El receptor 2 del leucotrieno B 4 , también conocido como BLT2 , receptor BLT2 y BLTR2 , es una proteína de membrana integral codificada por el gen LTB4R2 en humanos y el gen Ltbr2 en ratones. [5] [6] [7]
Descubierto varios años después del receptor 1 del leucotrieno B 4 (BLT1), el receptor BLT2 se une al leucotrieno B 4 (LTB 4 ) con una afinidad mucho menor que el receptor BLT1 y, por lo tanto, se lo ha denominado receptor LTB 4 de baja afinidad . Algún tiempo después de su descubrimiento inicial, se demostró que el receptor BLT2 se une y se activa por varios otros metabolitos del ácido araquidónico, uno de los cuales, el ácido 12-hidroxiheptadecatrienoico (12-HHT), tiene una afinidad de 10 a 100 veces mayor por él que el LTB 4 ; el 12-HHT no se une ni activa los receptores BLT1. Si bien los receptores BLT2 tienen algunas acciones similares a los receptores BLT1, tienen otras acciones que se oponen claramente a las del BLT1 en la regulación de la inflamación y las respuestas alérgicas; los receptores BLT2 también tienen acciones que se extienden más allá de las de los receptores BLT1. Estudios de laboratorio, en animales y otros estudios preclínicos sugieren que los receptores BLT2 pueden estar involucrados no sólo en la inflamación y la alergia, sino también en el cáncer humano.
BLT2 es un receptor de la superficie celular que funciona reconociendo, uniéndose y mediando las respuestas a un conjunto particular de moléculas mensajeras o ligandos . Estos ligandos mensajeros son cualquiera de una gama de metabolitos de ácido araquidónico estructuralmente diferentes producidos y liberados por células cercanas para actuar como señales paracrinas para coordinar respuestas entre células o señales autocrinas para modular las respuestas de sus células madre. [ cita requerida ]
Varios años después de su identificación de un receptor de leucotrieno B 4 (LTB 4 ) denominado BLT1 o BLTR1 y codificado por el gen LTB4R1, [8] Shimizu y sus colegas identificaron un segundo receptor LTB 4 , BLT2 o BLTR2, codificado por el gen LTB4R2. [9] LTBR1 y LTBR2 codifican proteínas con un 45% de identidad de aminoácidos que pertenecen a la superfamilia de receptores acoplados a proteína G. Los dos genes forman un grupo en el cromosoma 14 humano y de ratón; en humanos pero no en ratones, este grupo tiene una configuración muy inusual en la que el marco de lectura abierto de LTBR2 se superpone al promotor y la región no traducida 5' de LTBR1. [9] [10] Se desconoce la importancia de esta superposición. También se ha demostrado que los monos, ratas y perros expresan ortólogos de LTB4R2 . [11]
Se han clonado dos receptores similares a BLT2, Blt2a y Blt2b, con un 49% de identidad de aminoácidos entre sí y un 34% y un 29%, respectivamente, de identidad de aminoácidos con el BLT2 humano, a partir de embriones de pez cebra . [11] La última cita presenta un árbol filogenético sobre la relación de aminoácidos de estos dos receptores, así como de los de humanos, monos, perros, ratas y ratones entre sí.
