[2]​[3]​ Un enantiómero del ofloxacino, el levofloxacino es dos veces más potente y tiene una actividad superior en contra de organismos Gram positivos, incluyendo el neumococo.

[4]​ El ofloxacino se indica para el tratamiento ciertas infecciones causadas por bacterias, como la neumonía; la bronquitis; las enfermedades venéreas y las infecciones de la próstata, la piel y las vías urinarias,[3]​ incluyendo las causadas por microorganismos con resistencia a varios antibióticos, como la Pseudomonas.

El ofloxacino también se indica en diarreas causadas por Shigella, Salmonella, Escherichia coli, o Campylobacter.

[4]​ El ofloxacino viene en una preparación ótica que es usada para tratar infecciones en el oído tanto en adultos como en niños, las infecciones crónicas del oído medio en adultos y niños con perforación del tímpano e infecciones repentinas del oído medio en niños.

Al igual que otras quinolonas, actúa al inhibir la enzima ADN girasa, encargada del empaque y desempaque del ADN durante la replicación genética de la bacteria.