El receptor 2 de leucotrienos B4 , también conocido como BLT2 , receptor BLT2 y BLTR2 , es una proteína integral de membrana codificada por el gen LTB4R2 en humanos y el gen Ltbr2 en ratones. [5] [6] [7]
Descubierto varios años después del receptor 1 de leucotrienos B4 (BLT1), el receptor BLT2 se une al leucotrieno B4 (LTB4) con una afinidad mucho menor que el receptor BLT1 y, por lo tanto, se le ha denominado receptor LTB4 de baja afinidad . Algún tiempo después de su descubrimiento inicial, se demostró que el receptor BLT2 se une y se activa mediante varios otros metabolitos del ácido araquidónico, uno de los cuales, el ácido 12-hidroxiheptadecatrienoico (12-HHT), tiene una afinidad entre 10 y 100 veces mayor que la del receptor BLT2. LTB4; El 12-HHT no logra unirse ni activar los receptores BLT1. Si bien los receptores BLT2 tienen algunas acciones similares a las de los receptores BLT1, tienen otras acciones que se oponen claramente a las de BLT1 en la regulación de la inflamación y las respuestas alérgicas; Los receptores BLT2 también tienen acciones que se extienden más allá de las de los receptores BLT1. Los estudios de laboratorio, en animales y otros estudios preclínicos sugieren que los receptores BLT2 pueden estar implicados no sólo en la inflamación y la alergia sino también en el cáncer humano.
BLT2 es un receptor de superficie celular que funciona reconociendo, uniéndose y mediando respuestas a un conjunto particular de moléculas mensajeras o ligandos . Estos ligandos mensajeros son cualquiera de una variedad de metabolitos del ácido araquidónico estructuralmente diferentes producidos y liberados por células cercanas para actuar como señales paracrinas para coordinar respuestas entre células o señales autocrinas para modular las respuestas de sus células madre. [ cita necesaria ]
Varios años después de la identificación de un receptor de leucotrieno B4 (LTB4) denominado BLT1 o BLTR1 y codificado por el gen LTB4R1, [8] Shimizu y sus colegas identificaron un segundo receptor LTB4, BLT2 o BLTR2, codificado por el gen LTB4R2. [9] LTBR1 y LTBR2 codifican proteínas con una identidad de aminoácidos del 45% que pertenecen a la superfamilia de receptores acoplados a proteína G. Los dos genes forman un grupo en el cromosoma 14 humano y de ratón; en humanos, pero no en ratones, este grupo tiene una configuración muy inusual en el sentido de que el marco de lectura abierto de LTBR2 se superpone al promotor (genética) y a la región 5' no traducida de LTBR1. [9] [10] Se desconoce la importancia de esta superposición. También se ha demostrado que monos, ratas y perros expresan ortólogos de LTB4R2 . [11]
Se han clonado a partir de embriones de pez cebra dos receptores similares a BLT2, Blt2a y Blt2b, con un 49% de identidad de aminoácidos entre sí y un 34% y 29%, respectivamente, de identidades de aminoácidos con respecto al BLT2 humano . [11] La última cita presenta un árbol filogénico sobre la relación de aminoácidos de estos dos receptores, así como los de humanos, monos, perros, ratas y ratones entre sí.
