stringtranslate.com

Fotorrespiración

Ciclo de fotorrespiración simplificado
Fotorrespiración simplificada y ciclo de Calvin

La fotorrespiración (también conocida como ciclo fotosintético oxidativo del carbono o ciclo C 2 ) se refiere a un proceso en el metabolismo de la planta donde la enzima RuBisCO oxigena RuBP , desperdiciando parte de la energía producida por la fotosíntesis. La reacción deseada es la adición de dióxido de carbono a RuBP ( carboxilación ), un paso clave en el ciclo de Calvin-Benson , pero aproximadamente el 25% de las reacciones de RuBisCO en cambio agregan oxígeno a RuBP ( oxigenación ), creando un producto que no se puede utilizar dentro del ciclo de Calvin-Benson. Este proceso reduce la eficiencia de la fotosíntesis, reduciendo potencialmente la producción fotosintética en un 25% en plantas C 3 . [1] La fotorrespiración involucra una red compleja de reacciones enzimáticas que intercambian metabolitos entre cloroplastos , peroxisomas de las hojas y mitocondrias .

La reacción de oxigenación de RuBisCO es un proceso derrochador porque el 3-fosfoglicerato se crea a una tasa menor y con un coste metabólico mayor en comparación con la actividad de la carboxilasa de RuBP . Si bien el ciclo del carbono fotorrespiratorio da como resultado la formación de G3P eventualmente, alrededor del 25% del carbono fijado por la fotorrespiración se vuelve a liberar como CO 2 [2] y nitrógeno, como amoníaco . Luego, el amoníaco debe desintoxicarse con un coste sustancial para la célula. La fotorrespiración también implica un coste directo de un ATP y un NAD(P)H .

Si bien es común referirse a todo el proceso como fotorrespiración, técnicamente el término se refiere únicamente a la red metabólica que actúa para rescatar los productos de la reacción de oxigenación (fosfoglicolato).

Reacciones fotorrespiratorias

FotorrespiraciónDe izquierda a derecha: cloroplasto , peroxisoma y mitocondria.

La adición de oxígeno molecular a la ribulosa-1,5-bisfosfato produce 3-fosfoglicerato (PGA) y 2-fosfoglicolato (2PG o PG). El PGA es el producto normal de la carboxilación y entra productivamente en el ciclo de Calvin . Sin embargo, el fosfoglicolato inhibe ciertas enzimas implicadas en la fijación fotosintética del carbono (por lo que a menudo se dice que es un "inhibidor de la fotosíntesis"). [3] También es relativamente difícil de reciclar: en las plantas superiores se recupera mediante una serie de reacciones en el peroxisoma , las mitocondrias y nuevamente en el peroxisoma , donde se convierte en glicerato . El glicerato vuelve a entrar en el cloroplasto y por el mismo transportador que exporta glicolato . Un costo de 1 ATP está asociado con la conversión a 3-fosfoglicerato (PGA) ( fosforilación ), dentro del cloroplasto , que luego es libre de volver a entrar en el ciclo de Calvin.

Esta vía metabólica está asociada a varios costes: la producción de peróxido de hidrógeno en el peroxisoma (asociada a la conversión de glicolato en glioxilato). El peróxido de hidrógeno es un oxidante peligrosamente fuerte que debe ser descompuesto inmediatamente en agua y oxígeno por la enzima catalasa . La conversión de glicina de 2× 2 carbonos en serina de 1× C 3 en las mitocondrias por la enzima glicina-descarboxilasa es un paso clave, que libera CO 2 , NH 3 y reduce NAD a NADH. Por tanto, un CO
2
Se produce una molécula por cada dos moléculas de O
2
(dos derivadas de RuBisCO y una de oxidaciones peroxisomales). La asimilación del NH 3 se produce a través del ciclo GS – GOGAT , con un coste de un ATP y un NADPH.

