Un portaobjetos de microscopio es una pieza delgada y plana de vidrio , típicamente de 75 por 26 mm (3 por 1 pulgadas) y aproximadamente 1 mm de espesor, que se utiliza para sostener objetos para examinarlos bajo un microscopio . Por lo general, el objeto se monta (asegura) en el portaobjetos y luego ambos se insertan juntos en el microscopio para verlos. Esta disposición permite insertar y retirar rápidamente del microscopio varios objetos montados en portaobjetos, etiquetarlos, transportarlos y almacenarlos en estuches o carpetas de portaobjetos adecuados, etc.
Los portaobjetos de microscopio se utilizan a menudo junto con un cubreobjetos o un cubreobjetos, una lámina de vidrio más pequeña y delgada que se coloca sobre la muestra. Los portaobjetos se mantienen en su lugar en la platina del microscopio mediante clips para portaobjetos, abrazaderas para portaobjetos o una mesa transversal que se utiliza para lograr un movimiento remoto y preciso del portaobjetos sobre la platina del microscopio (como en un sistema automatizado/operado por computadora, o cuando se toca el deslizamiento con los dedos es inadecuado ya sea por riesgo de contaminación o por falta de precisión).
El origen del concepto fueron piezas de marfil o hueso , que contenían especímenes sostenidos entre discos de mica transparente , que se deslizarían en el espacio entre la platina y el objetivo. [1] Estos "controles deslizantes" eran populares en la Inglaterra victoriana hasta que la Real Sociedad Microscópica introdujo el portaobjetos de vidrio estandarizado. [2]
Un portaobjetos de microscopio estándar mide aproximadamente 75 mm por 25 mm (3 ″ por 1 ″) y tiene aproximadamente 1 mm de espesor. Hay disponible una gama de otros tamaños para diversos fines especiales, como 75 x 50 mm para uso geológico , 46 x 27 mm para estudios petrográficos y 48 x 28 mm para secciones delgadas . Las diapositivas suelen estar hechas de vidrio común y sus bordes suelen estar finamente esmerilados o pulidos.
Los portaobjetos de microscopio suelen estar hechos de vidrio de calidad óptica , como vidrio sodocálcico o vidrio de borosilicato , pero también se utilizan plásticos especiales. Los portaobjetos de cuarzo fundido se utilizan a menudo cuando la transparencia ultravioleta es importante, por ejemplo, en microscopía de fluorescencia . [3] [4]
Si bien las diapositivas simples son las más comunes, existen varios tipos especializados. Un portaobjetos de concavidad o portaobjetos de cavidad tiene una o más depresiones poco profundas ("pozos"), diseñadas para contener objetos ligeramente más gruesos y ciertas muestras, como líquidos y cultivos de tejidos . [5] Las diapositivas pueden tener esquinas redondeadas para mayor seguridad o robustez, o una esquina recortada para usar con una abrazadera deslizante o una mesa transversal, donde la diapositiva está asegurada por un brazo curvo accionado por resorte que hace contacto con una esquina, obligando a la opuesta. esquina del tobogán contra un brazo en ángulo recto que no se mueve. Si este sistema se utilizara con una corredera que no incorporara estas esquinas recortadas, las esquinas se astillarían y la corredera podría romperse. [5]
Una diapositiva de retícula está marcada con una cuadrícula de líneas (por ejemplo, una cuadrícula de 1 mm) que permite estimar fácilmente el tamaño de los objetos vistos con aumento y proporciona áreas de referencia para contar objetos diminutos. A veces, un cuadrado de la cuadrícula se subdividirá en una cuadrícula más fina. Los portaobjetos para aplicaciones especializadas, como hemocitómetros para el recuento de células, pueden tener varios depósitos, canales y barreras grabados o rectificados en su superficie superior. [6] El fabricante puede imprimir , pulir con chorro de arena o depositar en la superficie varias marcas o máscaras permanentes, generalmente con materiales inertes como PTFE . [7]
Algunas diapositivas tienen un área recubierta de esmalte o esmerilado en un extremo, para etiquetarlas con un lápiz o bolígrafo. [5] Los portaobjetos pueden tener recubrimientos especiales aplicados por el fabricante, por ejemplo, para lograr inercia química o mejorar la adhesión celular . El recubrimiento puede tener una carga eléctrica permanente para contener muestras finas o en polvo. Los recubrimientos comunes incluyen poli-L-lisina , silanos , resinas epoxi , [5] [7] o incluso oro . [8]
El montaje de muestras en portaobjetos de microscopio suele ser fundamental para una visualización exitosa. Se ha prestado mucha atención al problema en los dos últimos siglos y es un área bien desarrollada con muchas técnicas especializadas y a veces bastante sofisticadas. Las muestras a menudo se mantienen en su lugar utilizando cubreobjetos de vidrio más pequeños .
