La trama describe la historia del Rey Espartano Leónidas (Gerard Butler) y sus 300 guerreros espartanos que pelearon a muerte contra el "dios-rey" persa Jerjes I (Rodrigo Santoro) y su ejército de más de 100 000 soldados.

Los Éforos consultan al Oráculo y este decreta que Esparta no debe ir a la guerra durante las Carneas.

Enfadado, Leónidas parte, después aparece un emisario de Jerjes para recompensar a los Éforos por su apoyo encubierto.

Ante Leónidas se presenta Efialtes, un hombre deforme y jorobado, el cual fue salvado por su madre para no ser descartado en Esparta.

Sin embargo la esposa del monarca no está dispuesta a que su marido muera sin ayuda en las Termópilas y acepta el chantaje del político el cual consiste en tener relaciones sexuales a cambio de que este le otorgue la posibilidad de poder comparecer ante el Consejo.

El heleno rechaza el ultimátum del portavoz persa e inicia un último ataque, tirando una lanza a Jerjes e hiriéndolo en el rostro, haciéndole sangrar como prometió, por lo que el ejército persa hace valer su abrumadora ventaja y aniquila a todos los espartanos.

[7]​ Snyder fotocopió paneles de la historieta con los cuales desarrollo las tramas anteriores y siguientes al cuadro.

[8]​ Una principal excepción a la adaptación directa fue el uso del personaje de Dilios como narrador.

[9]​ Snyder también agrega la trama paralela con la cual la reina Gorgo intenta convocar el apoyo del consejo gobernante para su esposo.

[13]​ Utilizando la técnica croma, y con la ayuda de pantallas azules, Snyder rodó en los ahora desaparecidos Icestorm Studios en Montreal.

Butler declara que aunque no se sentía restringido con la dirección de Snyder, el apego a la historieta imponía ciertas limitaciones en su actuación.

Ghislain St-Pierre, quien dirigiera el equipo de artistas, describió el efecto: «Todo parece real, pero tiene un sentido áspero e ilustrativo».

[20]​ El director de la película, Zack Snyder, declara que «los sucesos son correctos en un noventa por ciento.

Los extravagantes números de Heródoto se utilizan para poblar el ejército persa, y la discusión de Plutarco sobre las mujeres griegas, específicamente las espartanas, se inserta erróneamente en el diálogo entre el embajador persa "misógino" y el rey espartano.

[33]​ Robby Eksiel, crítico griego de cine, declaró que el auditorio quedaría impresionado con la «acción digital» pero les irritaría las «ostentosas interpretaciones y los personajes unidimensionales».

[34]​ La película ha sido parodiada mayoritariamente en la escena en que Leonidas está hablando con el mensajero persa, y cuya conversación enfurece a Leónidas, que contesta la frase "This is madness..." ("Esto es una locura...") dicha por el persa con su frase "This is Sparta!!"

como respuesta, dándole una brusca patada en el pecho y lanzándolo a un gran pozo situado detrás del persa.

En 2007 se presentó la parodia 300 bolas de los Premios Hetores transmitido por primera vez en el canal Cosmovisión (en Colombia) y siendo Nominada a la Categoría Doblado.

Como muchas otras películas, la serie animada South Park muestra una parodia en el episodio 6 de su temporada 11, donde la señora Garrison lucha junto a 30 lesbianas frente a un grupo persa liderado por Jerjes, quien quiere comprar el bar que ellas frecuentan.

[36]​ Legendary Pictures ha anunciado que Frank Miller está escribiendo la novela gráfica de seguimiento y Zack Snyder estaba interesado en dirigir la adaptación, pero desde entonces ha pasado a desarrollar y dirigir El hombre de acero.

[37]​[38]​ En esta ocasión Noam Murro sustituirá tras las cámaras al realizador Zack Snyder quien ejercerá como productor y coguionista, esto último junto a Kurt Johnstad, guionista también de 300.