Las cianobacterias tienen tres vías posibles a través de las cuales pueden metabolizar el 2-fosfoglicolato. No pueden crecer si se eliminan las tres vías, a pesar de tener un mecanismo de concentración de carbono que debería reducir drásticamente la tasa de fotorrespiración (ver más abajo). [4]

Especificidad del sustrato de RuBisCO

Actividad oxigenasa de RuBisCO

La reacción oxidativa del ciclo fotosintético del carbono está catalizada por la actividad de la oxigenasa RuBP :

RuBP + O
2
→ Fosfoglicolato + 3-fosfoglicerato + 2 H+

Durante la catálisis por RuBisCO, se forma un intermediario "activado" (un intermediario enediol) en el sitio activo de RuBisCO. Este intermediario puede reaccionar con CO
2
o O
2
Se ha demostrado que la forma específica del sitio activo de RuBisCO actúa para estimular las reacciones con CO
2
Aunque hay una tasa de "fallas" significativa (~25% de las reacciones son de oxigenación en lugar de carboxilación), esto representa una importante ventaja para el CO
2
, cuando se tiene en cuenta la abundancia relativa de los dos gases: en la atmósfera actual, O
2
es aproximadamente 500 veces más abundante y en solución O
2
es 25 veces más abundante que el CO
2
. [5]

La capacidad de RuBisCO para especificar entre los dos gases se conoce como su factor de selectividad (o Srel), y varía entre especies, [5] siendo las angiospermas más eficientes que otras plantas, pero con poca variación entre las plantas vasculares . [6]

Una explicación sugerida de la incapacidad de RuBisCO para discriminar completamente entre CO
2
y O
2
es que es una reliquia evolutiva: [ cita requerida ] La atmósfera primitiva en la que se originaron las plantas primitivas contenía muy poco oxígeno, la evolución temprana de RuBisCO no se vio influenciada por su capacidad para discriminar entre O
2
y CO
2
. [6]

Condiciones que afectan la fotorrespiración

Las tasas de fotorrespiración se ven afectadas por:

Disponibilidad de sustrato alterada: reducción de CO2o aumento de O2

Los factores que influyen en esto incluyen la abundancia atmosférica de los dos gases, el suministro de gases al sitio de fijación (es decir, en plantas terrestres: si los estomas están abiertos o cerrados), la duración de la fase líquida (hasta dónde deben difundirse estos gases a través del agua para llegar al sitio de reacción). Por ejemplo, cuando los estomas están cerrados para evitar la pérdida de agua durante la sequía : esto limita el suministro de CO 2 , mientras que el O
2
La producción de CO2 en la hoja continuará. En las algas (y en las plantas que realizan la fotosíntesis bajo el agua), los gases tienen que difundirse a distancias significativas a través del agua, lo que da como resultado una disminución de la disponibilidad de CO2 en relación con el O2.
2
Se ha pronosticado que el aumento de las concentraciones ambientales de CO 2 previstas para los próximos 100 años puede reducir la tasa de fotorrespiración en la mayoría de las plantas en alrededor del 50% [ cita requerida ] . Sin embargo, a temperaturas superiores al óptimo térmico fotosintético, los aumentos en la tasa de renovación no se traducen en una mayor asimilación de CO 2 debido a la menor afinidad de la Rubisco por el CO 2 . [7]

Aumento de temperatura

A temperaturas más altas, RuBisCO es menos capaz de discriminar entre CO 2 y O
2
Esto se debe a que el intermediario enediol es menos estable. El aumento de las temperaturas también reduce la solubilidad del CO 2 , lo que reduce la concentración de CO 2 en relación con el O
2
en el cloroplasto .

Adaptación biológica para minimizar la fotorrespiración

El maíz utiliza la vía C 4 , minimizando la fotorrespiración.

La gran mayoría de las plantas son C3, lo que significa que fotorrespiran cuando es necesario. Ciertas especies de plantas o algas tienen mecanismos para reducir la absorción de oxígeno molecular por parte de RuBisCO. Estos se conocen comúnmente como mecanismos de concentración de carbono (CCM), ya que aumentan la concentración de CO 2 de modo que es menos probable que RuBisCO produzca glicolato a través de la reacción con O
2
.

Mecanismos bioquímicos de concentración de carbono

Los CCM bioquímicos concentran dióxido de carbono en una región temporal o espacial, a través del intercambio de metabolitos . La fotosíntesis de C 4 y CAM utiliza la enzima fosfoenolpiruvato carboxilasa (PEPC) para agregar CO
2
a un azúcar de 4 carbonos. El PEPC es más rápido que el RuBisCO y más selectivo para el CO
2
.

do4

Las plantas C 4 capturan dióxido de carbono en sus células del mesófilo (utilizando una enzima llamada fosfoenolpiruvato carboxilasa que cataliza la combinación de dióxido de carbono con un compuesto llamado fosfoenolpiruvato (PEP)), formando oxaloacetato. Este oxaloacetato luego se convierte en malato y se transporta a las células de la vaina del haz (sitio de fijación de dióxido de carbono por RuBisCO) donde la concentración de oxígeno es baja para evitar la fotorrespiración. Aquí, el dióxido de carbono se elimina del malato y se combina con RuBP por RuBisCO de la manera habitual, y el ciclo de Calvin continúa de manera normal. El CO
2
Las concentraciones en la vaina del haz son aproximadamente 10 a 20 veces más altas que la concentración en las células del mesófilo. [6]

Esta capacidad de evitar la fotorrespiración hace que estas plantas sean más resistentes que otras plantas en ambientes secos y cálidos, en los que los estomas están cerrados y los niveles internos de dióxido de carbono son bajos. En estas condiciones, la fotorrespiración ocurre en las plantas C4 , pero a un nivel mucho menor en comparación con las plantas C3 en las mismas condiciones. Las plantas C4 incluyen la caña de azúcar , el maíz y el sorgo .

CAM (Metabolismo ácido de las crasuláceas)

Gráfico nocturno de CO2 absorbido por una planta CAM

Las plantas CAM, como los cactus y las plantas suculentas , también utilizan la enzima PEP carboxilasa para capturar dióxido de carbono, pero solo por la noche. El metabolismo ácido de las crasuláceas permite a las plantas realizar la mayor parte de su intercambio de gases en el aire más fresco de la noche, secuestrando carbono en azúcares de 4 carbonos que pueden liberarse a las células fotosintéticas durante el día. Esto permite a las plantas CAM minimizar la pérdida de agua ( transpiración ) al mantener los estomas cerrados durante el día. Las plantas CAM suelen mostrar otras características de ahorro de agua, como cutículas gruesas, estomas con pequeñas aberturas y, por lo general, pierden alrededor de 1/3 de la cantidad de agua por CO
2
arreglado. [8]


do2

En las plantas C 2 , las mitocondrias de las células del mesófilo no tienen glicina descarboxilasa (GDC).

La fotosíntesis de C2 (también llamada lanzadera de glicina y bomba de CO2 fotorrespiratoria ) es una CCM que funciona haciendo uso de la fotorrespiración, en lugar de evitarla. Realiza la refijación de carbono al retrasar la descomposición de la glicina fotorrespirada, de modo que la molécula se transporta desde el mesófilo a la vaina del haz . Una vez allí, la glicina se descarboxila en las mitocondrias como de costumbre, liberando CO2 y concentrándolo al triple de la concentración habitual. [9]

Aunque tradicionalmente se entiende que la fotosíntesis de C2 es un paso intermedio entre C3 y C4 , una amplia variedad de linajes de plantas terminan en la etapa C2 sin seguir evolucionando, lo que demuestra que se trata de un estado estable evolutivo propio. Es posible que sea más fácil introducir C2 en los cultivos, ya que el fenotipo requiere menos cambios anatómicos para producirse. [ 9]

Algas

Se han publicado algunos informes sobre algas que llevan a cabo un proceso bioquímico de concentración de CO2: el transporte de metabolitos dentro de células individuales para concentrar CO2 en una zona. Este proceso no se entiende del todo. [10]

Mecanismos biofísicos de concentración de carbono

Este tipo de mecanismo de concentración de carbono (MCC) depende de un compartimento contenido dentro de la célula al que se transporta el CO2 y donde la RuBisCO se expresa en gran medida. En muchas especies, los MCC biofísicos solo se inducen en concentraciones bajas de dióxido de carbono. Los MCC biofísicos son más antiguos evolutivamente que los MCC bioquímicos. Existe cierto debate sobre cuándo evolucionaron por primera vez los MCC biofísicos, pero es probable que haya sido durante un período de bajo dióxido de carbono, después del Gran Evento de Oxigenación (hace 2.400 millones de años). Bajo CO
2
Los períodos ocurrieron alrededor de 750, 650 y 320–270 millones de años atrás. [11]