Los receptores BLT2, similares a los receptores BLT1, son receptores acoplados a proteína G que, cuando se unen a un ligando, activan proteínas G que contienen la subunidad alfa Gi y, por lo tanto, son inhibidas por la toxina pertussis o la subunidad alfa Gq y, por lo tanto, no son inhibidas por la toxina pertussis. (La sensibilidad a la toxina de la tos ferina es una prueba importada para los enlaces del receptor de la proteína G). Los receptores BLT2 estimulan las células hasta alcanzar concentraciones de iones de calcio citosólico transitoriamente elevadas, activando así moléculas de señalización intracelular activadas por calcio; también estimula a las células para que activen las quinasas reguladas por señales extracelulares (ERK), la proteína quinasa B (también conocida como Akt), las quinasas N-terminales c-Jun (JNK), la proteína Janus quinasa (JAK) - STAT (es decir, transductor y activador de señales ). de transcripción, NADPH oxidasa (NOX) y NF-κB. Una importante vía de activación celular implica la activación del receptor BLT2 de NOX2 o NOX1 con la posterior producción de especies reactivas de oxígeno que a su vez activan la función inductora de transcripción de NF-κB. [12] [13] [14]
El receptor BLT2 humano se expresa en una amplia gama de tejidos, incluidos el bazo, los leucocitos sanguíneos, el hígado, los ovarios, el páncreas, el corazón, la próstata, los testículos, el intestino delgado, los riñones, los pulmones, el colon, el timo, los músculos y la placenta; esto contrasta con el receptor BLT1, que parece tener un patrón de expresión más limitado que incluye principalmente leucocitos y linfocitos sanguíneos circulantes. [15] [16] [17] El receptor Blt2 de ratón también muestra un patrón de distribución más limitado que el receptor BLT2 humano, mostrando una expresión apreciable en el intestino delgado y la piel, y una expresión baja en el colon y el bazo. [17] [18]
Aunque inicialmente se definió como un receptor de baja afinidad para el producto 5-lipoxigenasa del metabolismo del ácido araquidónico, LTB4, BLT2 se une y es activado no solo por LTB4 sino también por la vía de la enzima cicloxigenasa - tromboxano sintasa del metabolismo del ácido araquidónico, ácido 12-hidroxiheptadecatrienoico (12 -HHT), así como por tres productos de la vía de la 12-lipoxigenasa del metabolismo del ácido araquidónico, 12( S )-HETE, 12( S )-HpETE y 12( R )-HETE (ver Ácido 12-hidroxieicosatetraenoico , por un miembro de la vía de la 15-lipoxigenasa del metabolismo del ácido araquidónico, 15( S )-HETE (ver Ácido 15-hidroxiicosatetraenoico ), y por otro miembro de la familia LTB4 de metabolitos del ácido araquidónico, 20-hidroxi-LTB4; las afinidades de unión de estos 7 metabolitos son ~1000, 100, 10, 10, 3, 3 y 1, respectivamente [19] [20] Por lo tanto, el ligando descubierto más recientemente, el 12-HHT, no se une a los receptores BLT1. , muestra con diferencia la mayor afinidad de todos los ligandos probados por los receptores BLT2. Entre estos 7 ligandos, por el contrario, BLT1 se une y es activado solo por LTB4 y 20-hidroxi-LTB4.
Los dos receptores similares a BLT4 en el pez cebra, Blt2a y Blt2b, cuando se transfectan en células de ovario de hámster chino , median aumentos en las respuestas del calcio citosólico tanto al 12-HHT como al LTB4, siendo el 12-HHT entre 500 y 1000 veces más fuerte que el LTB4 en haciéndolo; El 12-HHT está inactivo en este ensayo en células de ovario de hámster chino creadas para expresar el receptor 1 LTB4 del pez cebra (Blt1). [11] Por lo tanto, el receptor BLT1 exhibe una especificidad exquisita, uniéndose al ácido 5( S ),12( R )-dihidroxi-6 Z ,8 E ,10 E ,14 Z -eicosatetraenoico (es decir, LTB4) pero no a 12( S ) o 12( S ) de LTB4. 6 isómeros Z , mientras que el receptor BLT2 exhibe un patrón de unión que incluye estereoisómeros S y R , metabolitos del ácido araquidónico compuestos de 17 y 20 carbonos y metabolitos con un residuo hidroxilo en la posición 5, 12 o 15. El patrón de unión de BLT2 sólo puede considerarse promiscuo. [10] Este patrón de unión promiscuo complica la determinación de qué metabolito del ácido araquidónico y qué oxigenasa formadora de metabolitos (es decir, ciclooxigenasa o lipoxigenasa) es responsable de cualquier respuesta dependiente de BLT2. Estas determinaciones son a menudo críticas para definir todos los mecanismos involucrados, así como los medios para inhibir o promover, las funciones de BLT2.
