Los antígenos nucleares extraíbles ( ENA ) son más de 100 antígenos nucleares y citoplasmáticos solubles diferentes . Se los conoce como "extraíbles" porque se pueden eliminar de los núcleos celulares utilizando solución salina y representan seis proteínas principales: Ro, La, Sm, RNP, Scl-70, Jo1. La mayoría de los ENA son parte de complejos de espliceosomas o nucleosomas y son un tipo de ribonucleoproteína nuclear pequeña (snRNPS). La ubicación en el núcleo y la asociación con espliceosomas o nucleosomas da como resultado que estos ENA se asocien con ARN y proteínas adicionales como las polimerasas. Esta cualidad de los ENA a menudo dificulta la purificación y cuantificación de su presencia para uso clínico. [1]
Un panel de antígenos nucleares extraíbles, o panel ENA, analiza la presencia de autoanticuerpos en la sangre que reaccionan con las proteínas del núcleo celular. Por lo general, se realiza como seguimiento de una prueba de anticuerpos antinucleares ( ANA ) positiva y cuando uno muestra síntomas de un trastorno autoinmunitario . El ANA analiza la presencia o ausencia de autoanticuerpos, mientras que el panel ENA evalúa qué proteínas del núcleo celular reconocen los autoanticuerpos. El panel ENA ayuda a diagnosticar, distinguir y controlar la progresión de las enfermedades autoinmunes y se realiza con una simple extracción de sangre. Si bien los niveles de autoanticuerpos pueden fluctuar a lo largo de la vida, una vez que uno desarrolla autoanticuerpos, siempre los tendrá. Los autoanticuerpos contra estos antígenos están asociados con trastornos particulares del tejido conectivo. De hecho, en el 84,3% de las muestras anti-ENA positivas, también se encontraron reactivos ANA. [1] El uso de pruebas de autoanticuerpos anti-ENA puede servir como verificación adicional de un trastorno autoinmune, porque una prueba de ANA positiva por sí sola no es suficiente para el diagnóstico. De hecho, se pueden encontrar niveles bajos de ANA en pacientes sanos. Las aplicaciones de las pruebas de anti-ENA varían desde la exclusión de grupos de pacientes de grupos específicos, enfermedades del tejido conectivo y para monitorear la actividad de la enfermedad. En esencia, permite a los médicos excluir trastornos autoinmunes específicos si un autoanticuerpo en particular no está presente, y permite a los médicos rastrear la progresión de una enfermedad si los niveles de estos autoanticuerpos aumentan o disminuyen. Para confirmar la presencia de anti-ENA, actualmente se recomienda utilizar dos o más métodos para confirmar los anti-ENA y evitar falsos positivos. El diagnóstico de enfermedades autoinmunes del tejido conectivo (ETC) se realiza a través del análisis de los síntomas y signos clínicos, pero también a través de la identificación de los autoanticuerpos dirigidos contra antígenos nucleares. Un artículo de 2002 también busca comparar las pruebas de diagnóstico utilizadas en los laboratorios de inmunología para medir los anti-ENA y las formas de mejorar esta prueba y este informe. La inmunodifusión doble (DID) y la contrainmunoelectroforesis (CIEP), dos formas de técnicas basadas en gel , se utilizan para obtener información sobre la importancia clínica y el papel de estos anticuerpos en aquellos con CTD. [2]
Desde el descubrimiento de los ENA, se han utilizado como herramienta de diagnóstico en enfermedades del tejido conectivo. En los primeros trabajos se utilizaron dos técnicas basadas en gel ampliamente utilizadas para identificar anti-ENA y sus asociaciones con enfermedades: la inmunodifusión doble (DID) [3] y la contrainmunoelectroforesis (CIEP). Ambas técnicas requieren la precipitación de antígenos para obtener resultados válidos. Según el anti-ENA que se esté investigando, se puede utilizar una técnica en lugar de la otra. Por ejemplo, el antígeno Scl-70 tiene una carga menos negativa, lo que puede provocar que el antígeno viaje en la misma dirección que el anticuerpo. Esto haría que el complejo anticuerpo-antígeno no se precipite, lo que daría lugar a resultados no válidos. [4] Además, es posible que algunos anticuerpos anti-SS-B identificados comúnmente en el síndrome de Sjögren no se detecten con este método. Sin embargo, este método es económicamente viable y específico para confirmar un diagnóstico. Hay dos sensibilidades que se deben tener en cuenta al ver los datos de estas técnicas basadas en gel: la sensibilidad del ensayo y la sensibilidad de la enfermedad. La sensibilidad del ensayo es la capacidad de reconocer cuándo está presente un anticuerpo, mientras que la sensibilidad a la enfermedad es la capacidad de reconocer la frecuencia con la que se presenta el anticuerpo en una enfermedad. Debido a las limitaciones de las técnicas basadas en gel en la sensibilidad a la enfermedad, se han explorado otras técnicas para aumentar la sensibilidad del ensayo sin disminuir la sensibilidad a la enfermedad. Por ejemplo, en pacientes con lupus eritematoso sistémico (LES), solo el 8-40% tiene anti-SM detectable cuando se utilizan ensayos basados en gel. Se ha demostrado que la CIEP es más sensible que la DID. [5]