Los receptores BLT2, similares a los receptores BLT1, son receptores acoplados a proteína G que, cuando se unen al ligando, activan proteínas G que contienen la subunidad alfa G i y, por lo tanto, son inhibidas por la toxina pertussis o la subunidad alfa G q y, por lo tanto, no son inhibidas por la toxina pertussis. (La sensibilidad a la toxina pertussis es una prueba importada para los enlaces del receptor de proteína G). Los receptores BLT2 estimulan las células a concentraciones transitoriamente elevadas de iones de calcio citosólico, activando así las moléculas de señalización intracelular activadas por calcio; también estimulan a las células para activar las quinasas reguladas por señales extracelulares (ERK), la proteína quinasa B (también conocida como Akt), las quinasas N-terminales c-Jun (JNK), la proteína quinasa Janus (JAK) -STAT (es decir, transductor de señales y activador de la transcripción), la NADPH oxidasa (NOX) y las vías NF-κB. Una importante vía de activación celular implica la activación del receptor BLT2 de NOX2 o NOX1 con la posterior producción de especies reactivas de oxígeno que a su vez activan la función inductora de transcripción de NF-κB. [12] [13] [14]
El receptor BLT2 humano se expresa en una amplia gama de tejidos, incluidos el bazo, los leucocitos sanguíneos, el hígado, los ovarios, el páncreas, el corazón, la próstata, los testículos, el intestino delgado, los riñones, los pulmones, el colon, el timo, los músculos y la placenta; esto contrasta con el receptor BLT1, que parece tener un patrón de expresión más limitado que incluye principalmente leucocitos y linfocitos sanguíneos circulantes. [15] [16] [17] El receptor Blt2 de ratón también muestra un patrón de distribución más limitado que el receptor BLT2 humano, mostrando una expresión apreciable en el intestino delgado y la piel, y una baja expresión en el colon y el bazo. [17] [18]
Aunque inicialmente se definió como un receptor de baja afinidad para el producto de la 5-lipoxigenasa del metabolismo del ácido araquidónico, LTB 4 , BLT2 se une y es activado no solo por LTB 4 sino también por la vía enzimática de la ciclooxigenasa - tromboxano sintasa del metabolismo del ácido araquidónico, el ácido 12-hidroxiheptadecatrienoico (12-HHT), así como por tres productos de la vía de la 12-lipoxigenasa del metabolismo del ácido araquidónico, 12( S )-HETE, 12( S )-HpETE y 12( R )-HETE (véase ácido 12-hidroxieicosatetraenoico ), por un miembro de la vía de la 15-lipoxigenasa del metabolismo del ácido araquidónico, 15( S )-HETE (véase ácido 15-hidroxiicosatetraenoico ), y por otro miembro de la familia LTB 4 del ácido araquidónico. metabolitos, 20-hidroxi-LTB 4 ; las afinidades relativas de unión al receptor BLT2 de estos 7 metabolitos son ~1000, 100, 10, 10, 3, 3 y 1, respectivamente. [19] [20] Por lo tanto, el ligando descubierto más recientemente, 12-HHT, que no se une a los receptores BLT1, muestra con diferencia la mayor afinidad de todos los ligandos probados por los receptores BLT2. Entre estos 7 ligandos, por el contrario, BLT1 se une y es activado únicamente por LTB 4 y 20-hidroxi-LTB 4 .
Los dos receptores similares a BLT4 en el pez cebra, Blt2a y Blt2b, cuando se transfectan en células de ovario de hámster chino , median aumentos en las respuestas de calcio citosólico tanto al 12-HHT como al LTB 4, siendo el 12-HHT aproximadamente 500 a 1000 veces más fuerte que el LTB 4 al hacerlo; el 12-HHT es inactivo en este ensayo en células de ovario de hámster chino diseñadas para expresar el receptor LTB 4-1 (Blt1) del pez cebra. [11] Por lo tanto, el receptor BLT1 exhibe una especificidad exquisita, uniéndose al ácido 5( S ),12( R )-dihidroxi-6 Z ,8 E ,10 E ,14 Z -eicosatetraenoico (es decir, LTB 4 ) pero no a los isómeros 12( S ) o 6 Z del LTB 4 , mientras que el receptor BLT2 exhibe un patrón de unión que incluye estereoisómeros S y R , metabolitos del ácido araquidónico compuestos de 17 y 20 carbonos y metabolitos con un residuo de hidroxilo en la posición 5, 12 o 15. El patrón de unión de BLT2 solo puede considerarse promiscuo. [10] Este patrón de unión promiscuo complica la determinación de qué metabolito del ácido araquidónico y qué oxigenasa formadora de metabolitos (es decir, ciclooxigenasa o lipoxigenasa) es responsable de cualquier respuesta dependiente de BLT2 dada. Estas determinaciones suelen ser fundamentales para definir todos los mecanismos implicados, así como los medios para inhibir o promover, las funciones de BLT2.
En base a las grandes diferencias estructurales en los ligandos conocidos del receptor BLT2, puede haber otros ligandos aún no definidos que se unan a este receptor y lo activen. Por ejemplo, inicialmente se sugirió que el receptor 2 del péptido formilo (receptor FPL2) era un segundo receptor con aproximadamente un 70% de identidad de aminoácidos con el receptor 1 del péptido formilo (receptor FPL1). Ambos tipos de receptores se unen y son activados por una serie de factores quimiotácticos de oligopéptidos formilados , pero el receptor FLP2 parece ser un receptor promiscuo, ya que también se une y es activado por lipoxinas y resolvinas , así como por varios polipéptidos y proteínas. El receptor FLP2 parece estar involucrado principalmente en la atenuación y resolución de las respuestas inflamatorias, acciones que parecen ser diametralmente opuestas a las acciones proinflamatorias de los receptores FLP1.
La expresión de los receptores Blt2 en ratones parece limitada a menos tejidos que el receptor BLT2 en humanos; Blt1 se expresa de forma robusta solo en el intestino delgado y la piel de los ratones. [17] [18] [21] Por lo tanto, los estudios en ratones con LTB4R2 inactivado pueden revelar un papel más limitado para el receptor BLT2 que en humanos.
Los ratones knock out del receptor BLT2 exhiben eosinofilia alérgica de las vías respiratorias inducida por ovoalbúmina atenuada y contenido de interleucina 13 (IL-13) en su líquido de lavado broncoalveolar en comparación con los ratones de tipo salvaje y las células T CD4-positivas aisladas de los ratones knock out mostraron una reducción de la producción de IL-13 pero no hubo cambios en la respuesta del broncoespasmo a la ovoalbúmina en estos ratones. [22] No se identificaron el(los) ligando(s) del receptor BLT2 ni las vías metabólicas que producen este(os) ligando(s). Estos resultados indican que el receptor Blt2 funciona para promover la inflamación de base eosinofílica que acompaña y puede contribuir a la enfermedad pulmonar alérgica; este efecto puede deberse en parte a su capacidad para reducir la producción de la citocina proalérgica, IL-13; el receptor no parece ser responsable del broncoespasmo inducido por alérgenos. El receptor BLT2 podría desempeñar un papel similar en enfermedades alérgicas humanas como el asma .
En respuesta a la administración oral del inductor de inflamación sulfato de sodio dextrano , los ratones knock out del receptor Blt2, en comparación con los ratones de tipo salvaje o knock out del receptor Blt1, exhibieron: a) inflamación de colitis más severa y pérdida de peso corporal; b) aumento de la expresión de ARNm para las citocinas proinflamatorias interferón-γ , IL1B e interleucina 6 , dos quimiocinas proinflamatorias , a saber, el ligando de quimiocina 9 (también denominado ligando de quimiocina 10 ) y la quimiocina 19 ( CCL19 ), y las metaloproteinasas -3, -10 y -13 en los tejidos de colon inflamados; c) mayor acumulación de macrófagos productores de interferón en los tejidos de colon afectados; d) aumento de la fosforilación del transductor de señales y activador de la transcripción 3 (es decir, STAT3 ) en las criptas del tejido de colon afectado; y e) reducción de la integridad de la mucosa del colon y de la función de barrera, como se deduce de los efectos de estudios in vitro sobre el impacto de la expresión del receptor BLT2 en la fuga de FITC-dextrano en células de riñón canino II Madin-Darby. Estos resultados sugieren que los receptores Blt2 normalmente funcionan para suprimir la inflamación del colon en ratones; basándose en su contenido de masa en los tejidos del colon afectados, 12-HHT parece al menos parcialmente responsable de mantener esta función mediante la estimulación de los receptores Blt2. [23] Un papel similar para el eje 12-HHT-BLT2 podría ocurrir en humanos y ser relevante para enfermedades como la colitis ulcerosa y la enfermedad de Crohn .