Debido a las diferencias estructurales bastante grandes en los ligandos conocidos del receptor BLT2, puede haber otros ligandos aún no definidos que se unen a este receptor y lo activan. Por ejemplo, inicialmente se sugirió que el receptor 2 del péptido formilo (receptor FPL2) era un segundo receptor con ~70 % de identidad de aminoácidos con respecto al receptor 1 del péptido formilo (receptor FPL1). Ambos tipos de receptores se unen y son activados por una serie de factores quimiotácticos de oligopéptidos formilados , pero el receptor FLP2 parece ser un receptor promiscuo en el sentido de que también se une y es activado por lipoxinas y resolvinas , así como por varios polipéptidos y proteínas. El receptor FLP2 parece participar principalmente en amortiguar y resolver las respuestas inflamatorias, acciones que parecen ser diametralmente opuestas a las acciones proinflamatorias de los receptores FLP1.
La expresión de los receptores Blt2 en ratones parece limitada a menos tejidos que el receptor BLT2 en humanos; Blt1 se expresa con fuerza sólo en el intestino delgado y la piel del ratón. [17] [18] [21] Los estudios con ratones knockout para LTB4R2 , por lo tanto, pueden revelar un papel más limitado para el receptor BLT2 que el de los humanos.
Los ratones knockout para el receptor BLT2 exhiben eosinofilia alérgica atenuada en las vías respiratorias inducida por ovoalbúmina y contenido de interleucina 13 (IL-13) en su líquido de lavado broncoalveolar en comparación con ratones de tipo salvaje y las células T CD4 positivas aisladas de los ratones knockout mostraron una reducción en la producción de IL-13, pero no hubo cambios en la respuesta de broncoespasmo a la ovoalbúmina en estos ratones. [22] No se identificaron los ligandos del receptor BLT2 ni las vías metabólicas que producen estos ligandos. Estos resultados indican que el receptor Blt2 funciona para promover la inflamación de base eosinofílica que acompaña y puede contribuir a la enfermedad pulmonar alérgica; este efecto puede deberse en parte a su capacidad para reducir la producción de la citoquina proalérgica IL-13; el receptor no parece ser responsable del broncoespasmo inducido por alérgenos. El receptor BLT2 podría desempeñar un papel similar en enfermedades alérgicas humanas como el asma .
En respuesta a la administración oral del sulfato sódico de dextrano inductor de inflamación , los ratones con inactivación del receptor Blt2, en comparación con los ratones de tipo salvaje o con la inactivación del receptor Blt1, exhibieron: a) inflamación de la colitis y pérdida de peso corporal más graves; b) aumento de la expresión de ARNm para las citocinas proinflamatorias interferón-γ , IL1B e interleucina 6 , dos quimiocinas proinflamatorias, a saber, ligando de quimiocina 9 (también denominado ligando de quimiocina 10 ) y quimiocina 19 ( CCL19 ), y metaloproteinasas -3 , -10 y -13 en tejidos del colon inflamados; c) mayor acumulación de macrófagos productores de interferón en los tejidos del colon afectados; d) aumento de la fosforilación del transductor de señal y activador de la transcripción 3 (es decir, STAT3 ) en las criptas del tejido del colon afectado; y e) integridad reducida de la mucosa del colon y función de barrera según se deduce de los efectos de estudios in vitro sobre el impacto de la expresión del receptor BLT2 en la fuga de FITC-dextrano en células de riñón II canino Madin-Darby. Estos resultados sugieren que los receptores Blt2 normalmente funcionan para suprimir la inflamación del colon en ratones; Según su contenido en masa en los tejidos del colon afectados, el 12-HHT parece, al menos en parte, responsable de mantener esta función mediante la estimulación de los receptores Blt2. [23] Un papel similar para el eje 12-HHT-BLT2 podría ocurrir en humanos y ser relevante para enfermedades como la colitis ulcerosa y la enfermedad de Crohn .
La desactivación del gen LTB4R1 proporciona una protección completa contra la inflamación de las articulaciones que se produce en un modelo de ratón de artritis reumatoide (artritis inducida por colágeno); La doble desactivación de los genes LTB4R1 y LTB4R2 no alteró la protección completa proporcionada por la desactivación de LTB4R1. [24] Se observaron más pruebas del papel de BLT2 en la artritis en un modelo de artritis por transferencia de suero donde la pérdida de BLT2 provocó un debilitamiento de la inflamación y daño a las articulaciones. [25]
Por tanto, los estudios knockout disponibles hasta la fecha asignan a los receptores BLT2 un papel protector para amortiguar ciertas respuestas alérgicas e inflamatorias; este papel contrasta con la asignación de los receptores BLT1 como contribuyentes a ambos tipos de respuestas. [24] [26] Se necesitan más estudios para determinar si los receptores BLT2 protegen contra otras respuestas alérgicas e inflamatorias y si funcionan de manera similar en humanos.
La sobreexpresión de los receptores BLT2 en ratones transgénicos Bltr2 mejora la capacidad de LTB4 y 12-HETE inyectados por vía subcutánea para estimular la formación de nuevos vasos sanguíneos en la piel. Los estudios indican que las acciones de ambos ligandos fueron mediadas por receptores Blt2 y que el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) estimuló la expresión de BLT2 y la producción de 12-HETE en células endoteliales de la vena umbilical humana (HUVEC), y que el receptor BLT2 o la 12-lipoxigenasa disminuyen inhibió la angiogénesis inducida por VEGF en ensayos in vitro. [27] Estos resultados sugieren que los receptores BLT2 desempeñan funciones críticas en el desarrollo de la neovascularización inducida por VEGF y son de particular interés para las funciones de los receptores BLT2 en el crecimiento y la propagación de cánceres y en la inflamación (ver más abajo).
Los mastocitos de la médula ósea de ratón y los eosinófilos humanos exhiben respuestas de quimiotaxis in vitro al 12-HHT. [28] [29] Dado que ambos tipos de células están implicados en reacciones alérgicas, esto sugiere que los receptores BLT2 podrían contribuir a las respuestas alérgicas en ratones y humanos. Sin embargo, en un modelo de ratón de enfermedad alérgica de las vías respiratorias inducida por ovoalbúmina: a) 12-HHT y sus metabolitos ciclooxigenasa acompañantes, prostaglandina E2 y prostaglandina D2 , pero no otros 12 metabolitos de lipoxigenasa o ciclooxigenasa mostraron un aumento estadísticamente significativo en los niveles del líquido de lavado broncoalveolar después provocación intratraqueal con ovoalbúmina; b) sólo 12-HHT, entre los ligandos activadores del receptor BLT2 monitorizados (es decir, LTB4, el estereoisómero 12( S ) de 12-HETE y 15( S )-HETE) aumentó a un nivel capaz de activar los receptores BLT2; y c) los ratones knockout para BLT2 mostraron una respuesta muy mejorada a la exposición a ovoalbúmina. [30] Este estudio también encontró que la expresión de los receptores BLT2 se redujo significativamente en las células T CD4+ (que se sabe que median en las reacciones alérgicas) extraídas de asmáticos en comparación con los controles humanos no asmáticos. Por tanto, los receptores BLT2 suprimen la enfermedad alérgica de las vías respiratorias en ratones y pueden funcionar de manera similar en humanos. Estos estudios también permiten que los receptores BLT2 desempeñen funciones supresoras en otras enfermedades alérgicas.
El agonista del receptor BLT2 de alta afinidad, 12-HHT, estimula respuestas quimiotácticas in vitro en neutrófilos humanos , [29] lo que sugiere que este receptor, similar a los receptores BLT1, contribuye a la inflamación al reclutar neutrófilos sanguíneos circulantes en sitios de tejido alterados. [31] Otros estudios, sin embargo, indican que el papel de los receptores BLT2 en la inflamación está dirigido a otros tipos de células además de los neutrófilos y difiere mucho del de los receptores BLT1. Las células HaCaT de queratinocitos de piel humana inmortalizadas responden a la radiación ultravioleta B (UVB) generando especies reactivas de oxígeno tóxicas que a su vez hacen que las células se vuelvan apoptóticas y finalmente mueran. Esta respuesta depende del receptor BLT2 ya que a) el tratamiento tópico de la piel del ratón con un antagonista del receptor BLT2, LY255283, protege contra la apoptosis inducida por la radiación UVB; b) Los ratones transgénicos que sobreexpresan BLT2 exhiben una apoptosis cutánea más extensa en respuesta a la irradiación UVB que los ratones de tipo salvaje ; [32] yc ) 12-HHT inhibe que las células HaCaT sinteticen el mediador proinflamatorio, la interleucina-6 (IL-6), en respuesta a la radiación UVB. [33] Además, los ratones con inactivación del receptor BLT2 presentan una respuesta de inflamación intestinal más grave al sulfato de sodio de dextrano que los ratones con inactivación del receptor BLT1 o de tipo salvaje (ver Estudios de inactivación). Así, los receptores BLT2 parecen ser responsables de suprimir la inflamación de la piel inducida por los rayos UVB y, a diferencia de los receptores BLT1, se oponen al desarrollo y, por tanto, amortiguan la gravedad de la colitis experimental en ratones.
La subfamilia Ras de pequeñas GTPasas funcionan como proteínas de transducción de señales al transmitir la presencia de estímulos extracelulares para inducir la expresión de genes que regulan la supervivencia celular, la proliferación, la diferenciación, la adherencia a la matriz extracelular y la motilidad, así como factores que se liberan para promover nuevas formación de vasos sanguíneos (es decir, neovascularización ) y alteración de la matriz extracelular; Los tres miembros de esta subfamilia, KRAS , NRAS (es decir, homólogo del oncogén viral RAS del neuroblastoma ) y HRAS , desarrollan mutaciones puntuales para convertirse en oncogenes que impulsan el crecimiento y la propagación de alrededor del 20% de todos los cánceres humanos. [34] [35] Los niveles más altos de mutaciones de Ras se encuentran en el adenocarcinoma de páncreas (90%), colon (50%) y pulmón (30%) [36] Bos, 1989).
Los oncogenes ras pueden estimular el metabolismo del ácido araquidónico: a) HRAS, en una línea celular epitelial intestinal de rata, y KRAS, en una línea celular epitelial de pulmón de rata, regulan positivamente la expresión de COX2 y la síntesis de prostaglandinas; [37] [38] [39] b) HRAS induce 12-lipoxigenasa en las células A431 del carcinoma epidermoide humano ; [40] yc ) HRAS estimula la expresión de la 5-lipoxigenasa, la proteína activadora de la 5-lipoxigenasa , los receptores LTB4 y BLT2 de rata2 y líneas celulares de fibroblastos de rata , aumentando así la capacidad de formación de tumores de esta última línea celular en ratones atímicos. [41] Estos estudios sugieren que los metabolitos de la ciclooxigenasa, 5-lipoxigenasa y 12-lipoxigenasa, es decir, 12-HHT, LTB4 y 12-HTE, respectivamente, pueden actuar a través de los receptores BLT2 para contribuir al crecimiento y la propagación de los cánceres iniciados. y/o Ras oncogénico y posiblemente otros oncogenes. Esto está respaldado por los hallazgos de que BLT2 se expresa anormalmente en muchos cánceres humanos que al mismo tiempo sobreexpresan estas vías de metabolización del ácido araquidónico, a saber, adenoma folicular de tiroides , carcinoma de células renales , carcinoma de células transicionales de vejiga urinaria , carcinoma de células escamosas de esófago , adenocarcinoma de colon , cistadenocarcinoma seroso . tipo de cáncer de ovario y carcinoma de cuello uterino . [41] Otros estudios han implicado a BLT2 en estos y otros tipos de cáncer de la siguiente manera.
