El azul del Nilo (o azul del Nilo A ) es una tinción utilizada en biología e histología . Puede usarse con células vivas o fijas y confiere un color azul a los núcleos celulares .
También se puede utilizar junto con la microscopía de fluorescencia para teñir la presencia de gránulos de polihidroxibutirato en células procarióticas o eucariotas. Al hervir una solución de azul del Nilo con ácido sulfúrico se produce rojo del Nilo (oxazona azul del Nilo).
El azul del Nilo es un tinte fluorescente . La fluorescencia se muestra especialmente en disolventes no polares con un alto rendimiento cuántico . [1]
Los máximos de absorción y emisión del azul del Nilo dependen en gran medida del pH y de los disolventes utilizados: [1]
La duración de la fluorescencia del azul del Nilo en etanol se midió como 1,42 ns. Esto es más corto que el valor correspondiente del rojo del Nilo con 3,65 ns. La duración de la fluorescencia es independiente de la dilución en el rango de 10 −3 a 10 −8 mol/L. [1]
El azul del Nilo se utiliza para la tinción histológica de preparaciones biológicas. Destaca la distinción entre lípidos neutros ( triglicéridos , ésteres de colesterilo , esteroides ) que se tiñen de rosa y ácidos ( ácidos grasos , cromolípidos, fosfolípidos ) que se tiñen de azul. [2]
La tinción con azul del Nilo, según Kleeberg, utiliza los siguientes productos químicos:
La muestra o las secciones congeladas se fijan en formaldehído , luego se sumergen durante 20 minutos en la solución de azul del Nilo o 30 segundos en azul del Nilo A (1% p/v en agua destilada) y se enjuagan con agua. Para una mejor diferenciación, se sumerge en ácido acético al 1% durante 10 a 20 minutos o 30 segundos hasta que los colores sean puros. Esto puede tardar sólo entre 1 y 2 minutos. Luego la muestra se enjuaga minuciosamente con agua (durante una o dos horas). Luego, la muestra teñida se toma en un portaobjetos y se elimina el exceso de agua. La muestra se puede embeber en glicerol o gelatina de glicerol .
Los glicéridos insaturados son de color rosa, los núcleos y las elastinas son oscuros, los ácidos grasos y diversas sustancias grasas y mezclas de grasas son de color azul violeta. [3]
Los gránulos de PHB en las células de Pseudomonas solanacearum se pueden visualizar mediante tinción con azul de Nilo A. Los gránulos de PHB en los frotis teñidos se observan con un microscopio de epifluorescencia en inmersión en aceite , con un aumento de 1000 veces; bajo una longitud de onda de excitación de 450 nm, muestran una fuerte fluorescencia naranja. [4]
El azul del Nilo también se utiliza en una variedad de formulaciones comerciales de tinción de ADN utilizadas para la electroforesis de ADN . [5] Como no requiere transiluminación UV para visualizarse en un gel de agarosa como ocurre con el bromuro de etidio , se puede utilizar para observar el ADN a medida que se separa y también como tinte para ayudar en la extracción del ADN en gel. fragmentos sin sufrir daños por irradiación UV.
Los derivados del azul del Nilo son fotosensibilizadores potenciales en la terapia fotodinámica de tumores malignos . Estos colorantes se agregan en las células tumorales, especialmente en las membranas lipídicas , y/o están secuestrados y concentrados en orgánulos subcelulares . [6]
Con el derivado del azul del Nilo N -etil-azul del Nilo (EtNBA), los tejidos normales y premalignos en experimentos con animales pueden distinguirse mediante espectroscopia de fluorescencia en imágenes de fluorescencia. EtNBA no muestra efectos fototóxicos . [7]
El azul del Nilo y los colorantes de naftoxazinio relacionados se pueden preparar mediante condensación catalizada por ácido de 5-(dialquilamino)-2-nitrosofenoles con 1-naftilamina , 3-(dialquilamino)fenoles con 4-nitroso-1-naftilaminas N -alquiladas o N , N -dialquil-1,4-fenilendiaminas con 4-(dialquilamino)-1,2-naftoquinonas. Alternativamente, el producto de una condensación catalizada por ácido de 4-nitroso- N , N -dialquilanilina con 2-naftol (una sal de 9-(dialquilamino)benzo[ a ]fenoxazin-7-io) se puede oxidar en presencia de una amina, instalando un segundo sustituyente amino en la posición 5 del sistema benzo[ a ]fenoxazinio. [8] El siguiente esquema ilustra el primero de estos cuatro enfoques, que conducen al perclorato azul del Nilo:
