Debutó como actor el 10 de septiembre de 1849, interpretando a Tressel en la obra Ricardo III.
[1][2] Se volvió famoso en el rol de Hamlet, representándolo más de 100 veces consecutivas entre 1864 y 1865.
Cuando su hermano John Wilkes Booth asesinó al presidente Abraham Lincoln, Edwin se retiró de la escena hasta 1866.
El 3 de febrero de 1869 inauguró su propio teatro,[3] vendiéndolo en 1873 a su hermano Junius.
[4] Sus interpretaciones de Hamlet, Yago y el Rey Lear le granjearon buen elogio en Inglaterra y Alemania.