En micología, se dice que un tejido o característica es amiloide si tiene una reacción amiloide positiva cuando se somete a una prueba química cruda que utiliza yodo como ingrediente del reactivo de Melzer o de la solución de Lugol , produciendo una tinción de azul a negro azulado. El término "amiloide" se deriva del latín amyloideus ("parecido al almidón"). [1] Se refiere al hecho de que el almidón da una reacción similar, también llamada reacción amiloide. La prueba puede realizarse en características microscópicas, como paredes de esporas o paredes de hifas , o el aparato apical o la pared completa del asco de un asco , o ser una reacción macroscópica en el tejido donde se aplica una gota del reactivo. Las reacciones negativas, llamadas inamiloide o no amiloide , son para estructuras que permanecen de color amarillo-marrón pálido o claras. Una reacción que produce una tinción de color rojizo intenso a marrón rojizo se denomina reacción dextrinoide ( pseudoamiloide es un sinónimo) o reacción hemiamiloide .
Melzer se utiliza exponiendo células o tejido fúngico al reactivo, generalmente en una preparación de portaobjetos de microscopio , y buscando cualquiera de las tres reacciones de color:
Entre las reacciones amiloideas se pueden distinguir dos tipos:
Las reacciones de Melzer suelen ser casi inmediatas, aunque en algunos casos la reacción puede tardar hasta 20 minutos en desarrollarse. [2]
Las funciones de las sustancias químicas que componen el reactivo de Melzer son varias. El hidrato de cloral es un agente clarificante , blanqueador y que mejora la transparencia de diversos materiales microscópicos de color oscuro. El yoduro de potasio se utiliza para mejorar la solubilidad del yodo, que de otro modo sólo es semisoluble en agua. Se cree que el yodo es el principal agente colorante activo en Melzer; Se cree que reacciona con polisacáridos similares al almidón en las paredes celulares del material amiloide; sin embargo, su mecanismo de acción no se comprende del todo. Se ha observado que el material hemiamiloide reacciona de manera diferente cuando se expone a Melzer que cuando se expone a otras soluciones de IKI como la de Lugol, y que en algunos casos se muestra una reacción amiloide en material que tuvo exposición previa a KOH, pero una reacción inamiloide sin dicho pretratamiento. [3] [4]
Un experimento en el que se analizaron esporas de 35 especies de basidiomicetos para detectar reacciones tanto a Melzer como a Lugol mostró que las esporas en un gran porcentaje de las especies analizadas muestran reacciones muy diferentes entre los dos reactivos. Estos variaban desde ser débiles o no reactivos en Lugol, hasta dar reacciones positivas para yodo en Lugol pero no en Melzer, e incluso dar reacciones dextrinoides en Lugol mientras que reacciones amiloides en Melzer. [5]
Melzer se degrada formando un precipitado turbio cuando se combina con soluciones alcalinas, [2] por lo que no se puede utilizar en combinación o en serie directa con reactivos micológicos tan comunes como las soluciones de hidróxido de potasio o hidróxido de amonio . Cuando se utiliza hidróxido de potasio como pretratamiento, primero se debe neutralizar la alcalinidad antes de agregar Melzer.
La hemiamiloididad en micología se refiere a un caso especial de amiloididad de la pared celular donde la tinción azul con yodo solo ocurre cuando el tejido fue tratado previamente con una solución de hidróxido de potasio (KOH) u otras bases fuertes, mientras que la aplicación directa de yodo causa una reacción roja cuando se usa la solución de Lugol. , pero no hay reacción cuando se usa el reactivo de Melzer . [6] [7] La hemiamiloididad hasta ahora sólo se conoce en Ascomycota , pero aquí está muy extendida y es un importante criterio de distinción taxonómica. [6] [8] Si las paredes celulares se tiñen de azul con reactivos de yodo sin tratamiento previo con KOH, esto se denomina euamiloide. El término amiloide comprende ambas variantes.