12-HHT estimula la línea celular de cáncer de próstata humano PC3 para activar varias vías de señalización que favorecen el crecimiento y/o la supervivencia, incluida la proteína quinasa B , la fosfoinositida 3-quinasa , la proteína quinasa C , el protooncogén tirosina-proteína quinasa Src y ( induciendo la escisión proteolítica y la liberación de un ligando para el receptor del factor de crecimiento epidérmico [EGFR] de HB-EGF ), EGFR. [42] Cuando se desprenden de las superficies, las células cultivadas de cáncer de próstata PWR-1E y PC3 no malignas mueren al activar vías de apoptosis suicidas , una reacción denominada anoikis . Esto se acompaña de una mayor expresión de los receptores BLT2, activación de la NADPH oxidasa (NOX), aumentos en la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS) mediada por NOX y activación inducida por ROS del factor de transcripción pro-supervivencia, NF-κB . La expresión ectópica y la estimulación de los receptores BLT2 por 12 ( S ) -HETE o un agonista sintético del receptor BLT2, CAY-10583, inhibe, mientras que la eliminación de genes por interferencia de ARNm o inhibición farmacológica por LY255283 mejora la respuesta anoikis de estas células al desprendimiento de la superficie. [17] A diferencia de las células PC-3, las líneas celulares de cáncer de próstata humano LNCaP y CWR22rv-1 requieren andrógenos exógenos para su supervivencia; esto imita la dependencia de andrógenos que presentan la mayoría de los cánceres de próstata humanos en sus primeras etapas sin tratamiento. Ambas líneas celulares sobreexpresan receptores BLT2 en comparación con la línea celular de próstata humana no maligna PWR-1E. El tratamiento con el antagonista del receptor BLT2, Ly255283, provocó que ambas líneas celulares se volvieran apoptóticas; Además, la eliminación del receptor BLT2 mediante ARNm de interferencia provocó la apoptosis de las células LNCaP pero no PWR-1E. El efecto aparece debido a la pérdida de la generación de NOX4 inducida por BLT2 , la consiguiente activación de NF-κB inducida por especies reactivas de oxígeno y la expresión de receptores de andrógenos estimulada por NF-κB. [43] El 12-HETE también aumenta la supervivencia de las células PC-3 al ayudar a mantener altos niveles de proteína Rb fosforilada del retinoblastoma , un efecto que reduce la capacidad de la proteína del retinoblastoma para inhibir la síntesis de ADN y, por lo tanto, la división celular. [44] Finalmente, la 12-lipoxigenasa está sobreexpresada y la masa de 12-HETE es mucho mayor en el cáncer de próstata humano que en el tejido prostático normal cercano; [45]Estos hallazgos sugieren que los receptores BLT2 operan para promover la supervivencia, el crecimiento y la propagación del cáncer de próstata humano. Aún no está claro cuál de sus ligandos 12-HHT, LTB4 y/o 12-HETE media la activación del receptor BLT2 en la enfermedad humana.
LTB4 y 12(S)-HETE estimulan la invasividad en un ensayo de invasión de Matrigel in vitro de células cancerosas de vejiga urinaria humanas 253 J-BV altamente malignas; su actividad en este ensayo se inhibe completamente mediante una inhibición farmacológica o una eliminación del ARNip de los receptores BLT2. La expresión de 5-lipoxigenasa, proteína activadora de 5-lipoxigenasa , 12-lipoxigenasa (enzimas que sintetizan LTB4 y 12(S)-HETE, respectivamente), así como LTB4 y 12(S)-HETE, se elevaron sustancialmente en estas células. El tratamiento previo de estas células con un inhibidor de los receptores BLT2 redujo su capacidad de formación de tumores después de la inyección en ratones; Las inyecciones intraperitoneales de LY255283 en los ratones también disminuyeron la capacidad de formación de metástasis de las células después de la inyección en la vejiga urinaria. Finalmente, la proteína del receptor BLT2 fue sobreexpresada por los tejidos malignos del cáncer de vejiga urinaria humana y esta expresión se asoció positivamente con la gravedad de este cáncer. La acción de los receptores BLT2, similar a sus acciones sobre las células de cáncer de próstata, parecía implicar la activación de los receptores de la vía NK-κB, especies reactivas de oxígeno, NOX. [46] [47] Estos resultados sugieren que los receptores BLT2 contribuyen a la agresividad y progresión del cáncer de vejiga urinaria humana.