La inactivación del gen LTB4R1 proporciona una protección completa contra la inflamación de las articulaciones que se produce en un modelo de ratón de artritis reumatoide (artritis inducida por colágeno); la doble inactivación de los genes LTB4R1 y LTB4R2 no alteró la protección completa proporcionada por la inactivación de LTB4R1. [24] Se observó más evidencia del papel de BLT2 en la artritis en un modelo de artritis por transferencia de suero donde la pérdida de BLT2 provocó un debilitamiento de la inflamación y daño a las articulaciones. [25]
Por lo tanto, los estudios de knockout disponibles hasta la fecha asignan a los receptores BLT2 un papel protector en la atenuación de ciertas respuestas alérgicas e inflamatorias; este papel contrasta con la asignación de los receptores BLT1 como contribuyentes a ambos tipos de respuestas. [24] [26] Se necesitan más estudios para determinar si los receptores BLT2 protegen contra otras respuestas alérgicas e inflamatorias y si funcionan de manera similar en los humanos.
La sobreexpresión de los receptores BLT2 en ratones transgénicos Bltr2 mejora la capacidad de la inyección subcutánea de LTB 4 y 12-HETE para estimular la formación de nuevos vasos sanguíneos en la piel. Los estudios indican que las acciones de ambos ligandos fueron mediadas por los receptores Blt2 y que el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) estimuló la expresión de BLT2 y la producción de 12-HETE en las células endoteliales de la vena umbilical humana (HUVEC), y que la supresión del receptor BLT2 o de la 12-lipoxigenasa inhibió la angiogénesis inducida por VEGF en ensayos in vitro. [27] Estos resultados sugieren que los receptores BLT2 desempeñan un papel fundamental en el desarrollo de la neovascularización inducida por VEGF y son de particular interés para el papel de los receptores BLT2 en el crecimiento y la propagación de los cánceres y en la inflamación (véase más adelante).
Los mastocitos de médula ósea de ratón y los eosinófilos humanos exhiben respuestas de quimiotaxis in vitro a 12-HHT. [28] [29] Dado que ambos tipos de células están implicados en reacciones alérgicas, esto sugiere que los receptores BLT2 podrían contribuir a las respuestas alérgicas en ratones y humanos. Sin embargo, en un modelo de ratón de enfermedad alérgica de las vías respiratorias inducida por ovoalbúmina: a) 12-HHT y sus metabolitos acompañantes de ciclooxigenasa, prostaglandina E2 y prostaglandina D2 , pero no otros 12 metabolitos de lipoxigenasa o ciclooxigenasa mostraron un aumento estadísticamente significativo en los niveles de líquido de lavado broncoalveolar después del desafío con ovoalbúmina intratraqueal; b) solo 12-HHT, entre los ligandos activadores del receptor BLT2 monitoreados (es decir, LTB 4 , el estereoisómero 12( S ) de 12-HETE , y 15( S )-HETE) aumentó a un nivel capaz de activar los receptores BLT2; y c) los ratones knock out de BLT2 exhibieron una respuesta muy mejorada al desafío de ovoalbúmina. [30] Este estudio también encontró que la expresión de los receptores BLT2 se redujo significativamente en las células T CD4+ (que se sabe que median las reacciones alérgicas) tomadas de controles humanos asmáticos en comparación con no asmáticos. Por lo tanto, los receptores BLT2 suprimen la enfermedad alérgica de las vías respiratorias en ratones y pueden funcionar de manera similar en humanos. Estos estudios también permiten que los receptores BLT2 desempeñen funciones supresoras en otras enfermedades alérgicas.