La función principal del cubreobjetos es mantener las muestras sólidas presionadas y planas y las muestras líquidas moldeadas en una capa plana de espesor uniforme. Esto es necesario porque los microscopios de alta resolución tienen una región muy estrecha dentro de la cual enfocan.
El cubreobjetos suele tener otras funciones. Mantiene la muestra en su lugar (ya sea por el peso del cubreobjetos o, en el caso de un montaje húmedo, por la tensión superficial ) y protege la muestra del polvo y el contacto accidental. Protege la lente del objetivo del microscopio para que no entre en contacto con la muestra y viceversa; En microscopía de inmersión en aceite o microscopía de inmersión en agua, el cubreobjetos evita el contacto entre el líquido de inmersión y la muestra. El cubreobjetos se puede pegar al portaobjetos para sellar la muestra, retardando la deshidratación y oxidación de la muestra y también previniendo la contaminación. Se utilizan varios selladores, incluidos selladores comerciales, preparaciones de laboratorio o incluso esmalte de uñas transparente normal , según la muestra. Un sellador sin disolventes que se puede utilizar para muestras de células vivas es el "valap", una mezcla de vaselina , lanolina y parafina a partes iguales. [9] Los cultivos microbianos y celulares se pueden cultivar directamente en el cubreobjetos antes de colocarlos en el portaobjetos, y las muestras se pueden montar permanentemente en el portaobjetos en lugar de en el portaobjetos. [9]
Los cubreobjetos están disponibles en una variedad de tamaños y espesores. [10] El uso de un grosor incorrecto puede provocar una aberración esférica y una reducción de la resolución y la intensidad de la imagen. Se pueden utilizar objetivos especiales para obtener imágenes de muestras sin cubreobjetos, o pueden tener collares de corrección que permitan al usuario adaptarse a espesores de cubreobjetos alternativos. [11] [12]
En el montaje en seco , el tipo de montaje más sencillo, el objeto simplemente se coloca sobre la diapositiva. Se puede colocar un cubreobjetos encima para proteger la muestra y el objetivo del microscopio y para mantener la muestra quieta y plana. Este montaje se puede utilizar con éxito para observar especímenes como polen, plumas, pelos, etc. También se utiliza para examinar partículas atrapadas en filtros de membrana transparentes (por ejemplo, en análisis de polvo en suspensión ).
En un montaje húmedo , la muestra se coloca en una gota de yodo u otro líquido mantenida entre el portaobjetos y el cubreobjetos mediante tensión superficial. Este método se utiliza habitualmente, por ejemplo, para observar organismos microscópicos que crecen en el agua de estanques u otros medios líquidos, especialmente lagos.
Para las investigaciones patológicas y biológicas , el espécimen suele someterse a una compleja preparación histológica que implica fijarlo para evitar que se pudra, eliminar el agua que contiene, sustituir el agua por parafina , cortarlo en secciones muy finas con un micrótomo y colocar las secciones en un portaobjetos de microscopio, tiñendo el tejido utilizando varios tintes para revelar componentes específicos del tejido, limpiando el tejido para hacerlo transparente y cubriéndolo con un cubreobjetos y un medio de montaje.
El montaje esparcido describe la producción de portaobjetos de microscopio palinológico suspendiendo una muestra concentrada en agua destilada , colocando las muestras en un portaobjetos y dejando que el agua se evapore . [13]
El medio de montaje es la solución en la que se incrusta la muestra, generalmente bajo un cubreobjetos. Los líquidos simples como el agua o el glicerol pueden considerarse medios de montaje, aunque el término generalmente se refiere a compuestos que se endurecen hasta formar una montura permanente. Los medios de montaje populares incluyen Permount , [14] y el medio de montaje de Hoyer y una gelatina de glicerina alternativa [15]. Las propiedades de un buen medio de montaje incluyen tener un índice de refracción cercano al del vidrio (1,518), no reactividad con la muestra, estabilidad sobre tiempo sin cristalizar, oscurecerse o cambiar el índice de refracción, la solubilidad en el medio en el que se preparó la muestra (ya sea acuoso o no polar , como xileno o tolueno ) y no provocar que la mancha de la muestra se desvanezca o se filtre. [dieciséis]
Se utiliza popularmente en citoquímica inmunofluorescente donde la fluorescencia no se puede archivar. El almacenamiento temporal debe realizarse en una cámara oscura y húmeda. Ejemplos comunes son:
Se utiliza cuando se requiere un montaje permanente
A diferencia del montaje necesario para los cubreobjetos de vidrio, se puede realizar un montaje algo similar para la conservación de muestras más voluminosas en recipientes de vidrio en los museos. Sin embargo, se realiza un tipo de montaje completamente diferente para la preparación de muestras , que puede ser para materiales biológicos o no biológicos y se subdivide en procesos de montaje de tipo "caliente" (compresivo) y "frío" (moldeable). [18] [19] Aunque se denomina "montaje", es más parecido a la incrustación en histología y no debe confundirse con el montaje descrito anteriormente. El término montaje en otros campos tiene muchos otros significados.