Se pueden utilizar tres técnicas adicionales, hemaglutinación pasiva, ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) y transferencia Western (WB), para identificar ENA y vincularlos a enfermedades específicas. La hemaglutinación pasiva fue popular a fines de la década de 1970, pero se han realizado muy pocos estudios con ellas y se restringió a los anticuerpos anti-Sm y anti-proteína ribonuclear (RNP). [5] El ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) se ha convertido en la técnica más utilizada para realizar pruebas de anti-ENA debido a que es simple de realizar, cuantitativo y de alto volumen de producción. Si bien este método ha aumentado la sensibilidad del ensayo y es eficiente para laboratorios de alto volumen, tiene una especificidad de enfermedad mucho menor que las técnicas alternativas. Esto se debe a la incapacidad de aislar adecuadamente los ENA sin grandes costos debido a su asociación con complejos en el núcleo de la célula. Otra preocupación con la técnica ELISA es que se han reportado anticuerpos anti-Sm en pacientes sin LES, lo que llevaría a una investigación excesiva, pero podría deberse a la calidad de la fuente de antígeno utilizada. [5] El Western blot tiene una desventaja importante en que no se pueden detectar los anticuerpos dirigidos contra epítopos conformacionales. Además de eso, pueden ocurrir falsos positivos y la especificidad de la enfermedad es menor que otras técnicas. Si bien cada técnica tiene sus ventajas y desventajas, ELISA tiene las desventajas menos severas de potencial de falsos positivos (que son menos peligrosos que los falsos negativos) y costosos. [5]
Muchos laboratorios utilizan una combinación de ambas técnicas para mejorar la eficiencia sin sacrificar la especificidad. La recomendación actual de los talleres de consenso europeos es detectar los anticuerpos anti-ENA positivos con la técnica ELISA. A continuación, se realizará una prueba más específica, como la CIEP, con las muestras identificadas como positivas. [6]
Los seis antígenos principales utilizados en los laboratorios inmunológicos para la detección son Ro , La , Sm , RNP , Scl-70 y Jo1 , [7] que se examinan mediante técnicas de doble inmunodifusión de Ouchterlony y se confirman mediante inmunotransferencia . En las pruebas de anticuerpos antinucleares , estos antígenos tienen un patrón moteado. [8]
Los ENA se referían originalmente a proteínas que se encontraban en un extracto salino de núcleos celulares . [9] Desde entonces, los componentes se han identificado más claramente y, de hecho, incluyen muchas moléculas citoplasmáticas. Sin embargo, el nombre incorrecto ha permanecido. Estas proteínas están íntimamente asociadas con varias moléculas de ARN y, por lo tanto, se denominan ribonucleoproteínas , pero la nomenclatura utilizada para ellas es a menudo una fuente de confusión; Sm, Ro y La se nombraron según las primeras 2 letras de los apellidos de los pacientes en los que se encontraron por primera vez. Dos proteínas asociadas con el síndrome de Sjögren se describieron independientemente como antígenos A y B, pero ahora se sabe que son idénticas a Ro y La respectivamente, es decir, SS-A = Ro y SS-B = La.
Las pruebas de panel ENA (antígeno nuclear extraíble) son pruebas para detectar autoanticuerpos contra proteínas en el núcleo celular. El término "extraíble" se deriva de la capacidad de eliminar los autoanticuerpos de los núcleos con solución salina y proteínas comunes. El método de identificación de estas muestras es la razón por la que también se las conoce como anticuerpos contra antígenos extraídos con solución salina. [9]
Anti-ENA es un grupo de anticuerpos que se utiliza a menudo para detectar la enfermedad mixta del tejido conectivo (EMTC), el síndrome de Sjögren y el lupus eritematoso sistémico y, por lo general, se compone de seis pruebas: [10]
La sensibilidad y especificidad de estas pruebas dependen del tipo de ensayo empleado y, por lo tanto, varían según el laboratorio. La siguiente tabla ilustra la sensibilidad y especificidad de los anticuerpos ENA para detectar el LES con la técnica ELISA.
Además, el uso de la prueba ENA también se ha utilizado para el estudio de trastornos relacionados con el trigo, como la enfermedad celíaca . Un estudio realizado en 2018 examinó a pacientes con trastornos relacionados con el trigo para detectar 10 anticuerpos anti-ENA.
El 73% de los pacientes con enfermedad celíaca dieron positivo en la prueba de antihistona, que fue la más frecuente y que suele asociarse con el lupus eritematoso inducido por fármacos . Esto implica una alta probabilidad de un trastorno autoinmunitario en pacientes con trastornos relacionados con el trigo. [12]