaminación de la muestra antes de la electroforesis.
Existen varias tinciones de plata que incorporan metenamina , entre ellas:
![Proteínas de membrana de glóbulos rojos separadas por SDS-PAGE y teñidas con plata.[22]](http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/8/8c/RBC_Membrane_Proteins_SDS-PAGE_gel.jpg/1280px-RBC_Membrane_Proteins_SDS-PAGE_gel.jpg)
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