Algas eucariotas

En casi todas las especies de algas eucariotas ( las Chloromonas son una notable excepción), tras la inducción del CCM, aproximadamente el 95 % de RuBisCO se concentra densamente en un único compartimento subcelular: el pirenoide . El dióxido de carbono se concentra en este compartimento mediante una combinación de bombas de CO2, bombas de bicarbonato y anhidrasas carbónicas . El pirenoide no es un compartimento delimitado por una membrana, sino que se encuentra dentro del cloroplasto, a menudo rodeado por una vaina de almidón (que no se cree que cumpla una función en el CCM). [12]

Cornamentas

Ciertas especies de antoceronte son las únicas plantas terrestres que se sabe que tienen un CCM biofísico que implica la concentración de dióxido de carbono dentro de los pirenoides en sus cloroplastos.

Cianobacterias

Los CCM de las cianobacterias son similares en principio a los que se encuentran en las algas eucariotas y las antocerotas, pero el compartimento en el que se concentra el dióxido de carbono tiene varias diferencias estructurales. En lugar del pirenoide, las cianobacterias contienen carboxisomas , que tienen una cubierta proteica, y proteínas de enlace que empaquetan RuBisCO en su interior con una estructura muy regular. Los CCM de las cianobacterias se comprenden mucho mejor que los que se encuentran en los eucariotas , en parte debido a la facilidad de manipulación genética de los procariotas .

Posible finalidad de la fotorrespiración

La reducción de la fotorrespiración puede no resultar en mayores tasas de crecimiento para las plantas. La fotorrespiración puede ser necesaria para la asimilación de nitrato del suelo. Por lo tanto, una reducción de la fotorrespiración por ingeniería genética o debido al aumento del dióxido de carbono atmosférico puede no beneficiar a las plantas como se ha propuesto. [13] Varios procesos fisiológicos pueden ser responsables de vincular la fotorrespiración y la asimilación de nitrógeno. La fotorrespiración aumenta la disponibilidad de NADH, que es necesario para la conversión de nitrato a nitrito . Ciertos transportadores de nitrito también transportan bicarbonato , y se ha demostrado que el CO 2 elevado suprime el transporte de nitrito a los cloroplastos. [14] Sin embargo, en un entorno agrícola, reemplazar la vía de fotorrespiración nativa con una vía sintética diseñada para metabolizar el glicolato en el cloroplasto resultó en un aumento del 40 por ciento en el crecimiento del cultivo. [15] [16] [17]

Aunque la fotorrespiración es mucho menor en las especies C 4 , sigue siendo una vía esencial: los mutantes sin metabolismo funcional del 2-fosfoglicolato no pueden crecer en condiciones normales. Se ha demostrado que un mutante acumula rápidamente glicolato. [18]

Aunque las funciones de la fotorrespiración siguen siendo controvertidas, [19] se acepta ampliamente que esta vía influye en una amplia gama de procesos, desde la bioenergética, la función del fotosistema II y el metabolismo del carbono hasta la asimilación y respiración del nitrógeno. La reacción de la oxigenasa de RuBisCO puede prevenir el agotamiento del CO 2 cerca de sus sitios activos [20] y contribuye a la regulación de la concentración de CO 2 en la atmósfera [21]. La vía fotorrespiratoria es una fuente importante de peróxido de hidrógeno ( H
2
Oh
2
) en las células fotosintéticas. A través de H
2
Oh
2
La fotorrespiración, gracias a la producción de nucleótidos de pirimidina y a las interacciones con nucleótidos de pirimidina, contribuye de manera fundamental a la homeostasis redox celular. De este modo, influye en múltiples vías de señalización, en particular, las que regulan las respuestas hormonales de las plantas que controlan el crecimiento, las respuestas ambientales y de defensa y la muerte celular programada. [19]

Se ha postulado que la fotorrespiración puede funcionar como una "válvula de seguridad", [22] evitando que el exceso de potencial reductor proveniente de un pool de NADPH sobrerreducido reaccione con el oxígeno y produzca radicales libres (oxidantes), ya que estos pueden dañar las funciones metabólicas de la célula por oxidación posterior de lípidos de membrana, proteínas o nucleótidos. Los mutantes deficientes en enzimas fotorrespiratorias se caracterizan por un alto nivel redox en la célula, [23] regulación estomática alterada, [24] y acumulación de formato . [25]