El agonista del receptor BLT2 de alta afinidad, 12-HHT, estimula respuestas quimiotácticas in vitro en neutrófilos humanos , [29] lo que sugiere que este receptor, similar a los receptores BLT1, contribuye a la inflamación al reclutar neutrófilos sanguíneos circulantes a sitios de tejido alterados. [31] Sin embargo, otros estudios indican que el papel de los receptores BLT2 en la inflamación está dirigido a otros tipos de células que no sean los neutrófilos y difiere mucho del de los receptores BLT1. Las células HaCaT de queratinocitos de piel humana inmortalizadas responden a la radiación ultravioleta B (UVB) generando especies reactivas de oxígeno tóxicas que a su vez provocan que las células se vuelvan apoptóticas y finalmente mueran. Esta respuesta depende del receptor BLT2 ya que a) el tratamiento tópico de la piel de ratón con un antagonista del receptor BLT2, LY255283, protege contra la apoptosis inducida por la radiación UVB; b) Los ratones transgénicos que sobreexpresan BLT2 exhiben una apoptosis cutánea más extensa en respuesta a la irradiación UVB que los ratones de tipo salvaje ; [32] y c) el 12-HHT inhibe a las células HaCaT de sintetizar el mediador proinflamatorio, interleucina-6 (IL-6), en respuesta a la radiación UVB. [33] Además, los ratones knock out del receptor BLT2 presentan una respuesta inflamatoria intestinal más severa al sulfato de sodio de dextrano que los ratones de tipo salvaje o los ratones knock out del receptor BLT1 (ver Estudios knock out). Por lo tanto, los receptores BLT2 parecen responsables de suprimir la inflamación cutánea inducida por UVB y, a diferencia de los receptores BLT1, se oponen al desarrollo y, por lo tanto, reducen la gravedad de la colitis experimental en ratones.
La subfamilia Ras de pequeñas GTPasas funciona como proteínas de transducción de señales al transmitir la presencia de estímulos extracelulares para inducir la expresión de genes que regulan la supervivencia celular, la proliferación, la diferenciación, la adherencia a la matriz extracelular y la motilidad, así como factores que se liberan para promover la formación de nuevos vasos sanguíneos (es decir, neovascularización ) y para alterar la matriz extracelular; los tres miembros de esta subfamilia, KRAS , NRAS (es decir, homólogo del oncogén viral Neuroblastoma RAS ) y HRAS , desarrollan mutaciones puntuales para convertirse en oncogenes que impulsan el crecimiento y la propagación de aproximadamente el 20% de todos los cánceres humanos. [34] [35] Los niveles más altos de mutaciones Ras se encuentran en el adenocarcinoma de páncreas (90%), colon (50%) y pulmón (30%) [36] Bos, 1989).
Los oncogenes Ras pueden estimular el metabolismo del ácido araquidónico: a) HRAS, en una línea de células epiteliales intestinales de rata, y KRAS, en una línea de células epiteliales pulmonares de rata, regulan positivamente la expresión de COX2 y la síntesis de prostaglandinas; [37] [38] [39] b) HRAS induce 12-lipoxigenasa en las células de carcinoma epidermoide humano A431 ; [40] y c) HRAS estimula la expresión de 5-lipoxigenasa, proteína activadora de 5-lipoxigenasa , LTB 4 y receptores BLT2 en Rat2 y en líneas celulares de fibroblastos de rata , aumentando así la capacidad de formación de tumores de esta última línea celular en ratones atímicos. [41] Estos estudios sugieren que los metabolitos de la ciclooxigenasa, 5-lipoxigenasa y 12-lipoxigenasa, es decir, 12-HHT, LTB 4 y 12-HTE, respectivamente, pueden actuar a través de los receptores BLT2 para contribuir al crecimiento y la propagación de cánceres iniciados y/o oncogénicos Ras y posiblemente otros oncogenes. Esto está respaldado por los hallazgos de que BLT2 se expresa anormalmente en muchos cánceres humanos que sobreexpresan simultáneamente estas vías de metabolización del ácido araquidónico, a saber, adenoma folicular de tiroides , carcinoma de células renales , carcinoma de células transicionales de vejiga urinaria , carcinoma de células escamosas de esófago , adenocarcinoma de colon , el tipo de cáncer de ovario cistadenocarcinoma seroso y carcinoma de cuello uterino . [41] Otros estudios han implicado a BLT2 en estos y otros tipos de cáncer de la siguiente manera.
