Las pruebas de Coombs directa e indirecta , también conocidas como prueba de antiglobulina ( AGT ), son análisis de sangre que se utilizan en inmunohematología . La prueba de Coombs directa detecta anticuerpos que están adheridos a la superficie de los glóbulos rojos. [1] Dado que estos anticuerpos a veces destruyen los glóbulos rojos, pueden causar anemia ; esta prueba puede ayudar a aclarar la afección. La prueba de Coombs indirecta detecta anticuerpos que flotan libremente en la sangre. [1] Estos anticuerpos podrían actuar contra ciertos glóbulos rojos; la prueba se puede realizar para diagnosticar reacciones a una transfusión de sangre . [1]
La prueba de Coombs directa se utiliza para detectar la anemia hemolítica autoinmune , una afección en la que el sistema inmunitario descompone los glóbulos rojos , lo que provoca anemia. La prueba de Coombs directa se utiliza para detectar anticuerpos o proteínas del complemento adheridas a la superficie de los glóbulos rojos. Para realizar la prueba, se toma una muestra de sangre y se lavan los glóbulos rojos (eliminando el plasma del paciente y los anticuerpos no unidos a los glóbulos rojos) y luego se incuban con globulina antihumana ("reactivo de Coombs"). Si los glóbulos rojos se aglutinan , la prueba es positiva, una indicación visual de que los anticuerpos o las proteínas del complemento están adheridos a la superficie de los glóbulos rojos y pueden estar causando la destrucción de esas células.
La prueba de Coombs indirecta se utiliza en las pruebas prenatales de las mujeres embarazadas y en las pruebas previas a una transfusión de sangre. La prueba detecta anticuerpos contra glóbulos rojos extraños. En este caso, se extrae suero de una muestra de sangre tomada del paciente. El suero se incuba con glóbulos rojos extraños de antigenicidad conocida . Finalmente, se agrega globulina antihumana. Si se produce aglutinación, la prueba de Coombs indirecta es positiva. [2]
Las dos pruebas de Coombs se basan en la unión de anticuerpos antihumanos a anticuerpos humanos, comúnmente IgG o IgM . Estos anticuerpos antihumanos son producidos por células plasmáticas de animales no humanos después de inmunizarlos con plasma humano . Además, estos anticuerpos antihumanos también se unirán a anticuerpos humanos que pueden estar fijados a antígenos en la superficie de los glóbulos rojos (RBC). En las condiciones adecuadas del tubo de ensayo, esto puede provocar la aglutinación de los glóbulos rojos y permitir la visualización de los grumos resultantes de glóbulos rojos. Si se observan grumos, la prueba de Coombs es positiva; si no, la prueba de Coombs es negativa. [3]
Los usos clínicos comunes de la prueba de Coombs incluyen la preparación de sangre para transfusión en pruebas cruzadas , anticuerpos atípicos en el plasma sanguíneo de mujeres embarazadas como parte de la atención prenatal y la detección de anticuerpos para el diagnóstico de anemias hemolíticas inmunomediadas . [4]
Las pruebas de Coombs se realizan utilizando glóbulos rojos o suero (directo o indirecto, respectivamente) de muestras de sangre venosa completa que se toman de los pacientes mediante venopunción . La sangre venosa se lleva a un laboratorio (o banco de sangre), donde personal técnico científico capacitado realiza las pruebas de Coombs. La importancia clínica del resultado es evaluada por el médico que solicitó la prueba de Coombs, quizás con la ayuda de un hematólogo de laboratorio . [ cita requerida ]
La prueba de Coombs directa, también conocida como prueba de antiglobulina directa (DAT), se utiliza para detectar si los anticuerpos o los factores del sistema del complemento se han unido a los antígenos de superficie de los glóbulos rojos . [5] La DAT no es necesaria para las pruebas previas a la transfusión [6], pero algunos laboratorios pueden realizarla. [ aclaración necesaria ] Antes de la transfusión, a menudo se realiza una prueba de Coombs indirecta .
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La prueba de Coombs directa se utiliza clínicamente cuando se sospecha anemia hemolítica inmunomediada (destrucción de glóbulos rojos mediada por anticuerpos). Una prueba de Coombs positiva indica que un mecanismo inmunológico está atacando a los glóbulos rojos del paciente . Este mecanismo podría ser autoinmunidad , aloinmunidad o un mecanismo inmunomediado inducido por fármacos. [3]
(Un dispositivo de memoria para recordar que la prueba DAT prueba los glóbulos rojos y se utiliza para evaluar a los bebés en busca de enfermedad hemolítica del recién nacido es: Enfermedad Rh ; R = glóbulos rojos , D = DAT).