Véase también

Referencias

  1. ^ Sharkey T (1988). "Estimación de la tasa de fotorrespiración en hojas". Physiologia Plantarum . 73 (1): 147–152. doi :10.1111/j.1399-3054.1988.tb09205.x.
  2. ^ Leegood RC (mayo de 2007). "Una bienvenida desviación de la fotorrespiración". Nature Biotechnology . 25 (5): 539–40. doi :10.1038/nbt0507-539. PMID  17483837. S2CID  5015366.
  3. ^ Peterhansel C, Krause K, Braun HP, Espie GS, Fernie AR, Hanson DT, Keech O, Maurino VG, Mielewczik M, Sage RF (julio de 2013). "Ingeniería de la fotorrespiración: estado actual y posibilidades futuras". Biología de las plantas . 15 (4): 754–8. Bibcode :2013PlBio..15..754P. doi :10.1111/j.1438-8677.2012.00681.x. PMID  23121076.
  4. ^ Eisenhut M, Ruth W, Haimovich M, Bauwe H, Kaplan A, Hagemann M (noviembre de 2008). "El metabolismo fotorrespiratorio del glicolato es esencial para las cianobacterias y podría haberse transmitido endosimbióticamente a las plantas". Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América . 105 (44): 17199–204. Bibcode :2008PNAS..10517199E. doi : 10.1073/pnas.0807043105 . PMC 2579401 . PMID  18957552. 
  5. ^ ab Griffiths H (junio de 2006). "Biología vegetal: diseños sobre Rubisco". Nature . 441 (7096): 940–1. Bibcode :2006Natur.441..940G. doi :10.1038/441940a. PMID  16791182. S2CID  31190084.
  6. ^ abc Ehleringer JR, Sage RF, Flanagan LB, Pearcy RW (marzo de 1991). "Cambio climático y evolución de la fotosíntesis de C(4)". Tendencias en ecología y evolución . 6 (3): 95–9. doi :10.1016/0169-5347(91)90183-x. PMID  21232434.
  7. ^ Hermida-Carrera, Carmen; Kapralov, Máximo V; Galmés, Jeroni (21 de junio de 2016). "Propiedades catalíticas del Rubisco y respuesta a la temperatura en cultivos". Fisiología vegetal . 171 (4): 2549–61. doi : 10.1104/pp.16.01846. PMC 4972260 . PMID  27329223. 
  8. ^ Taiz L, Zeiger E (2010). "Capítulo 8: Fotosíntesis: Las reacciones del carbono: Mecanismos de concentración de carbono inorgánico: Metabolismo ácido de las crasuláceas (CAM)". Fisiología vegetal (quinta edición). Sinauer Associates, Inc., pág. 222.
  9. ^ ab Lundgren, Marjorie R. (diciembre de 2020). "Fotosíntesis de C 2 : ¿una ruta prometedora hacia la mejora de los cultivos?". New Phytologist . 228 (6): 1734–1740. doi : 10.1111/nph.16494 . PMID  32080851.
  10. ^ Giordano M, Beardall J, Raven JA (junio de 2005). "Mecanismos de concentración de CO2 en algas: mecanismos, modulación ambiental y evolución". Revisión anual de biología vegetal . 56 (1): 99–131. doi :10.1146/annurev.arplant.56.032604.144052. PMID  15862091.
  11. ^ Raven JA, Giordano M, Beardall J, Maberly SC (febrero de 2012). "Evolución de las algas en relación con el CO2 atmosférico: carboxilasas, mecanismos de concentración de carbono y ciclos de oxidación del carbono". Philosophical Transactions of the Royal Society of London. Serie B, Ciencias Biológicas . 367 (1588): 493–507. doi :10.1098/rstb.2011.0212. PMC 3248706 . PMID  22232762. 
  12. ^ Villarejo A, Martinez F, Pino Plumed M, Ramazanov Z (1996). "La inducción del mecanismo de concentración de CO2 en un mutante sin almidón de Chlamydomonas reinhardtii". Physiologia Plantarum . 98 (4): 798–802. doi :10.1111/j.1399-3054.1996.tb06687.x.
  13. ^ Rachmilevitch S, Cousins ​​AB, Bloom AJ (agosto de 2004). "La asimilación de nitrato en los brotes de las plantas depende de la fotorrespiración". Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América . 101 (31): 11506–10. Bibcode :2004PNAS..10111506R. doi : 10.1073/pnas.0404388101 . PMC 509230 . PMID  15272076. 