12-HHT estimula la línea celular de cáncer de próstata humano PC3 para activar varias vías de señalización pro-crecimiento y/o pro-supervivencia incluyendo proteína quinasa B , fosfoinosítido 3-quinasa , proteína quinasa C , proto-oncogen tirosina-proteína quinasa Src , y (al inducir la escisión proteolítica y liberación de un ligando para el receptor del factor de crecimiento epidérmico [EGFR] del HB-EGF ), EGFR. [42] Cuando se desprenden de las superficies, las células de cáncer de próstata no malignas cultivadas PWR-1E y PC3 mueren al activar vías de apoptosis suicida , una reacción denominada anoikis . Esto se acompaña de una mayor expresión de receptores BLT2, activación de NADPH oxidasa (NOX), aumentos en la producción mediada por NOX de especies reactivas de oxígeno (ROS) y activación inducida por ROS del factor de transcripción pro-supervivencia, NF-κB . La expresión ectópica y la estimulación de los receptores BLT2 por 12( S )-HETE o un agonista sintético del receptor BLT2, CAY-10583, inhibe mientras que la supresión génica por interferencia de ARNm o inhibición farmacológica por LY255283 mejora la respuesta anoikis de estas células al desprendimiento de la superficie. [17] A diferencia de las células PC-3, las líneas celulares de cáncer de próstata humano LNCaP y CWR22rv-1 requieren andrógenos exógenos para su supervivencia; esto imita la dependencia de andrógenos exhibida por la mayoría de los cánceres de próstata humanos en sus etapas tempranas no tratadas. Ambas líneas celulares sobreexpresan receptores BLT2 en comparación con la línea celular de próstata humana no maligna PWR-1E. El tratamiento con el antagonista del receptor BLT2, Ly255283, provocó que ambas líneas celulares se volvieran apoptósicas; además, la supresión del receptor BLT2 utilizando ARNm de interferencia provocó la apoptosis de las células LNCaP pero no de las PWR-1E. El efecto aparece debido a la pérdida de la generación de NOX4 inducida por BLT2 , la consiguiente activación de NF-κB inducida por especies reactivas de oxígeno y la expresión estimulada por NF-κB de los receptores de andrógenos. [43] 12-HETE también aumenta la supervivencia de las células PC-3 al ayudar a mantener altos niveles de proteína de retinoblastoma Rb fosforilada , un efecto que reduce la capacidad de la proteína de retinoblastoma para inhibir la síntesis de ADN y, por lo tanto, la división celular. [44] Finalmente, la 12-lipoxigenasa se sobreexpresa y la masa de 12-HETE es mucho mayor en el cáncer de próstata humano que en el tejido prostático normal cercano; [45]Estos hallazgos sugieren que los receptores BLT2 operan para promover la supervivencia, el crecimiento y la propagación del cáncer de próstata humano. Aún no está claro cuál de sus ligandos 12-HHT, LTB 4 y/o 12-HETE, si alguno, media la activación del receptor BLT2 en la enfermedad humana.
LTB 4 y 12( S )-HETE estimulan la invasividad en un ensayo de invasión de Matrigel in vitro de células de cáncer de vejiga urinaria 253 J-BV humanas altamente malignas; su actividad en este ensayo se inhibe completamente mediante una inhibición farmacológica o una supresión de los receptores BLT2 mediante siRNA. La expresión de 5-lipoxigenasa, proteína activadora de 5-lipoxigenasa , 12-lipoxigenasa (enzimas que sintetizan LTB 4 y 12( S )-HETE, respectivamente), así como LTB 4 y 12( S )-HETE, se elevó sustancialmente en estas células. El pretratamiento de estas células con un inhibidor de los receptores BLT2, redujo su capacidad de formación de tumores después de la inyección en ratones; las inyecciones intraperitoneales de LY255283 en los ratones también disminuyeron la capacidad de formación de metástasis de las células después de la inyección en la vejiga urinaria. Finalmente, la proteína del receptor BLT2 fue sobreexpresada por los tejidos malignos del cáncer de vejiga urinaria humano y esta expresión se asoció positivamente con la gravedad de este cáncer. La acción de los receptores BLT2, similar a sus acciones en las células del cáncer de próstata, pareció involucrar la activación de los receptores de la vía NOX, especies reactivas de oxígeno, NK-κB. [46] [47] Estos resultados sugieren que los receptores BLT2 contribuyen a la agresividad y progresión del cáncer de vejiga urinaria humano.