En comparación con las líneas celulares de cáncer de mama humano IMR-90 no malignas y MCF-10A inmortalizadas pero no malignas, MCF -7 , ZR-75-1 , T47-D , MDA-MB-231 , MDA-MB-468 , MDA -Las líneas celulares de cáncer de mama humano MB-453 y SK-BR-3 (consulte la lista de líneas celulares de cáncer de mama ) sobreexpresan el ARNm y la proteína de BLT2, pero muestran relativamente poca expresión de ARNm de BLT1; El tratamiento de las células malignas pero no de las no malignas con un antagonista de BLT2, LY255283, pero no con un antagonista de BLT1, U75302, bloqueó la proliferación de las células en cultivo. LY255283 causó simultáneamente apoptosis en células malignas MDA-MB-468 y MDA-MB-453 con receptores de estrógeno negativos , pero no en células malignas MCF-7 y T47-D positivas para receptores de estrógeno . Dado que LY255283 también inhibe el receptor BLT1, la acción inhibidora de la apoptosis de los receptores BLT2 también se demostró al mostrar que la eliminación genética transitoria de los receptores BLT2 inducida por ARNip causó apoptosis en la línea celular MDA-MB-468 . Los receptores BLT2 se vinculan a la activación de la NADPH oxidasa , NOX1 (un sintetizador del anión superóxido que es una especie reactiva de oxígeno que, cuando se sobreproduce de manera inapropiada, causa muerte celular y lesión tisular); el consiguiente aumento de la producción de especies reactivas de oxígeno y la activación de NF-κB parecieron responsables de estos efectos dependientes del receptor BLT-2. [48] El lipopolisacárido (es decir, la endotoxina ) estimula las células MDA-MB-231 y MDA-MB-435 para aumentar su invasividad, según lo determinado con ensayos in vitro de Matrigel Invasion Chamber; este efecto aparece debido a su capacidad para inducir la sobreexpresión de los receptores BLT2, las enzimas que producen LTB4 y 12( S )-HETE, y los metabolitos clave de estas enzimas, LTB4 y 12( S )-HETE; además, la unión de estos últimos metabolitos a las células con receptores BLT2 sobreexpresados conduce a la activación de NF-κB. [49] Estos resultados indican que la interacción 12-HETE/BLT2 reduce la supervivencia de células mamarias humanas cultivadas al estimular la producción de especies reactivas de oxígeno y la activación de NF-κB.
Se propone que la transición epitelial-mesenquimal , un proceso mediante el cual las células epiteliales asumen un fenotipo mesenquimatoso, ocurra en un subconjunto de células en varios tejidos cancerosos para promover su movimiento desde el sitio del tumor hacia los vasos sanguíneos y linfáticos y, por lo tanto, formar metástasis a distancia. El cáncer de mama humano a menudo expresa y parece promovido por proteínas Ras (ver carcinogénesis y subfamilia Ras ). La expresión forzada de Ras oncogénico en células cultivadas de cáncer de mama humano MCF-10A regula notablemente los receptores BLT2 y esta regulación positiva parece esencial para la capacidad de promoción de la transición epitelial-mesenquimatosa del factor de crecimiento transformante beta en estas células; Los receptores BLT2 en estas células parecen estimular la producción de especies reactivas de oxígeno y la activación de NF-κB y, por lo tanto, pueden contribuir a la capacidad metastásica del cáncer de mama. [50]
Dado que los receptores BLT2 están significativamente elevados en el tejido de cáncer de mama humano en comparación con el tejido mamario no canceroso, [48] los estudios citados, en conjunto, indican que los receptores BLT2 promueven el crecimiento maligno, la invasividad, la metástasis y posiblemente la resistencia a los medicamentos contra el cáncer de no sólo células cultivadas de cáncer de mama humano sino también de cáncer de mama humano.
