En microscopía , la tinción negativa es un método establecido, que se utiliza a menudo en microscopía diagnóstica, para contrastar una muestra fina con un líquido ópticamente opaco . En esta técnica, se tiñe el fondo , dejando la muestra real intacta y, por lo tanto, visible. Esto contrasta con la tinción positiva , en la que se tiñe la muestra real.
Para la microscopía de campo claro , la tinción negativa se realiza típicamente utilizando un líquido de tinta negra como nigrosina y tinta china . La muestra, como un cultivo bacteriano húmedo extendido sobre un portaobjetos de vidrio, se mezcla con la tinción negativa y se deja secar. Cuando se observan con el microscopio, las células bacterianas, y quizás sus esporas , aparecen claras contra el fondo oscuro circundante. Se ha desarrollado un método alternativo utilizando un marcador resistente al agua común para aplicar la tinción negativa. [1]
En el caso de la microscopía electrónica de transmisión , la opacidad a los electrones está relacionada con el número atómico , es decir, el número de protones. Algunas tinciones negativas adecuadas incluyen molibdato de amonio , acetato de uranilo , formato de uranilo , ácido fosfotúngstico , tetróxido de osmio , ferricianuro de osmio [ aclaración necesaria ] [2] y auroglucotionato. Estos han sido elegidos porque dispersan electrones fuertemente y también se adsorben bien a la materia biológica. Las estructuras que pueden teñirse negativamente son mucho más pequeñas que las estudiadas con el microscopio óptico. Aquí, el método se utiliza para ver virus , bacterias, flagelos bacterianos , estructuras de membrana biológica y proteínas o agregados de proteínas, que tienen todos un bajo poder de dispersión de electrones. Algunas tinciones, como el tetróxido de osmio y el ferricianuro de osmio, son muy activas químicamente. Como oxidantes fuertes, reticulan los lípidos principalmente al reaccionar con enlaces carbono-carbono insaturados y, de ese modo, fijan las membranas biológicas en su lugar en muestras de tejido y, al mismo tiempo, las tiñen. [3] [4]
La elección de la tinción negativa en la microscopía electrónica puede ser muy importante. Un estudio temprano de virus de plantas utilizando inmersiones de hojas teñidas negativamente de una planta enferma mostró solo virus esféricos con una tinción y solo virus con forma de bastón con otra. La conclusión verificada fue que esta planta sufría una infección mixta por dos virus separados. La tinción negativa tanto a nivel de microscopio óptico como de microscopio electrónico nunca debe realizarse con organismos infecciosos a menos que se sigan estrictas precauciones de seguridad. La tinción negativa suele ser un método de preparación muy suave y, por lo tanto, no reduce la posibilidad de infección del operador.
La microscopía electrónica de transmisión con tinción negativa también se ha empleado con éxito para el estudio e identificación de agregados lipídicos acuosos como liposomas lamelares (le), micelas esféricas invertidas (M) y fases cilíndricas HII hexagonales invertidas (H) (ver figura). [5]