Los glóbulos rojos del paciente se lavan (eliminando el suero del propio paciente ) y luego se centrifugan con globulina antihumana (también conocida como reactivo de Coombs). Si se han fijado inmunoglobulina o factores del complemento sobre la superficie de los glóbulos rojos in vitro , la globulina antihumana aglutinará los glóbulos rojos y la prueba de Coombs directa será positiva. (En la mitad superior del esquema se muestra una representación visual de una prueba de Coombs directa positiva). [ cita requerida ]
La prueba de Coombs indirecta, también conocida como prueba de antiglobulina indirecta (IAT), se utiliza para detectar reacciones in vitro entre anticuerpos y antígenos. Se utiliza para detectar concentraciones muy bajas de anticuerpos presentes en el plasma o suero de un paciente antes de una transfusión de sangre. En la atención prenatal, la IAT se utiliza para detectar anticuerpos que pueden causar enfermedad hemolítica del recién nacido en mujeres embarazadas . La IAT también se puede utilizar para pruebas de compatibilidad , identificación de anticuerpos, fenotipado de glóbulos rojos y estudios de titulación. [ cita requerida ]
La prueba de Coombs indirecta se utiliza para detectar anticuerpos en la preparación de sangre para transfusión sanguínea . La sangre del donante y del receptor debe ser compatible con ABO y Rh D. La sangre del donante para transfusión también se analiza para detectar infecciones en procesos separados. [ cita requerida ]
Se analizan una muestra de sangre del receptor y una muestra de sangre de cada unidad de sangre del donante para detectar anticuerpos mediante la prueba de Coombs indirecta. Cada muestra se incuba frente a una amplia gama de glóbulos rojos que, en conjunto, presentan una gama completa de antígenos de superficie (es decir, tipos de sangre ).
La prueba de Coombs indirecta se utiliza para analizar una muestra del suero del receptor en busca de anticuerpos contra una muestra de glóbulos rojos del donante de sangre . A esto a veces se lo denomina prueba de compatibilidad cruzada .
La prueba de Coombs indirecta se utiliza para detectar en mujeres embarazadas los anticuerpos IgG que probablemente pasen a través de la placenta a la sangre fetal y provoquen enfermedad hemolítica en el recién nacido . [ cita requerida ]
La IAT es una prueba de dos etapas. (Se muestra una prueba cruzada visualmente en la mitad inferior del esquema como un ejemplo de una prueba de Coombs indirecta). [ cita requerida ]
Los glóbulos rojos lavados de pacientes no tratados con antígenos conocidos se incuban con suero del paciente que contiene un contenido de anticuerpos desconocido. Si el suero contiene anticuerpos contra antígenos en la superficie de los glóbulos rojos, los anticuerpos se unirán a la superficie de los glóbulos rojos. [ cita requerida ]
Los glóbulos rojos se lavan tres o cuatro veces con solución salina isotónica y luego se incuban con globulina antihumana. Si los anticuerpos se han unido a los antígenos de superficie de los glóbulos rojos en la primera etapa, los glóbulos rojos se aglutinarán cuando se incuben con la globulina antihumana (también conocida como reactivo de Coombs) en esta etapa, y la prueba de Coombs indirecta será positiva.
Al diluir un suero que contiene anticuerpos, se puede medir la cantidad de anticuerpos en el suero. Esto se hace realizando diluciones seriadas del suero y encontrando la dilución máxima del suero de prueba que es capaz de producir aglutinación de los glóbulos rojos relevantes. [ cita requerida ]
El reactivo de Coombs (también conocido como antiglobulina de Coombs o globulina antihumana ) se utiliza tanto en la prueba de Coombs directa como en la indirecta. El reactivo de Coombs es globulina antihumana . Se elabora inyectando globulina humana en animales, que producen anticuerpos policlonales específicos para inmunoglobulinas humanas y factores del sistema del complemento humano. Se pueden utilizar reactivos de Coombs más específicos o anticuerpos monoclonales . [ cita requerida ]
Tanto los anticuerpos IgM como los IgG se unen fuertemente a sus antígenos complementarios. Los anticuerpos IgG son más reactivos a 37 °C. Los anticuerpos IgM se detectan fácilmente en solución salina a temperatura ambiente , ya que los anticuerpos IgM pueden formar puentes entre los glóbulos rojos debido a su gran tamaño, creando de manera eficiente lo que se ve como aglutinación . Los anticuerpos IgG son más pequeños y requieren ayuda para formar un puente lo suficientemente bueno como para formar una reacción de aglutinación visual . Los reactivos utilizados para mejorar la detección de IgG se denominan potenciadores. Los glóbulos rojos tienen una carga negativa neta llamada potencial zeta que hace que tengan una repulsión natural entre sí. Los potenciadores reducen el potencial zeta de las membranas de los glóbulos rojos. Los potenciadores comunes incluyen solución de baja fuerza iónica (LISS), albúmina , polietilenglicol (PEG) y enzimas proteolíticas .
La prueba de Coombs fue descrita por primera vez en 1945 por los inmunólogos de Cambridge Robin Coombs (de quien recibe el nombre), Arthur Mourant y Rob Race . [8] Históricamente, se realizaba en tubos de ensayo . Hoy en día, se realiza comúnmente utilizando tecnología automatizada de fase sólida o gel.