Un elemento hemiamiloide de la pared celular no se tiñe directamente de azul con reactivos de yodo añadidos a una preparación acuosa, sino sólo cuando se ha tratado previamente con una solución de hidróxido de potasio (KOH). Sin pretratamiento con KOH, el resultado depende en gran medida del tipo de reactivo de yodo: con la solución de Lugol (IKI), las estructuras hemiamiloides reaccionan de color rojo a marrón rojizo, mientras que cualquier reacción se suprime cuando se utiliza el reactivo de Melzer (MLZ). Este efecto de enmascaramiento (falsa inamiloididad) se debe a la alta concentración de hidrato de cloral en MLZ. La alternativa al hemiamiloides se llama euamiloides. Las estructuras euamiloides y hemiamiloides pretratadas con KOH reaccionan de color azul independientemente del tipo de reactivo de yodo. Las reacciones hemiamiloides y euamiloides pueden ocurrir al mismo tiempo, ya sea en sitios espacialmente separados de la pared celular (p. ej., ascus euamiloide del anillo apical, hemiamiloides de la pared lateral), o como un tipo intermedio de la misma región de la pared. En el último caso, se puede observar una superposición de azul y rojo en la solución de Lugol sin pretratamiento con KOH: se produce un cambio de color de azul a marrón rojizo sucio cuando el reactivo de yodo se difunde lentamente en la preparación de agua, porque la reacción euamiloide aparece a temperaturas más bajas. concentraciones de yodo que la reacción hemiamiloide. Los ascos con paredes completamente reactivas de este tipo de hemiamiloididad muestran colores similares a los del arco iris cuando se aplica IKI de baja concentración.
Reacción hemiamiloide (rojo) en IKI antes de KOH, en comparación con euamiloide (azul) e inamiloide (negativo). Sólo la reacción hemiamiloide depende fuertemente del reactivo de yodo aplicado (IKI, MLZ) y del pretratamiento con KOH, siendo negativa en MLZ y azul cuando se pretrata con KOH (en IKI o MLZ). La aplicación directa de IKI a un animal acuático (sin KOH, resaltado) es la forma más sencilla de reconocer la hemiamiloididad.
Reacción con yodo de los anillos apicales de ascos hemiamiloides de Hysteropezizella (Helotiales) en dependencia del reactivo de yodo (IKI, MLZ) y pretratamiento con KOH.
La hemiamiloididad ocurre en muchos grupos de ascomicetos . En la mayoría de los miembros de Lecanorales y Ostropales, ya sean liquenizados o no, toda la capa exterior de la pared del asco reacciona con hemiamiloides. Aproximadamente el 20% de los Helotiales tienen anillos apicales ascus hemiamiloides en comparación con el 50% estimado con anillos apicales euamiloides. En los pezizomicetos y diferentes clases de pirenomicetos, las reacciones hemiamiloides son raras. Aunque la hemiamiloididad es un marcador taxonómico muy valioso que permite la diferenciación entre especies o géneros, este tipo de reacción, en particular la reacción roja en IKI, a menudo se pasa por alto. Este abandono se produjo desde que los micólogos cambiaron al reactivo de Melzer, que se introdujo en 1924 y desplazó casi por completo a la solución de Lugol utilizada anteriormente. La hemiamiloididad se informó por primera vez mediante la aplicación del reactivo de Melzer, que dio un resultado negativo sin KOH, pero una reacción azul cuando se trató previamente con KOH. [9] Debido a la frecuencia de hemiamiloididad en los líquenes, los liquenólogos generalmente no se unieron a este cambio sino que continuaron usando la solución de Lugol. El uso generalizado de hongos herborizados hinchables en KOH antes del estudio contribuye aún más a que con frecuencia se pase por alto la hemiamiloididad.
Los antecedentes químicos de la hemiamiloididad no están claros. Una hipótesis afirma que las secciones helicoidales cortas de una cadena de carbohidratos se alternan con secciones lineales más cortas o más largas. Las secciones helicoidales cortas, similares a la dextrinoididad del glucógeno , provocarían la reacción roja mediante la inclusión de átomos de yodo en la espiral, y las secciones lineales podrían curvarse bajo la influencia del KOH, dando como resultado largas cadenas helicoidales que provocan una mancha azul sobre el yodo. inclusión. La hipotética estructura en espiral de estas macromoléculas parece estar relacionada con la extensibilidad de la pared del asco, que es un requisito previo para la expulsión activa y explosiva de ascosporas de un asco cuando se libera su alta turgencia celular. Se requiere una alta extensibilidad de la pared celular especialmente en la zona de la abertura apical en forma de poro (anillo apical), a través de la cual se presionan las ascosporas cuando el asco estalla.