La ADN girasa produce cortes de doble cadena y después son unidos por las ligasa.
La ADN girasa, como topoisomerasa, tiene una función muy importante en la modulación del estado topológico del ADN, pues regula su estructura superhelicoidal.
A diferencia de la ADN girasa, la topoisomerasa 1 corta solo una de las dos cadenas de la doble hélice del ADN; y actúa en la transcripción del ADN.
Las moléculas de la ADN girasa se desplazan a lo largo del ADN por delante de la horquilla de replicación y eliminan los superenrollamientos positivos.
La ADN girasa realiza esta tarea al cortar las dos cadenas del ADN dúplex; un segmento del ADN pasa a través de la rotura de la doble cadena hacia el otro lado y entonces se ligan los cortes de nuevo, un proceso que se lleva a cabo por liberación de energía durante la hidrólisis de ATP (trifosfato de adenosina).