En comparación con las células de cáncer de ovario humano CAOV-3, las células de cáncer de ovario humano SKOV-3 y CAOV-3 sobreexpresan receptores BLT4, enzimas metabolizadoras LTB4 y 12-HETE, dos metabolitos clave de estas enzimas, LTB4 y 12-HETE, y STAT3 activado. También son mucho más invasivos en modelos animales. La inhibición de los receptores BLT2 por LY255283 pero no de los receptores BLT1 por U75302 y la supresión de los receptores BLT2 mediante el tratamiento con ARNip redujeron la expresión de NOX4 (es decir, NADPH oxidasa 4, la especie reactiva de oxígeno producida por esta enzima, activó STAT3, la enzima promotora de invasión, MMP 2 y la invasividad in vitro (ensayo de invasión Matrigel) de las células SKOV-3 y CAOV-3 LY255283 también inhibieron la metástasis peritoneal de las células SKOV-3 inyectadas intraperitonealmente en ratones atímicos. La estimulación de los receptores BLT4 por LTB4 y/o 12-HETE opera a través de una vía de especies de oxígeno reactivas a NOX4-STAT-3-MMP2 para promover la metástasis de células cancerosas SKOV-3 y CAOV-3 en ratones y puede actuar de manera similar para promover metástasis. en el cáncer de ovario humano.
Se encontró que la proteína del receptor BLT2 y el ARNm estaban marcadamente elevados en las neoplasias intraepiteliales pancreáticas avanzadas humanas en sus sitios primarios del páncreas, así como en los sitios de metástasis en los ganglios linfáticos ; El ARNm de BLT1 también se elevó en estos tejidos, pero en una medida ~5 veces mayor. El ARNm de ambos receptores también se expresó en una amplia gama de líneas celulares de cáncer de páncreas humano con un ARNm del receptor BLT1 ~2 veces mayor que el de BLT2. La sobreexpresión estable de BLT2 en líneas celulares de cáncer de páncreas humano AsPC-1, Colo357 y PANC-1 aumentó las tasas de crecimiento in vitro de estas células; Los agonistas específicos de BLT2 también estimularon el crecimiento de las células Colo367 y Panc-1. [52] Los receptores BLT2 mediaron la migración in vitro de células Panc-1. [53] Estos resultados permiten que los receptores BLT2 puedan contribuir al crecimiento maligno y la metástasis del cáncer de páncreas humano.
La proliferación de células de adenocarcinoma colorrectal epitelial humano Caco-2 en cultivo fue estimulada por 12-HETE e inhibida por un inhibidor algo selectivo de la 12-lipoxigenasa, la baicaleína ; El efecto estimulante del 12-HETE apareció debido a su interacción con los receptores BLT2 basada en los efectos de los inhibidores farmacológicos. [54]
El carcinoma de células escamosas de esófago sobreexpresa los receptores BLT2. [55]
El receptor BLT2 media el comportamiento de rascado con picazón inducido por la inyección intradérmica de 12-HETE en ratones. [56]
LY255283 se ha presentado como un antagonista "selectivo" del receptor BLT2. Sin embargo, este compuesto también es un agonista del receptor BLT1 y, por lo tanto, no puede usarse para discriminar entre estos dos tipos de receptores. [31] En todos los estudios que utilizaron LY255283 citado anteriormente, se utilizaron otros métodos, como la eliminación de ARNip, junto con LY255283 para identificar la dependencia de BLT2. Actualmente, no existen informes sobre antagonistas selectivos del receptor BLT2.
Este artículo incorpora texto de la Biblioteca Nacional de Medicina de Estados Unidos , que se encuentra en el dominio público .