La histopatología (compuesta de tres palabras griegas : ἱστός histos 'tejido', πάθος pathos 'sufrimiento' y -λογία -logia 'estudio de') es el examen microscópico del tejido con el fin de estudiar las manifestaciones de una enfermedad . Específicamente, en medicina clínica, la histopatología se refiere al examen de una biopsia o muestra quirúrgica por parte de un patólogo , después de que la muestra haya sido procesada y las secciones histológicas se hayan colocado en portaobjetos de vidrio. Por el contrario, la citopatología examina células libres o microfragmentos de tejido (como "bloques de células").
El examen histopatológico de los tejidos comienza con la cirugía , la biopsia o la autopsia . El tejido se extrae del cuerpo o de la planta y luego, a menudo después de una disección experta en estado fresco, se coloca en un fijador que estabiliza los tejidos para evitar la descomposición . El fijador más común es formalina tamponada neutra al 10 % (correspondiente a formaldehído al 3,7 % p/v en agua tamponada neutra, como solución salina tamponada con fosfato ).
Luego, el tejido se prepara para observarlo bajo un microscopio mediante fijación química o sección congelada.
Si se proporciona una muestra grande, por ejemplo de un procedimiento quirúrgico, entonces un patólogo observa la muestra de tejido y selecciona la parte con mayor probabilidad de producir un diagnóstico útil y preciso; esta parte se extrae para examinarla en un proceso comúnmente conocido como extracción macroscópica o corte. Se cortan muestras más grandes para situar correctamente sus estructuras anatómicas en el casete. Ciertas muestras (especialmente biopsias) pueden someterse a una preincrustación en agar para asegurar la orientación correcta del tejido en el casete, luego en el bloque y luego en el portaobjetos de microscopía de diagnóstico. Luego se coloca en un casete de plástico durante la mayor parte del resto del proceso. [ cita necesaria ]
Además de la formalina, se han utilizado otros fijadores químicos. Pero, con la llegada de la tinción inmunohistoquímica (IHC) y las pruebas de patología molecular de diagnóstico en estas muestras, la formalina se ha convertido en el fijador químico estándar en la histopatología de diagnóstico humano. Los tiempos de fijación para muestras muy pequeñas son más cortos y existen estándares en histopatología de diagnóstico humano.
El agua se elimina de la muestra en etapas sucesivas mediante el uso de concentraciones crecientes de alcohol . [1] Se utiliza xileno en la última fase de deshidratación en lugar de alcohol; esto se debe a que la cera utilizada en la siguiente etapa es soluble en xileno, mientras que no lo es en alcohol, lo que permite que la cera impregne (infiltre) la muestra. [1] Este proceso generalmente está automatizado y se realiza de la noche a la mañana. La muestra infiltrada con cera se transfiere luego a un recipiente individual para inclusión de muestras (generalmente de metal). Finalmente, se introduce cera fundida alrededor de la muestra en el recipiente y se enfría hasta que solidifique para incrustarla en el bloque de cera. [1] Este proceso es necesario para proporcionar una muestra correctamente orientada y lo suficientemente resistente como para obtener una(s) sección(es) delgada (s) de microtomo para el portaobjetos.
Una vez que se termina el bloque incrustado en cera, se cortarán secciones del mismo y generalmente se colocarán para que floten en una superficie de baño de agua que extienda la sección. Esto generalmente se hace a mano y es un trabajo calificado (histotecnólogo) en el que el personal del laboratorio decide qué partes de la cinta de cera del microtomo de muestras colocar en los portaobjetos. Por lo general, se prepararán varias diapositivas de diferentes niveles a lo largo del bloque. Después de esto, se tiñe el portaobjetos montado en la sección delgada y se monta sobre él un cubreobjetos protector. Para las manchas comunes normalmente se utiliza un proceso automático; pero los tintes que se utilizan raramente suelen hacerse a mano. [1]
Una evaluación inicial de un linfoma sospechoso consiste en hacer una "preparación táctil" en la que se presiona ligeramente un portaobjetos de vidrio contra el tejido linfoide extirpado y posteriormente se tiñe (generalmente tinción H&E ) para su evaluación bajo microscopía óptica . El segundo método de procesamiento histológico se denomina procesamiento de secciones congeladas . Este es un método científico altamente técnico realizado por un histocientífico capacitado. En este método, el tejido se congela y se corta en rodajas finas utilizando un micrótomo montado en un dispositivo de refrigeración por debajo del punto de congelación llamado criostato . Las finas secciones congeladas se montan en un portaobjetos de vidrio, se fijan inmediata y brevemente en fijador líquido y se tiñen utilizando técnicas de tinción similares a las de las secciones tradicionales incrustadas en cera. Las ventajas de este método son el tiempo de procesamiento rápido, la menor necesidad de equipo y la menor necesidad de ventilación en el laboratorio. La desventaja es la mala calidad de la diapositiva final. Se utiliza en patología intraoperatoria para determinaciones que podrían ayudar a elegir el siguiente paso de la cirugía durante esa sesión quirúrgica (por ejemplo, para determinar preliminarmente la claridad del margen de resección de un tumor durante la cirugía).