En comparación con las líneas celulares de cáncer de mama humano no maligno IMR-90 y MCF-10A inmortalizado pero no maligno, las líneas celulares de cáncer de mama humano MCF-7 , ZR-75-1 , T47-D , MDA-MB-231 , MDA-MB-468 , MDA-MB-453 y SK-BR-3 (ver lista de líneas celulares de cáncer de mama ) sobreexpresan ARNm y proteína BLT2 pero muestran relativamente poca expresión de ARNm BLT1; el tratamiento de las células malignas pero no de las no malignas con un antagonista de BLT2, LY255283, pero no con un antagonista de BLT1, U75302, bloqueó la proliferación de las células en cultivo. LY255283 causó simultáneamente apoptosis en las células malignas MDA-MB-468 y MDA-MB-453 con receptor de estrógeno negativo , pero no en las células malignas MCF-7 y T47-D con receptor de estrógeno positivo . Dado que LY255283 también inhibe el receptor BLT1, la acción inhibidora de la apoptosis de los receptores BLT2 también se demostró al mostrar que la supresión transitoria de genes inducida por ARNi de los receptores BLT2 causó apoptosis en la línea celular MDA-MB-468 . Los receptores BLT2 se vinculan a la activación de la NADPH oxidasa , NOX1 (un sintetizador del anión superóxido que es una especie reactiva de oxígeno que, cuando se produce en exceso de manera inapropiada, causa muerte celular y daño tisular); el aumento concomitante de la producción de especies reactivas de oxígeno y la activación de NF-κB parecieron ser responsables de estos efectos dependientes del receptor BLT-2. [48] El lipopolisacárido (es decir, la endotoxina ) estimula las células MDA-MB-231 y MDA-MB-435 para aumentar su invasividad, como se determinó con ensayos de cámara de invasión de Matrigel in vitro; Este efecto aparece debido a su capacidad para inducir la sobreexpresión de los receptores BLT2, las enzimas que producen LTB 4 y 12( S )-HETEs, y los metabolitos clave de estas enzimas, LTB 4 y 12( S )-HETE; además, la unión de estos últimos metabolitos a las células que sobreexpresan los receptores BLT2 conduce a la activación de NF-κB. [49] Estos resultados indican que la interacción 12-HETE/BLT2 reduce la supervivencia de las células mamarias humanas cultivadas al estimular la producción de especies reactivas de oxígeno y la activación de NF-κB.
Se propone que la transición epitelial-mesenquimal , un proceso por el cual las células epiteliales asumen un fenotipo mesenquimal, ocurre en un subconjunto de células en varios tejidos cancerosos para promover su movimiento desde un sitio tumoral hacia los vasos sanguíneos y linfáticos y, de ese modo, formar metástasis distantes. El cáncer de mama humano a menudo expresa y parece ser promovido por las proteínas Ras (ver carcinogénesis y la subfamilia Ras ). La expresión forzada de Ras oncogénico en células de cáncer de mama humano MCF-10A cultivadas regula notablemente al alza los receptores BLT2 y esta regulación al alza parece esencial para la capacidad de promoción de la transición epitelial-mesenquimal del factor de crecimiento transformante beta en estas células; los receptores BLT2 en estas células parecen estimular la producción de especies reactivas de oxígeno y la activación de NF-κB y, por lo tanto, pueden contribuir a la capacidad metastásica del cáncer de mama. [50]
Dado que los receptores BLT2 están significativamente elevados en el tejido de cáncer de mama humano en comparación con el tejido mamario no canceroso, [48] los estudios citados, cuando se toman en conjunto, indican que los receptores BLT2 promueven el crecimiento maligno, la invasividad, la metástasis y posiblemente la resistencia a los fármacos contra el cáncer no solo de las células de cáncer de mama humano cultivadas sino también del cáncer de mama humano.