  14. ^ Bloom AJ, Burger M, Rubio Asensio JS, Cousins ​​AB (mayo de 2010). "El enriquecimiento con dióxido de carbono inhibe la asimilación de nitrato en trigo y Arabidopsis". Science . 328 (5980): 899–903. Bibcode :2010Sci...328..899B. doi :10.1126/science.1186440. PMID  20466933. S2CID  206525174.
  15. ^ South PF, Cavanagh AP, Liu HW, Ort DR (enero de 2019). "Las vías metabólicas del glicolato sintético estimulan el crecimiento y la productividad de los cultivos en el campo". Science . 363 (6422): eaat9077. doi : 10.1126/science.aat9077 . PMC 7745124 . PMID  30606819. 
  16. ^ Timmer J (7 de diciembre de 2017). «Ahora podemos diseñar la enzima más importante del planeta». Ars Technica . Consultado el 5 de enero de 2019 .
  17. ^ Timmer J (3 de enero de 2019). "Reparar la fotosíntesis diseñándola para reciclar un error tóxico". Ars Technica . Consultado el 5 de enero de 2019 .
  18. ^ Zabaleta E, Martin MV, Braun HP (mayo de 2012). "¿Un mecanismo de concentración de carbono basal en las plantas?". Plant Science . 187 : 97–104. doi :10.1016/j.plantsci.2012.02.001. hdl : 11336/13266 . PMID  22404837. S2CID  25371100.
  19. ^ ab Foyer CH, Bloom AJ, Queval G, Noctor G (2009). "Metabolismo fotorrespiratorio: genes, mutantes, energía y señalización redox". Revisión anual de biología vegetal . 60 (1): 455–84. doi :10.1146/annurev.arplant.043008.091948. PMID  19575589.
  20. ^ Igamberdiev AU (2015). "Control de la función de la Rubisco a través del equilibrio homeostático del suministro de CO2". Frontiers in Plant Science . 6 : 106. doi : 10.3389/fpls.2015.00106 . PMC 4341507 . PMID  25767475. 
  21. ^ Igamberdiev AU, Lea PJ (febrero de 2006). "Las plantas terrestres equilibran las concentraciones de O 2 y CO 2 en la atmósfera". Photosynthesis Research . 87 (2): 177–94. Bibcode :2006PhoRe..87..177I. doi :10.1007/s11120-005-8388-2. PMID  16432665. S2CID  10709679.
  22. ^ Stuhlfauth T, Scheuermann R, Fock HP (abril de 1990). "Disipación de energía luminosa en condiciones de estrés hídrico: contribución de la reasimilación y evidencia de procesos adicionales". Fisiología vegetal . 92 (4): 1053–61. doi :10.1104/pp.92.4.1053. PMC 1062415 . PMID  16667370. 
  23. ^ Igamberdiev AU, Bykova NV, Lea PJ, Gardeström P (abril de 2001). "El papel de la fotorrespiración en el equilibrio redox y energético de las células vegetales fotosintéticas: un estudio con un mutante de cebada deficiente en glicina descarboxilasa". Physiologia Plantarum . 111 (4): 427–438. doi :10.1034/j.1399-3054.2001.1110402.x. PMID  11299007.
  24. ^ Igamberdiev AU, Mikkelsen TN, Ambus P, Bauwe H, Lea PJ, Gardeström P (2004). "La fotorrespiración contribuye a la regulación estomática y al fraccionamiento de isótopos de carbono: un estudio con plantas de cebada, patata y Arabidopsis deficientes en glicina descarboxilasa". Photosynthesis Research . 81 (2): 139–152. Bibcode :2004PhoRe..81..139I. doi :10.1023/B:PRES.0000035026.05237.ec. S2CID  9485316.
  25. ^ Wingler A, Lea PJ, Leegood RC (1999). "Metabolismo fotorrespiratorio del glioxilato y el formato en mutantes acumuladores de glicina de la cebada y Amaranthus edulis 2". Planta . 207 (4): 518–526. Código Bibliográfico :1999Plant.207..518W. doi :10.1007/s004250050512. S2CID  34817815.

Lectura adicional