Esto se puede hacer con portaobjetos procesados mediante fijación química o portaobjetos de sección congelada. Para ver el tejido al microscopio, las secciones se tiñen con uno o más pigmentos . El objetivo de la tinción es revelar los componentes celulares; se utilizan contratinciones para proporcionar contraste.
La tinción más utilizada en histología es una combinación de hematoxilina y eosina (a menudo abreviada H&E). La hematoxilina se utiliza para teñir los núcleos de azul , mientras que la eosina tiñe de rosa el citoplasma y la matriz de tejido conectivo extracelular de la mayoría de las células . Hay cientos de otras técnicas que se han utilizado para teñir células selectivamente. Otros compuestos utilizados para colorear secciones de tejido incluyen safranina , rojo aceite O , rojo congo , sales de plata y tintes artificiales. La histoquímica se refiere a la ciencia del uso de reacciones químicas entre productos químicos de laboratorio y componentes dentro del tejido. Una técnica histoquímica comúnmente realizada es la reacción del azul de Prusia de Perls , utilizada para demostrar depósitos de hierro en enfermedades como la hemocromatosis . [2]
Recientemente, se han utilizado anticuerpos para teñir proteínas , lípidos y carbohidratos concretos . Esta técnica, llamada inmunohistoquímica , ha aumentado considerablemente la capacidad de identificar específicamente categorías de células bajo un microscopio. Otras técnicas avanzadas incluyen la hibridación in situ para identificar moléculas específicas de ADN o ARN . Estos métodos de tinción de anticuerpos a menudo requieren el uso de histología de secciones congeladas. Estos procedimientos anteriores también se llevan a cabo en el laboratorio bajo escrutinio y precisión por parte de un científico de laboratorio médico especialista capacitado (un histocientífico). Las cámaras digitales se utilizan cada vez más para capturar imágenes histopatológicas.
Los portaobjetos histológicos son examinados al microscopio por un patólogo , un especialista médicamente cualificado que ha completado un programa de formación reconocido. Este diagnóstico médico se formula como un informe de patología que describe los hallazgos histológicos y la opinión del patólogo. En el caso del cáncer , esto representa el diagnóstico tisular requerido para la mayoría de los protocolos de tratamiento. En la extirpación del cáncer , el patólogo indicará si el margen quirúrgico está limpio, o está afectado (queda cáncer residual). Esto se hace utilizando el método de procesamiento de pan holgazán o CCPDMA . Los artefactos visuales microscópicos pueden causar potencialmente un diagnóstico erróneo de las muestras.
A continuación se muestran ejemplos de características generales de hallazgos sospechosos que se pueden apreciar con un aumento bajo a alto en histopatología:
Los principales patrones arquitectónicos histopatológicos incluyen:
Los principales patrones nucleares incluyen:
Después de un infarto de miocardio (ataque cardíaco), no se observa histopatología durante los primeros 30 minutos. El único signo posible durante las primeras 4 horas es la ondulación de las fibras en el borde. Posteriormente, sin embargo, se inicia una necrosis por coagulación , con edema y hemorragia. A las 12 horas se observa cariopicnosis e hipereosinofilia de los miocitos con necrosis en bandas de contracción en los márgenes, así como inicio de infiltración de neutrófilos. Entre 1 y 3 días hay necrosis de coagulación continua con pérdida de núcleos y estriaciones y un aumento de la infiltración de neutrófilos en el intersticio. Hasta el final de la primera semana después del infarto, comienza la desintegración de las fibras musculares muertas, la necrosis de los neutrófilos y el comienzo de la eliminación de las células muertas en el borde por parte de los macrófagos, lo que aumenta en los días siguientes. Después de una semana también comienza la formación de tejido de granulación en los márgenes, que madura durante el mes siguiente, y aumenta el depósito de colágeno y disminuye la celularidad hasta que la cicatriz miocárdica está completamente madura aproximadamente 2 meses después del infarto. [3]
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