En comparación con las células de cáncer de ovario humano CAOV-3, las células de cáncer de ovario humano SKOV-3 y CAOV-3 sobreexpresan los receptores BLT4, las enzimas metabolizadoras LTB 4 y 12-HETE, dos metabolitos clave de estas enzimas, LTB 4 y 12-HETE, y el STAT3 activado también son mucho más invasivos en modelos animales. La inhibición de los receptores BLT2 por LY255283 pero no de los receptores BLT1 por U75302 y la supresión de los receptores BLT2 por tratamiento con ARNi redujeron la expresión de NOX4 (es decir, NADPH oxidasa 4, las especies reactivas de oxígeno producidas por esta enzima, STAT3 activado, la enzima promotora de invasión, MMP 2 , y la invasividad in vitro (ensayo de invasión Matrigel) de las células SKOV-3 y CAOV-3. LY255283 también inhibió la metástasis peritoneal de las células SKOV-3 inyectadas intraperitonealmente en ratones atímicos. [51] Estos estudios indican que la estimulación de los receptores BLT4 por LTB 4 y/o 12-HETE opera a través de una vía NOX4-especies reactivas de oxígeno-STAT-3-MMP2 para promover la metástasis de las células cancerosas SKOV-3 y CAOV-3 en ratones y puede actuar de manera similar para promover metástasis en el cáncer de ovario humano.
Se encontró que la proteína y el ARNm del receptor BLT2 estaban notablemente elevados en neoplasias intraepiteliales pancreáticas avanzadas humanas en sus sitios primarios del páncreas, así como en los sitios de metástasis de los ganglios linfáticos ; el ARNm para BLT1 también estaba elevado en estos tejidos, pero en un grado ~5 veces mayor. El ARNm de ambos receptores también se expresó en una amplia gama de líneas celulares de cáncer de páncreas humano con el ARNm del receptor BLT1 ~2 veces mayor que el de BLT2. La sobreexpresión estable de BLT2 en las líneas celulares de cáncer de páncreas humano AsPC-1, Colo357 y PANC-1 aumentó las tasas de crecimiento in vitro de estas células; los agonistas específicos de BLT2 también estimularon el crecimiento de las células Colo367 y Panc-1. [52] Los receptores BLT2 mediaron la migración in vitro de las células Panc-1. [53] Estos resultados permiten que los receptores BLT2 puedan contribuir al crecimiento maligno y la metástasis del cáncer de páncreas humano.
La proliferación de células de adenocarcinoma colorrectal epitelial humano Caco-2 en cultivo fue estimulada por 12-HETE e inhibida por un inhibidor algo selectivo de la 12-lipoxigenasa, la baicaleína ; el efecto estimulante de 12-HETE apareció debido a su interacción con los receptores BLT2 basados en los efectos de los inhibidores farmacológicos. [54]
El carcinoma de células escamosas del esófago sobreexpresa los receptores BLT2. [55]
El receptor BLT2 media el comportamiento de rascado inducido por la inyección intradérmica de 12-HETE en ratones. [56]
El LY255283 se ha presentado como un antagonista "selectivo" del receptor BLT2. Sin embargo, este compuesto también es un agonista del receptor BLT1 y, por lo tanto, no se puede utilizar para discriminar entre estos dos tipos de receptores. [31] En todos los estudios que utilizaron LY255283 citados anteriormente, se utilizaron otros métodos, como la inhibición del ARNi, junto con LY255283 para identificar la dependencia de BLT2. Actualmente, no hay informes sobre antagonistas selectivos del receptor BLT2.
Este artículo incorpora texto de la Biblioteca Nacional de Medicina de los Estados Unidos , que se encuentra en el dominio público .